全 文 ：SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化
夏 楠1，王耀文1，韩瑞霞1，李艳琴1* ，王安虎2，蔡光泽2
(1．山西大学生物技术研究所，化学生物学与分子工程教育部重点实验室，山西太原 030006;2．西昌学院，四川西昌 615013)
摘要 ［目的］研究 SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化。［方法］采用交互正交设计 L27(3
13)对苦荞 SRAP-PCR反应体系进行
了 5因素(Mg2 +、dNTP、Taq酶、模板 DNA和引物)3水平优化筛选，比较了非变性和变性 PAGE检测方法，并进行了 DYCZ-24F与 DYCZ-
20C 2种电泳操作系统的对比试验。［结果］4个单因素(Mg2 +、dNTP、Taq酶和引物)和 2个交互作用(Mg2 + × dNTP、Mg2 + × Taq酶)对苦
荞 SRAP-PCR有极显著影响;最佳反应体系为:20 μl总体积，Mg2 + 1． 5 mmol /L，dNTP 0． 2 mmol /L，Taq酶 1． 5 U，模板 DNA 40 ng，引物
0. 25 μmol /L，10 ×缓冲液 2 μl。运用该体系对 7份苦荞材料进行扩增，扩增条带清晰、多态性高、重复性好。将扩增产物进行非变性与
变性 PAGE和 2种电泳操作系统检测，结果显示非变性 PAGE、DYCZ-24F操作系统更适合于 SRAP的分析。［结论］为今后构建苦荞
SRAP遗传图谱奠定了基础。
关键词 苦荞;SRAP-PCR;交互正交设计;变性 PAGE;非变性 PAGE
中图分类号 Q811． 9 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)01 －00044 －05
Optimization of the Conditions of SRAP Molecular Marker Used in Analysis of Fagopyrum tataricum
XIA Nan et al (Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering of the Ministry of Education，Institute of Biotechnology，Shanxi
University，Taiyuan，Shanxi 030006)
Abstract ［Objective］The aim was to investigate the optimal conditions of SRAP molecular marker used in the analysis on Fagopyrum tataricum
(L．)Gaertn．［Method］SRAP-PCR amplification system on Fagopyrum tataricum was optimized by interactive orthogonal design L27(3
13)in 5 el-
ements (Mg2 +，dNTP，Taq DNA polymerase，template DNA and primer)at 3 levels． And the non-denaturing and denaturing PAGE detection
methods were compared． The comparative test of DYCZ-24F and DYCZ-20C electrophoresis operating systems was carried out．［Result］The
effects of four single － factor (Mg2 +，dNTP，Taq DNA polymerase and primer)and two interactions (Mg2 + × dNTP，Mg2 + × Taq DNA polymer-
ase)on tartary buckwheat SRAP-PCR were significant． An optimal reaction system was established containing 1． 5 mmol /L Mg2 +，0． 2 mmol /L
dNTP，1． 5 U Taq DNA polymerase，40 ng DNA，0． 25 μmol /L primer and 2 μl 10 × buffer． Seven samples of tartary buckwheat were amplified u-
sing this system，and electrophoresis results showed clear bands，high level of polymorphism and good reproducibility． The PCR products were test-
ed by denaturing and non － denaturing PAGE，and the results showed that the non-denaturing PAGE，DYCZ-24F operating system was more suit-
able for SRAP analysis．［Conclusion］This study established a foundation for the construction of SRAP genetic map of tartary buckwheat．
Key words Fagopyrum tataricum;SRAP-PCR;Interactive orthogonal design;Denaturing PAGE;Non-Denaturing PAGE
基金项目 国家自然科学基金项目(30771310)。
作者简介 夏楠(1985 － ) ，男，山西太原人，硕士研究生，研究方向:植
物分子遗传。* 通讯作者，副教授，从事植物、微生物分子
生物学研究，E-mail:yanqin@ sxu． edu． cn。
收稿日期 2010-10-18
苦荞［Fagopyrum tataricum(L．)Gaertn］是一种起源于中
国的粮药兼备资源，不但营养均衡，而且含有其他粮食作物
稀缺或不具备的药用成分，能有效抑制葡萄糖苷酶和淀粉酶
活性［1 －2］，具有预防糖尿病发生、降低血糖、调节血脂和血压
的作用［3 －5］。
序列相关扩增多态性(Sequence-related Amplified Poly-
morphism，SRAP)是一种新型的基于 PCR 的分子标记技术，
由美国加州大学蔬菜作物系 Li 与 Quiros于 2001 年提出，其
原理是利用基因外显子区 G、C 含量丰富，而内含子里 A、T
含量丰富的特点设计引物，对开放阅读框 ORFs进行扩增，因
不同物种的内含子、启动子之间的间隔长度不等而产生多态
性［6］。该方法具有操作方便快速、成本较低、多态性丰富等
优点，广泛应用于遗传图谱构建及 QTL分析［7 －9］、遗传多样
性分析［10 －12］、杂种优势预测［13］、品种鉴定等领域。Budak
等［14］以野牛草为材料比较了 SRAP、RAPD、SSR和 ISSR 4种
分子标记技术，结果表明 SRAP的多态性和区分能力强于其
他 3种标记。由于 SRAP是一种基于 PCR技术的分子标记，
易受其反应条件中诸多因素的影响，为确保 SRAP-PCR的准
确性和重复性，建立和优化其体系是十分必要的。正交试验
设计具有均衡分散、综合可比及可伸缩、效应明确等特性，既
减小了试验规模，又不使信息损失太多，克服了单因素试验
顾此失彼、试验规模巨大的缺点，从而快速找到了最优水平
组合［15］。为此，笔者采用交互正交设计对苦荞 SRAP-PCR
反应体系进行了优化筛选，同时比较了非变性和变性 PAGE
检测方法，并进行了 2 种电泳操作系统的对比试验，旨在为
今后构建苦荞 SPAP遗传图谱奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 材料 滇宁一号(母本)、野苦荞(父本)、九江苦荞(母
本)、滇宁一号 ×野苦荞杂交 F1 代 3 份、九江苦荞 ×野苦荞
杂交 F1 代 7份苦荞材料，均由西昌学院提供，来自四川省凉
山州，叶片采回后置于 －80 ℃冰箱备用。
1． 2 试剂与仪器 50 和 100 bp Ladder DNA Marker、Taq
DNA聚合酶，均购自 TransGen Biotech;10 × PCR 缓冲液、
dNTP和 MgCl2，均购自大连宝生物有限公司;其他试剂为国
产分析纯。PTC-200 型 PCR 仪(BIO-RAD 公司) ，DYCZ-20C
与 DYCZ-24F电泳槽(北京六一厂) ，JP-3 000sx电泳仪(美国
Polyscience公司) ，核酸蛋白分析仪(Eppendorf) ，凝胶成像系
统(BIO-RAD公司)。
1． 3 引物 引物由北京奥科生物技术公司合成，序列见
表 1。
1． 4 方法
1． 4． 1 DNA的提取及检测。苦荞基因组 DNA 使用植物基
因组 DNA提取试剂盒提取。利用核酸蛋白分析仪检测浓度
和 A260 /A280值，0． 8%琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 的完整性和
RNA消化情况。
1． 4． 2 PCR反应体系的正交试验。按照 5 因素 3 水平的标
责任编辑 乔利利 责任校对 况玲玲安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(1):44 － 48
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.01.110
准正交表 L27(3
13)设计试验，同时分析 Mg2 +与 dNTP、Mg2 +与
Taq酶的交互作用。各因素及水平见表 2，设计方案如表 3，试
验重复 2次。20 μl 反应体系，每管含 2 μl 10 ×缓冲液(不含
Mg2 +)，以野苦荞 DNA为模板，所用引物组合为 me1/em1。
表 1 引物序列
Table 1 Sequence of primers
名称
Name
引物序列(5→3)
Sequence of primers(5→3)
F － － me1 TGA GTC CAA ACC GGA TA
R － － em1 GAC TGC GTA CGA ATT AAT
R － － em2 GAC TGC GTA CGA ATT TGC
R － － em3 GAC TGC GTA CGA ATT GAC
表 2 正交设计因素及水平
Table 2 The factors and their levels in orthogonal design
编号
Code
因素
Factor
水平 Level
1 2 3
A Mg2 +∥mmol /L 1． 00 1． 50 2． 00
B dNTP∥mmol /L 0． 20 0． 25 0． 30
C Taq酶∥U/20 μl Taq DNA polymerase 0． 50 1． 00 1． 50
D 模板 DNA∥ng /20 μl DNA template 20． 00 30． 00 40． 00
E 引物∥μmol /L Primer 0． 25 0． 50 0． 75
1． 4． 3 PCR扩增及电泳检测。扩增程序采用复性变温法。
扩增程序如下:94 ℃预变性 5 min;94 ℃变性 1 min，35 ℃退
火 1 min，72 ℃延伸1 min，5个循环;94 ℃变性1 min，50 ℃退
火 1 min，72 ℃延伸 1 min，35个循环;循环结束后 72 ℃延伸
6 min，4 ℃保存。PCR产物经 10%非变性 PAGE，银染显影，
统计分析后得到苦荞 SRAP-PCR最佳反应体系。
1． 4． 4 非变性与变性 PAGE方法。①非变性 PAGE:PCR产
物 2． 5 μl，6 ×上样缓冲液(98%甘油，10 mmol /L EDTA pH值
8． 0，0． 25%溴酚蓝，0． 25%二甲苯青) ，300 V 恒压，1 × TBE
电泳至二甲苯青泳出胶板。②变性 PAGE:PCR 产物 2． 5 μl
(与非变性 PAGE的样品为同一批) ，6 ×上样缓冲液(98%甲
酰胺，10 mmol /L EDTA pH 值 8． 0，0． 25%溴酚蓝，0． 25%二
甲苯青) ，样品经 95 ℃变性 5 min，迅速置于冰上冷却，30 W
恒功率，1 × TBE电泳至二甲苯青泳出胶板。
1． 4． 5 2 种型号电泳槽电泳。DYCZ-20C 型电泳上样量为
6. 0 μl，DYCZ-24F型电泳上样量为 2． 5 μl，恒压 300 V，1 ×
TBE电泳至二甲苯青泳出胶板。
2 结果与分析
2． 1 SRAP-PCR正交试验分析
2． 1． 1 正交试验结果及极差分析。将各处理的 PCR产物进
行 10%非变性 PAGE(图 1)。以扩增条带数为每个处理赋
值，进行极差分析。根据表 3 中 R 值可知，Taq 酶、dNTP、引
物和 Mg2 +对苦荞 SRAP-PCR反应的影响较大，模板 DNA的
影响较小;各因素最高平均值 k对应的组合 A1B3C2D3E1，即
为极差分析初步筛选的最佳组合。
表 3 L27(3
13)正交试验设计方案及结果
Table 3 Statistical results and orthogonal design with L27(3
13)
编号
Code
Mg2 +(A)
mmol /L
dNTP(B)
mmol /L
Taq酶(C)∥U/20 μl
Taq DNA polymerase
模板(D)∥ng /20 μl
Template
引物(E)∥μmol /L
Primer
结果 Test result
条带数ⅠBandⅠ 条带数ⅡBandⅡ
1 1． 0 0． 20 0． 5 20 0． 25 8 8
2 1． 0 0． 20 1． 0 30 0． 50 7 8
3 1． 0 0． 20 1． 5 40 0． 75 6 5
4 1． 0 0． 25 0． 5 30 0． 50 10 10
5 1． 0 0． 25 1． 0 40 0． 75 9 9
6 1． 0 0． 25 1． 5 20 0． 25 10 10
7 1． 0 0． 30 0． 5 40 0． 75 9 8
8 1． 0 0． 30 1． 0 20 0． 25 8 7
9 1． 0 0． 30 1． 5 30 0． 50 8 9
10 1． 5 0． 20 0． 5 20 0． 75 5 6
11 1． 5 0． 20 1． 0 30 0． 25 8 7
12 1． 5 0． 20 1． 5 40 0． 50 3 3
13 1． 5 0． 25 0． 5 30 0． 25 7 6
14 1． 5 0． 25 1． 0 40 0． 50 8 9
15 1． 5 0． 25 1． 5 20 0． 75 5 4
16 1． 5 0． 30 0． 5 40 0． 50 8 9
17 1． 5 0． 30 1． 0 20 0． 75 8 7
18 1． 5 0． 30 1． 5 30 0． 25 9 8
19 2． 0 0． 20 0． 5 20 0． 50 5 4
20 2． 0 0． 20 1． 0 30 0． 75 6 7
21 2． 0 0． 20 1． 5 40 0． 25 8 7
22 2． 0 0． 25 0． 5 30 0． 75 6 5
23 2． 0 0． 25 1． 0 40 0． 25 10 10
24 2． 0 0． 25 1． 5 20 0． 50 5 5
25 2． 0 0． 30 0． 5 40 0． 25 8 7
26 2． 0 0． 30 1． 0 20 0． 50 10 10
27 2． 0 0． 30 1． 5 30 0． 75 5 5
k1 = K1 /3 8． 278 6． 167 7． 167 6． 944 8． 111
k2 = K2 /3 6． 667 7． 667 8． 222 7． 278 7． 278
k3 = K3 /3 6． 833 7． 944 6． 389 7． 556 6． 389
R 1． 611 1． 778 1． 833 0． 611 1． 722
5439 卷 1 期 夏 楠等 SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化
注:M． DNA分子量标准;1 ～27．正交试验编号。
Note:M． D2000 DNA Marker;1 －27． Codes of orthogonal test．
图 1 正交试验 PCR产物电泳结果
Fig． 1 Electrophoresis pattern of PCR products of the orthogonal test
2． 1． 2 方差分析。由于极差分析不考虑交互作用，不能估
计试验误差，所以利用 DPS软件对数据进行方差分析。结果
表明，5个因素对苦荞 SRAP-PCR反应的影响与极差分析结
果基本一致;Mg2 + × Taq酶和 Mg2 + × dNTP的交互作用对反
应也有极显著影响(P ＜ 0． 01)。因此，利用正交设计助手软
件对 Mg2 +与 Taq酶、dNTP交互作用下的条带数平均值进行
计算。由于 Mg2 + × Taq酶的 F值大于 Mg2 + × dNTP的 F值，
所以首先考虑 Mg2 +与 Taq 酶的交互作用，确定 Mg2 +与 Taq
酶的水平后，再根据选定的 Mg2 +水平来确定 dNTP水平，结
果见表 4。其他因素利用 Duncan法进行多重比较分析，结果
见表 5。
表 4 Mg2 +与 Taq酶、dNTP交互作用下条带数平均值
Table 4 Average number of bands with interaction among Mg2 +，Taq
DNA polymerase and dNTP
Mg2 +(A)
Taq酶(C)Taq
DNA polymerase
1 2 3
dNTP(B)
1 2 3
1 7． 833 6． 833 5． 833 7． 000 5． 333 6． 167
2 8． 000 7． 833 8． 833 9． 667 6． 500 6． 833
3 8． 000 5． 333 5． 833 8． 167 8． 167 7． 500
表 5 Duncan法检验各水平间差异性
Table 5 Testing significance of difference at different levels by Duncan
水平
Level
条带数均值 Average number of bands
模板 DNA template 引物 Primer
1 6． 944 bB 8． 111 aA
2 7． 278 abAB 7． 278 bB
3 7． 556 aA 6． 389 cC
注:同列不同大、小写字母分别表示在 0． 01、0． 05水平差异显著。
Note:Different capital and lowercase letters stand for significant difference
at 0． 01 and 0． 05，respective．
由表 4可知，Mg2 + 2 水平、Taq 酶 3 水平时，条带数的平
均值最高;在 Mg2 + 2 水平条件下，dNTP 1 水平的条带数最
多。由表 5可知，模板 3水平、引物 1 水平时，条带数平均值
最高。因此，苦荞 SRAP-PCR的最适反应体系应为A2B1C3D3E1，
即20 μl反应体系中含Mg2 + 1． 5 mmol /L，dNTP 0． 2 mmol /L，Taq
酶1．5 U，模板DNA 40 ng，引物0．25 μmol /L和10 ×缓冲液2 μl。
2． 2 优化体系重复性验证 选用 7份材料的 DNA为模板，
采用 3对引物，对优化体系 A2B1C3D3E1 进行验证。10%非
变性 PAGE结果(图2)表明，条带多且清晰，无弥散和拖尾现
象;可清楚看出杂交子代具有父母本的特征条带。
2． 3 非变性与变性 PAGE结果比较 非变性与变性 PAGE
在检测 SRAP-PCR 产物的过程中都有使用［16 －17］。该试验
中，2种方法的样品为同一批次 PCR产物，上样量相同，排除
了 PCR的因素导致结果差异的可能性。结果(图 2、3)表明，
变性 PAGE图谱背景深，条带模糊，尤其是较大片段分不清;
M1、M2 2种 Marker在非变性 PAGE 中的图谱与标准图谱一
致，而在变性 PAGE中的图谱与标准图谱无法对应。
2． 4 2 种型号电泳槽电泳结果比较 使用 DYCZ-24F 和
DYCZ-20C 2种型号的电泳槽，对同一批 PCR产物进行 10%
非变性 PAGE。结果(图 2、4)表明，图 4 在上样量多于图 2
1． 4倍的条件下，图谱仍然模糊不清;条带数明显少于图 2中
的对应泳道，这可能是由于胶太薄导致银染效果不好所致。
3 结论与讨论
(1)正交设计是利用一套规格化的正交表将各因素、各
水平之间的组合均匀搭配、合理安排，从而大大减少试验次
数，并提供较多信息［18］，可有效解决单因素试验顾此失彼、
完全组合设计工作量大、试验周期长的问题。一般来说，对
正交试验结果的分析方法有 2 种，即极差分析法(直观分析
法)和方差分析法。虽然极差分析法简明易懂，通过直观比
较就可得出优选条件，但该方法没有考虑试验误差，且对于
各因素的影响程度不能给出精确估计，同时不能分析因素间
的交互作用。为了弥补极差分析法的以上不足，该试验采用
方差分析法，对显著影响试验的因素按有利于结果的要求选
取该因素的最佳水平，而对不显著影响试验的因素，本着省
时、低耗的原则选取水平。
(2)对于电泳图谱的分析，有的根据图谱背景、条带数和
条带亮度对各个处理评分，然后计算分析［19］;也有的直接利
用条带数进行计算分析［20］。前者，考虑因素全面，但评分主
观性强;后者，考虑因素少，但条带数准确，更适合于同一背
景条件下的每个泳道多条带的分析。因此，该研究中以扩增
条带数为每个处理赋值，进行分析。
64 安徽农业科学 2011年
注:A、B和 C． 3对引物;1 ～7． 7份材料;M1 ． 50 bp Marker;M2 ． 100 bp Marker。
Note:A，B，C． Three pairs of primers;1 －7． Seven accessions;M1 ． 50 bp Marker;M2 ． 100 bp Marker．
图 2 优化体系电泳结果
Fig． 2 Electrophoresis pattern of the optimal reaction system
注:A、B和 C． 3对引物;1 ～7． 7份材料;M1 ． 50 bp Marker;M2 ． 100 bp Marker。
Note:A，B，C． Three pairs of primers;1-7． Seven accessions;M1 ． 50 bp Marker;M2 ． 100 bp Marker．
图 3 变性 PAGE电泳结果
Fig． 3 Electrophoresis pattern of denatured polyacrylamide gel
注:A、B和 C． 3对引物;1 ～7． 7份材料。
Note:A、B，C． Three pairs of primers;1 －7． Seven accessions．
图 4 DYCZ-20C电泳图谱
Fig． 4 Electrophoresis pattern of DYCZ-20C
7439 卷 1 期 夏 楠等 SRAP分子标记用于苦荞分析中的条件优化
(3)在利用 SRAP 分子标记的研究中，非变性与变性
PAGE在检测过程中都有使用。因此，该研究中利用非变性
与变性 PAGE进行了对比试验。结果表明，变性 PAGE条带
整体模糊不清，M1、M2 2种 Marker在变性 PAGE中的图谱无
法与标准图谱对应，这极大影响了带型的判读，从而使试验
结果产生误差。操作过程中，变性 PAGE凝胶中的尿素在点
样孔中析出，若冲洗不净则样品不能处于一个平面上，造成
结果判读错误。非变性 PAGE，制胶简便快捷，样品不用变
性，点样迅速，电泳后条带清晰，带型分析准确性高，结果更
加可靠。
(4)DYCZ-24F、DYCZ-20C 2 种电泳槽均为北京六一厂
产品，其区别在于:①DYCZ-20C 梳子为鲨鱼齿，样品容易向
两侧漂移，造成相互污染;而 DYCZ-24F梳子为长城齿，孔之
间有凝胶隔离，不会混杂。②DYCZ-20C 在制胶过程中要用
到剥离硅烷、亲和硅烷(均为有毒试剂) ，而 DYCZ-24F 则不
用。③DYCZ-20C的凝胶厚度只有 0． 4 mm，由于玻璃板面积
大，平整度难保证，较薄区域银染效果不好;而 DYCZ-24F的
凝胶厚度是 1. 0 mm，不会出现这种问题。④由于 DYCZ-20C
凝胶极薄，必须粘附在玻璃板上，然而染色过程中显影液为
强碱性，胶板在其中浸泡时间过长很容易导致凝胶脱落和破
碎;而 DYCZ-24F的凝胶较厚，可从玻璃板上剥离下来，操作
简便、时间短、效果好。⑤DYCZ-20C 的上样量是 DYCZ-24F
的 2． 4倍，但电泳图谱却不如后者清晰，且条带数少。⑥DY-
CZ-20C无冷却系统，不能保证电泳温度;而 DYCZ-24F 有水
循环系统，能控制电泳温度。综合以上因素，DYCZ-24F 比
DYCZ-20C更适合于分析 SRAP产物，精确度更高。
参考文献
［1］LI Y Q，ZHOU F，GAO F，et al． Comparative evaluation of quercetin，iso-
quercetin and rutin as inhibitors of α-Glucosidase［J］． Journal of Agricul-
tural and Food Chemistry，2009，57:11463 －11468．
［2］LI Y，GAO F，GAO F，et al． Study on the interaction between 3 flavonoid
compounds and α-amylase by fluorescence spectroscopy and enzymatic ki-
netics［J］． Journal of Food Science，2009，74(3):199 －203．
［3］石峻，唐福美，常玉荣，等．荞麦叶总黄酮对糖尿病并高脂血症大鼠血
糖、血脂及血液流变性的影响［J］．微循环学杂志，2003，13(3):30 －31．
［4］陕方，李文德，林汝法等．苦荞不同提取物对糖尿病模型大鼠血糖的影
响［J］．中国食品学报，2006，6(1):208 －211．
［5］YAO Y，SHAN F，BIAN JSHENG，et al． D-chiro-inositol-enriched tartary
buckwheat bran extract lowers the blood glucose level in KK-Ay mice［J］．
J Agric Food Chem，2008，56(21):10027 －10031．
［6］LI G，QUIROS C F． Sequence-related amplified polymorphism(SRAP)，a
new marker system based on a simple PCR reaction:its application to map-
ping and gene tagging in Brassica［J］． Theor Appl Genet，2001，103:455 －
461．
［7］吴浩，谭文芳，何俊蓉，等．甘薯 SRAP连锁图构建淀粉含量 QTL检测
［J］．分子植物育种，2005，3(6):841 －845．
［8］LIN Z，HE D，ZHANG X． Linkage map construction and mapping QTL for
cotton fibre quality using SRAP，SSR and RAPD［J］． Plant Breeding，2005，
124:180 －187．
［9］OKAZAKI K，SAKAMOTO K，KIKUCHI R，et al． Mapping and character-
ization of FLC homologs and QTL analysis of flowering time in Brassica ol-
eracea［J］． Theoretical and Applied Genetics，2007，114:595 －608．
［10］文雁成，王汉中，沈金雄，等．用 SRAP标记分析中国甘蓝型油菜品种
的遗传多样性和遗传基础［J］．中国农业科学，2006，39(2):246 －256．
［11］BUDAK H，SHEARMAN R C，PARMAKSIZL，et al． Molecular character-
ization of buffalograss germplasm using sequence-related amplified poly-
morphism markers［J］． Theoretical and Applied Genetics，2004，108:328 －
334．
［12］徐爱遐，马朝芝，肖恩时，等．中国西部芥菜型油菜遗传多样性研究
［J］．作物学报，2008，34(5):754 －763．
［13］HALE A L，FARNHAM M W，NZARAMBA M N，et a1． Heterosis for hor-
ticultural traits in Broccoli［J］． Theoretical and Applied Genetics，2007，
115:351 －360．
［14］BUDAK H，SHEARMAN R C，PARMAKSIZL，et al． Comparative analysis
of seeded and vegetative biotype buffalograsses based on phulogenetic rela-
tionship using ISSRs，SSRs，RAPDs，and SRAPs［J］． Theor Appl Genet，
2004，109:280 －288．
［15］续九如，黄智慧．林业实验设计［M］．北京:中国林业出版社，1998:65
－79．
［16］陈大霞，李隆云，钟国跃，等．用 SRAP标记分析正品大黄的遗传关系
［J］．中国中药杂志，2008，33(20):2309 －2312．
［17］龙腾，刘雷，黄玉碧．四川部分晾晒烟种质遗传关系的 SRAP分析［J］．
作物学报，2009，35(1):173 －178．
［18］王仁安．设计与统计分析［M］．北京:北京医科大学出版社，2000:47 －
60．
［19］雷雪峰，易津，侯丽丽．利用正交设计建立与优化北美驼绒藜 ISSR-
PCR反应体系［J］．植物研究，2008，28(6):693 －697．
［20］周凌瑜，吴晨炜，唐东芹，等．利用正交设计优化小苍兰 ISSR-PCR反
应体系［J］．植物研究，2008，28(4):402 －407．
［21］杨明君，郭忠贤，陈有清．苦荞引种试验［J］．内蒙古农业科技，2006
(2):39 －40．
［22］林汝法，王瑞．苦荞提取物的毒理学安全性［J］．华北农学报，2001，16
(1):116 －121．
［23］郭忠贤，杨明君，陈有清．多效唑和萘乙酸对苦荞抗倒伏性和抗落粒性
的影响［J］．内蒙古农业科技，2006(5):44 －45．
［24］林汝法，周运宁．苦荞提取物对大小鼠血糖、血脂的调节［J］．华北农
学报，2001，16(1):122 －126．
［25］张玉金，叶俊，张智勇，等．苦荞育种现状与探讨［J］．内蒙古农业科技，
2008(3):90 －91．
［26］赵胜杰，刘文革，阎志红，等．西瓜种质资源遗传差异的 SRAP和 EST-
SSR分析［J］．华北农学报，2010，25(3):76 －79．
84 安徽农业科学 2011年