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东北鹤虱中平滑肌松弛作用有效部位的筛选 *
[摘 要]目的:对东北鹤虱中具有平滑肌松弛作用的有效部位进行筛选 。方法:用大孔树脂对东北鹤虱的水提醇沉
液进行分离筛选 ,得到 6种溶液 ,分别以试管法及薄层色谱法进行鉴定 ,并以兔回肠收缩力为指标 ,进行有效部位的
追踪。结果:东北鹤虱中的有机酸 ,鞣质及香豆素类物质对平滑肌的收缩有抑制作用 ,以后者的作用最强 。结论:本
法从东北鹤虱中筛选出具有平滑肌松弛作用的有效部位为有机酸 ,鞣质及香豆素类物质 。
[关键词] 东北鹤虱;香豆素;有机酸;鞣质;回肠平滑肌;大孔树脂
孟 林 ,周 晶 ,尹永强 ,高建华
(天津医科大学基础医学院药理教研室 ,天津 300070)
*天津市自然科学基金资助项目(003608511)
作者简介:孟林(1953-), 女 ,副教授 ,学士学位 ,研究方向:中药药
理;周晶(1956-),女 ,教授 ,学士学位,研究方向:天然药物化学。
[中图分类号] R965.1 [文献标识码] A [文章编号] 1006-8147(2002)03-0279-03
Screening of active components from Lappula echinata Gilib
M ENG Lin ,ZHOU Jing ,YIN Yong-qiang ,GAO Jian-hua
(Department of Pharmacology , Tianjin M edical University , Tianjin 300070 , China)
ABSTRACT Objective:Screening on the ef fective parts of Lappula echinata Gilib w hich can
inhibit the mo tili ty of smoo th muscle.Methods:Six parts f rom Lappula echinata Gilib w ere
ex tracted by the applica tion of macropore adsorbed resin and identif icated by tube r method and
T LC method.The contractile force w as chosen as the main index to screen the effect ive parts of
Lappula echinata Gilib.Results:It indicates that LEG contains o rg anic acids , tannins and
coumarins , which can inhibi t the contraction of isolated i leum of rabbi t.T he coumarins are the
most ef fective.Conclusion:Organic acids , tannins and coumarins as ef fective parts of Lappula
echinata Gilib w ere screened.
KEYWORDS Lappula echinata Gilib;Coumarins;O rganic acid;Tannic acid;Iso lated ileum ;
Macropore adso rbed resin
东北鹤虱 (Lappula echinata Gilib , LEG)为
紫草科植物东北鹤虱的果实 ,盛产于我国华北 、东北
等地区。其味苦 、辛 、平 , 入脾 、胃 、肝三经 , 具有驱
虫 [ 1] 、抗炎 [2 ] 、抗腹泻 [ 3] 的作用 , 以往实验已证明
LEG 有平滑肌松弛作用 [ 3] ,本文以兔回肠的收缩力
为指标对 LEG 水提醇沉物中具有平滑肌松弛作用
的有效部位进行筛选 。
1 材料
1.1 药材与动物 东北鹤虱 (Lappula echina ta
Gilib , LEG)由天津医科大学生药学教研室张富娟
副教授鉴定 , 实验采用大耳白兔 , 雌雄兼用 , 体重
2 ～ 2.5 kg , 由中国人民解放军军事医学科学院实验
动物中心提供。
1.2 试剂与药品 大孔树脂:AB-8 , 购于天津南
开大学化工厂;无水乙醇 、石油醚 、氯仿等均为分析
纯 ,购自天津市化学试剂二厂。
2 方法与结果
2.1 东北鹤虱水提醇沉液的提取分离及鉴定 [4 , 5]
取 LEG 生药 500 g 制备水提醇沉液 , 得到溶液 A ,
上柱洗脱得到 6种溶液 ,详见流程图(图 1)[ 4 ,5]。
将溶液 A 在 10×10的硅胶板上点样使成条
状 ,以正丁醇∶醋酸∶水= 4:1:1 的展开剂斜上行
展开 ,以不同显色剂分区显色。结果显示:不含甾体 、
三萜皂苷 、黄酮类及蒽醌类物质 , 含有机酸 , 酚类及
糖苷类物质 。
第 8 卷 天津医科大学学报 Vo l.8
第 3 期 J TM U 2002 No.3
图 1 东北鹤虱水提醇沉液的提取分离
将溶液 A 分离得到的 6种溶液进行试管反应 ,
结果见表 1。
表 1 溶液 A 分离出 6种溶液的试管反应结果
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1 2 3 4 5 6
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M olish 试剂
硅钨酸试剂
碘化铋钾试剂
碘—碘化钾试剂
三氯化铁试剂
蛋白明胶试剂
盐酸镁粉试剂
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加酸沉淀
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(下转第 308页)
280
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药材 500g
D.W 煎煮并过滤(2次)
滤液
减压浓缩
浓缩液
95%乙醇冰箱静置后抽滤 ,乙醇洗 3次
沉淀 滤液
减压致干加 D.W
溶液 A
上柱洗脱
流出液 水洗液 30%乙醇 50%乙醇 70%乙醇 90%乙醇
1号液 2号液 3号液 4号液 5号液 6号液
图 2 LEG-CM 提取液的 TLC鉴定
一次展开剂 苯∶乙酸乙酯=4∶1
二次展开剂 正丁醇∶乙酸乙酯∶水=4∶1∶1
结果显示:除 5 、6号外 ,其他几个流分都含有酚
类物质;3号流分加酸出现沉淀 , 测定其 pH 值为
3 ～ 4 , 可能含有酸性成分 , 如有机酸等;3 、4号可能
含有鞣质;6号有特殊香甜气味 ,可能是香豆素类 。
将溶液 A 分离得到的 6种溶液进行薄层色谱
鉴定(T LC)[ 6] ,采用高效硅胶板 ,展开剂:苯∶乙酸
乙酯=4:1 ,显色:280 nm 处紫外灯 ,溴酚蓝 , NaOH
溶液 ,三氯化铁。结果显示:3号液中含有机酸(展开
后用溴酚蓝显色呈黄色), 6号液有天蓝色荧光 , 综
上分析 6号液为香豆素。
2.2 有机酸的提取及鉴定 取 LEG 生药 50 g , 于
乳钵中以 0.5%的氨水研磨 , 过滤得液体 , 调节其
pH=3 ,所得沉淀物加 50%乙醇提取 ,得溶液 B 。
将溶液 B 于高效硅胶板上点样 , 以苯∶乙酸乙
酯=4∶1的展开剂上行展开 , 溴酚蓝显色 , 表明溶
液 B 中含有机酸。
2.3 鞣质的提取及鉴定 取 3号液 8 ml , 氯仿萃
取 ,取水层加蛋白明胶 ,其中沉淀以丙酮回流得溶液
C 。
将溶液 C 加蛋白明胶试液 , 出现白色沉淀。与
三氯化铁试液呈墨绿色;TCL 鉴定 (展开条件同
上), 以三氯化铁显色。结果表明溶液 C 中含有鞣
质。
2.4 香豆素的提取及鉴定 取 LEG生药 80 g , 石
油醚脱脂后氯仿连续回流 7 h , 取氯仿液 , 回收氯仿
后得油状物 ,将其溶于乙醇并过滤得溶液 D 。
溶液 D 的异羟肟酸铁反应在试管中现象不明
显 ,在硅胶板上显红色 ,说明含有内酯类物质;Emo-
erson反应呈阴性 , 说明香豆素 6位无取代或不含
香豆素。T LC 鉴定(展开条件同上),以重氮化试剂
显色 , 呈棕红色 , 见图 2。由于其是内酯类 , 且在
280 nm 处呈蓝色荧光 , 并有特殊的香甜气味 , 推断
溶液 D含香豆素类。
2.5 活性部位的筛选
2.5.1 活性部位筛选方法 取禁食 24 h 的兔 , 击
头部致昏后取回肠段(1.5 ～ 2.0 cm),置于含 40 m l
台氏液的麦氏浴槽中 ,一端固定于通气钩 ,另一端与
张力换能器连接 , 持续通入氧气 , 保持温度恒定在
37°C , 平衡 0.5 h开始实验 , 平滑肌张力变化通过
张力换能器记录到 SJ-II I型生理记录仪。以平滑
肌张力为指标对 LEG 中具有平滑肌松弛作用的有
效部位进行筛选。
2.5.2 活性部位筛选结果
2.5.2.1 溶液 A 对平滑肌的收缩有抑制作用 , 且
随着剂量的增加而抑制作用加强 。以其作为分离对
象进一步分离 ,得到 6个溶液 ,其中 3 、5和 6号液对
平滑肌收缩的抑制作用比较明显 , 2号液对平滑肌
的收缩有增强的作用 , 4号液的作用则不明显 。
2.5.2.2 有机酸 、鞣质提取液及香豆素溶液对平滑
肌的生理收缩均有抑制作用 , 而且还可以对抗乙酰
胆碱引起的平滑肌收缩 ,其中鞣质的作用较弱 ,香豆
素作用最强。
3 讨论
[ 1]
[ 2]
[ 3]
[ 4]
(2001-12-11收稿)
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2.2.2 结构效度 用相关法计算各项测验间的相
关 , 7项分测验之间相关系数均不高。其中城市儿童
JPB各分测验的相关系数分布在-0.29至 0.36之
间 , 农村的结果与城市相似 , 分布于-0.30至 0.40
之间 。表明 JPB 各项测验彼此独立 。符合测验设计
要求 。
2.2.3 内容效度 从 JPB各年龄组的均值可以看
出(见表 3),随着年龄的增长 ,各项测验成绩变化有
一定趋势 ,经差异显著性检验 ,绝大多数有统计学意
义 ,符合儿童成长规律[ 4]。
2.2.4 实证效度 现经实证研究表明 ,在缺碘病区
儿童轻度智低者(IQ=50 ～ 69)中 JPB 的异常率为
57.8%, 边缘智力者 (IQ =70 ～ 79)异常率为
25.1%, 随 IQ 的增高 ,其他智力水平异常则无。非
病区轻度智低者中 JPB异常占 25%。其他智力水平
无异常。反映 JPB具有较高的检出率。
另外 , JPB 还可用于学习困难儿童的精神运动
能力的研究和感觉统合训练疗效观察中 。表明 JPB
能揭示被研究对象的神经功能方面存在的一些内在
问题。
从以上结果可以看出 , JPB测验有较好的信度
和效度 , 可以在亚临床克汀病的诊断中起到很好的
作用。
(上接第 288页)
参考文献:
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[ 3]
[ 4]
[ 5]
[ 6]
性及基底板增厚与正常相比较仅为轻微改变。而细
胞坏死和脱落两项指标均未见明显改变。同时 , 在
血管腔中嗜中性白细胞贴壁 、 脱颗粒现象以及纤维
素凝结都极为少见或未见 ,而细胞破损的碎片 ,也明
显减少 。这一结果与 AMRS 对大鼠内毒素休克肺的
内皮细胞的保护作用是相一致的 [ 4]。可以初步得出
结论:活血化瘀药(AM RS)对肾微血管内皮细胞有
明显保护作用 , 其作用超过地塞米松对内皮细胞的
保护作用。
[ 1]
308
参考文献:
(2002-06-18收稿)
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大孔树脂是基于分子筛和极性吸附的原理达到
对物质分离的目的。本实验使用大孔树脂成功的对
东北鹤虱水提醇沉液进行提取分离 ,得到 6种溶液 ,
初步鉴定 3 、4 、6号液为有机酸 、鞣质及香豆素 。活性
实验表明 , 三者均可使兔回肠平滑肌松弛 。分别按
常规提取方法对三种物质进行进一步提取鉴定 , 并
进行活性测定 ,结果与上述基本一致 。研究显示:从
东北鹤虱中筛选出的有机酸 、 鞣质及香豆素具有抑
制平滑肌收缩的作用 , 其中以香豆素的作用最明
显 。本实验结果为该药的深入研究和开发奠定了基
础 。
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