全 文 ：收稿日期:2011 － 02 － 10
基金项目:国家自然科学基金项目资助(30772770)
作者简介:刘欣欣(1987 －) ，女，硕士研究生，主要研究方
向:药用植物资源与质量，E － mail:shuibing －
qingwu@ 163． com
* 通讯作者:秦民坚，教授。E － mail:minjianqin@ 163． com
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2011． 06． 017
紫外分光光度法测定木棉叶中总黄酮的含量
刘欣欣1，2，王国凯1，2，秦民坚1，2*
(1．中国药科大学中药资源学研究室，江苏 南京 211198;2． 中国药科大学教育部现代中药重点实验室，江苏 南京 211109)
摘 要 目的:测定木棉叶中总黄酮的含量。方法:采用紫外分光光度法在 258 nm 处测定吸光度。结果:对照品
溶液在 1． 32 ～ 13． 2 μg /mL 范围内线性关系良好(r = 0． 9996 ) ，平均加样回收率为 100． 83 %，RSD = 3． 13 %。结
论:该方法简便、灵敏、准确，可用于木棉叶的质量控制。
关键词 木棉叶;总黄酮;紫外分光光度法
中图分类号:R931． 71 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2011)06 － 0070 － 03
Determination of Total Flavonoids in Leaves of Bombax ceiba L． by
UV Spectrophotometry
Liu Xinxin1，2，Wang Guokai1，2，Qin Minjian1，2*
(1． Department of Resources Science of Traditional Chinese Medicines，China Pharmaceutical University，
Nanjing 211198，China;2． Key Laboratory of Modern Traditional Chinese Medicines of Ministry of Edu-
cation，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China)
Abstract Objective:Determine the contents of total flavnoids in leaves of Bombax ceiba L ． Method:
Determine the absorbance at the wavelength of 258 nm by UV spectrophotometry． Result:Linear relation-
ship was good in the range of 1． 32 ～ 13． 2 μg /mL (r = 0． 9996) ，the average recoveries was 100． 83 %，
RSD =3． 13 % ． Conclusion:The method is simple，sensitive，accurate，and could be used to control
the quality of leaves of Bombax ceiba L．
Key words Bombax ceiba L． ;total flavonoids ;UV spectrophotometry
木棉(Bombax ceiba L．)为木棉科木棉属植物，
别名攀枝花，红棉，英雄树，产于我国广东、广西、云
南、四川、台湾等地［1］，生于山地阳坡村边、路旁［2］。
民间用其花、皮与根入药，用来清热利湿、祛风除湿、
活血消肿、散结止痛、治疗慢性胃炎等［3］。其中木
棉花已被 2010 版药典［4］收载。关于木棉花、树皮、
根的研究已多有报道［5］。但对木棉叶的研究文献
报道较少。木棉叶中丰富的黄酮成分，具有一定的
药用价值。本文建立紫外检测木棉叶中总黄酮含量
的方法，并测定不同产地木棉叶中总黄酮的含量，为
该植物的质量评价和开发利用提供依据。
1 仪器、材料与试剂
木棉叶经中国药科大学中药学院秦民坚教授鉴
定为木棉科木棉属植物木棉(Bombax ceiba L．)的干
燥叶，粉碎，过 60 目筛;芒果苷对照品为本实验室自
制，经 NMR、HPLC 测定，纯度大于 98%;其余试剂
均为分析纯。
UV － 2450 紫外分光光度计(日本岛津) ;Sarto-
rius 电子天平(北京赛多利斯天平有限公司) ;
KH5200DB型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪
器有限公司)。
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第 30 卷第 6 期
2011 年 12 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Resources
Vol． 30 No． 6
Dec． 2011
2 实验方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备
取芒果苷对照品 2． 2 mg 置 50 mL 容量瓶中用
甲醇溶解并定容至刻度，得 44 μg /mL 的芒果苷对
照品溶液。
2． 2 供试品溶液的制备
取本品(海南乐东)粉末(粉碎，过 60 目筛)约 1
g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入 70% 乙醇 20
mL，称重，于 25 ℃下 100 Hz超声提取 40 min，补足
失重，滤过，残渣再加 70% 乙醇 20 mL，称重，25 ℃
下 100 Hz超声提取 40 min，补足失重，滤过，合并两
次滤液。精密量取续滤液 1 mL置 50 mL容量瓶中，
用甲醇定容至刻度，摇匀，吸取 1 mL 溶液置 10 mL
容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2． 3 测定波长的选择
分别取稀释一定倍数的芒果苷对照品溶液和供
试品溶液，在 200 ～ 400 nm 波长范围进行光谱扫描，
上述两种溶液均在波长 258 nm处有最大吸收峰，故
选择 258 nm为检测波长。
2． 4 标准曲线的制备
精密吸取上述对照品溶液 0． 3，0． 5，1． 0，1． 5，
1． 8，2． 0，3． 0 mL 置 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释
至刻度，摇匀。在紫外可见分光光度计上于 258 nm
处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标
绘制标准曲线。进行回归分析，得回归方程:y =
0． 067 40x － 0． 002 97，r = 0． 999 6，见图 1。
图 1 标准曲线
2． 5 提取方法的选择
称取木棉叶(海南乐东)粉末(过 60 目筛)约
1． 0 g，精密称定，分别按下述 3 种方法提取: (1)超
声提取法:加 70%乙醇 25 mL，称重，超声提取 1 h;
(2)热回流提取法:加 70%乙醇 25 mL，称重，80 ～
90 ℃水浴回流提取 2 h;(3)索氏提取法:加 70%乙
醇 25 mL，称重，采用索氏提取器于 80 ～ 90 ℃水浴
回流提取 2 h。
分别补足失重，滤过，按 2． 2 节的方法制备成供
试品溶液后测定吸光度，并计算含量，结果超声提取
法与热回流提取法效果相近，远高于索氏提取法，故
选取较为简便的超声提取法。
2． 6 正交实验法优化总黄酮的超声提取工艺
本实验选定提取时间 (min)、乙醇浓度 (%)、乙
醇体积 (mL)、提取次数 (次)作为考察因素，每个因
素各取 3个水平，见表 1。应用 L9(3
4)正交表安排实
验，实验数据见表 2。通过正交试验和数据处理发
现，影响木棉叶总黄酮提取率的因素主次顺序为 D ＞
A ＞ B ＞ C，综合考虑，最终确定条件为 A1B3C2D2，即
乙醇浓度为 70 %，超声提取时间为 40 min，乙醇体积
为 20 mL，25 ℃下 100 Hz超声提取 2次。
表 1 提取工艺因素水平
水平
因 素
A (min) B (%) C (mL) D (次)
1 40 50 18 1
2 50 60 20 2
3 60 70 25 3
表 2 提取工艺正交试验结果
序号
因 素
A B C D
含量(%)
1 1 1 1 1 8． 60
2 1 2 2 2 10． 53
3 1 3 3 3 10． 62
4 2 1 2 3 10． 07
5 2 2 3 1 8． 77
6 2 3 1 2 10． 29
7 3 1 3 2 9． 78
8 3 2 1 3 9． 85
9 3 3 2 1 8． 57
K1 9． 917 9． 483 9． 580 8． 647
K2 9． 710 9． 717 9． 723 10． 200
K3 9． 400 9． 827 9． 723 10． 180
R 0． 517 0． 344 0． 143 1． 553
2． 7 精密度试验
取同一供试品溶液，连续测定 6 次，结果 RSD
为 0． 82%，表明仪器的精密度良好。
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第 6 期 刘欣欣，等:紫外分光光度法测定木棉叶中总黄酮的含量
2． 8 重复性试验
取同一样品 6份，每份取样量约 1 g，精密称定，按
供试品的制备方法制成供试品，测定，结果平均含量为
11． 22%，RSD为 2． 35%，表明该方法重复性良好。
2． 9 稳定性实验
取同一供试品溶液，分别于 0，10，30，60，90
min测定吸光度，结果 RSD 为 1． 65%，表明供试品
溶液在 90 min内稳定性良好。
2． 10 回收率实验
取已知含量的样品粉末，6 份，各约 0． 5 g，分别
精密加入芒果苷对照品适量，按供试品溶液的制备
方法项下方法操作，制备供试品溶液，依法测定吸
光度，计算回收率，实验数据见表 3，结果平均回收
率为 100． 83%，RSD为 3． 13%。
表 3 加样回收率试验结果 (n = 6)
序号
称样
量(g)
样品含
量(mg)
加入量
(mg)
测得
量(mg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 0． 5013 56． 25 59． 70 114． 30 97． 24
2 0． 5015 56． 27 59． 70 115． 48 99． 18
3 0． 5012 56． 23 59． 70 118． 88 104． 94 100． 83 3． 13
4 0． 5011 56． 22 59． 70 118． 60 104． 49
5 0． 5012 56． 23 59． 70 115． 66 99． 55
6 0． 5012 56． 23 59． 70 115． 68 99． 58
2． 11 样品含量测定
取 20 批不同产地木棉叶样品，按供试品溶液的
制备方法项下方法操作，制备供试品溶液，测定，结
果见表 4，不同来源木棉叶中总黄酮的含量在 7． 02
～ 21． 00 %之间。
3 讨 论
木棉叶中的总黄酮成分主要为芒果苷，且样品
和芒果苷对照品均在 258 nm处有最大吸收，结合相
关文献［6］，本实验以芒果苷为对照品，采用直接测
定 法对木棉叶中的总黄酮进行含量测定。
通过对提取方法进行考察，结果表明，超声提取
和热回流提取方法比索氏提取效率高，考虑到热回
流方法较为费时，且热回流得出总黄酮含量与超声
提取得出的含量相差不大，而超声提取方法简便、易
行，因此采用了超声提取方法。
通过正交试验对超声提取方法工艺进行了优
化，综合考虑，得出 A1B3C2D2 为最优的试验条件，
即加入乙醇浓度为 70%，乙醇的体积为 20 mL，提取
时间为 40 min，25 ℃下 100 Hz提取 2 次。此方法
表 4 不同样品的测定结果 (n = 3)
产地 采集时间 含量(%)
广东茂名 2010． 8 11． 50
广东广州 2010． 5 9． 66
广东广州 2010． 8 11． 24
广东广州 2010． 9 9． 81
广东广州 2010． 10 9． 62
广西南宁 2010． 11 11． 55
广西南宁 2010． 10 7． 96
广西田阳 2010． 9 6． 85
广西钦州 2010． 9 7． 02
广西武宣 2010． 9 11． 99
广西马山 1 2010． 9 10． 24
广西马山 2 2010． 9 8． 22
广西马山 3 2010． 9 9． 63
广西桂林 2010． 10 8． 74
福建厦门 2010． 7 7． 10
云南红河 2010． 5 13． 10
云南红河 2009． 7 11． 76
海南海口 2010． 9 13． 45
海南海口 2010． 11 21． 00
海南乐东 2010． 8 11． 22
精密度 RSD为 0． 82%，重复性 RSD值为 2． 35%，平
均加样回收率为 100． 83%，RSD 为 3． 13%，稳定性
RSD为 1． 65%，在 90 min内稳定性良好。该方法具
有操作简单方便、稳定性好、精密度高、准确可靠等
优点，可为木棉叶总黄酮研究和应用提供参考。
由表 4 看出，不同来源的木棉叶总黄酮含量最
高的达 21． 00%，而最低仅为 7． 02%，二者相差 3
倍。由此可看出木棉叶中总黄酮含量受产地及采收
季节影响较大。但不同来源木棉叶中总黄酮含量均
较高，说明其具有较好的开发潜力，目前对木棉叶研
究还很不深入，因此应逐步加强对其化学、生药学、
药理学的研究，推动其开发的深度和广度。
参考文献:
［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会． 中国植物志:第四十九卷
第二分册［M］． 北京:科学出版社，1984，108．
［2］ 《全国中草药汇编》编写组． 全国中草药汇编(上册) ［M］． 北
京:人民卫生出版社，1975:177 － 178．
［3］ 江苏新医学院． 中药大辞典(上册) ［M］． 上海:上海科学技
术出版社，1975，364．
［4］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典(一部) ［S］． 北京:中
国医药科技出版社，2010:59 － 60．
［5］ 齐一萍，郭舜民． 木棉的化学成分与药理作用研究［J］． 福建
医药杂志，2002，24 (3) :119 － 120．
［6］ 袁崇均，王 笳，陈 帅，等． 川射干总黄酮含量测定方法的
比较研究［J］． 四川中医，2009，27 (8) :58 － 59．
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 30 卷