全 文 ：用反相离子色谱法测定大麦草片剂中 VB1的含量
惠秋沙
（山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355）
摘要：建立大麦草片剂中 VB1的反相离子色谱的测定方法。测定方法为：色谱柱：UltimateTM column XB- C18，
5 μm,4.6 mm×250 mm；流动相：0.05 mol/L乙酸钠溶液和甲醇的体积比为 60∶40；流速：1.0 mL/min；检测波长：
激发波长 375 nm，发射波长 435 nm。结果表明，VB1质量为 0.000 1～0.000 5μg，线性关系良好（R2= 0.999 8），平
均回收率为 99.44%。该方法简单、专属性强、灵敏度高，适用于大麦草片剂中 VB1的含量测定。
关键词：大麦草；VB1；反相离子色谱法
中图分类号：O657.7 文献标志码：A doi：10.3969/jissn.1671- 9646（X）.2011.07.033
Determination of II—Carotene in Damaicao Tablets by Ion- pair
Reversed- phase High Performance Liquid Chromatography
Hui Qiusha
（Shandong University of Traditional Chinese medicine，Jinan，Shandong 250355，China )
Abstract： A method for determination of VB1 in Damaicao Tablets by Ion- pair reversed- phase high performance liquid
chromatography is established．The Chromatographic conditions are that using UltimateTM column XB- C18（5 μm，4.6 mm×
250 mm） as chromatographic column，sodium alcoholate （0.05 mol/L） - - methanol（60∶40） as mobile phase.The flow
rate is 1.0 mL/min，its excitation and emission wavelength at 375 nm and 435 nm respectively．The method is proved to be
1inear in the ranger of 0.000 1～0.000 5 μg (R2=0.999 8)， the average recovery is 99.44％．The method is simple,
exclusive, sensitive and reproducible．It is suitable for determination of VB1 in Damaicao Tablets．
Key words：Damaicao Tablets；VB1；Ion- Pair Reversed- Phase High Performance Liquid Chromatography(IP- RP- HPLC)
中国很早就有麦草入药的记载。现代研究发现，
大麦草中含有丰富的蛋白质，多种维生素、矿物质
以及与细胞的呼吸、过氧化物的分解、脂肪酸的氧
化等有关生命活动的酶。荻原博士和久保田教授[1]发
现，大麦嫩苗汁具有抗炎症、抗溃疡，抗皮肤过敏，
降低胆固醇和血糖含量等功能。大麦草中 VB1的含
量是牛奶的 30 倍[1] ，VB1在糖代谢中起重要作用，
若 VB1缺乏，造成丙酮酸和乳酸的堆积，使能量供
应不足，影响心肌、骨骼肌和神经系统的功能。临
床表现为健忘、易怒、肢端麻痹、心肌萎缩、心力
衰竭等症状[2- 3]。
维生素的测定方法有：微生物法、酶法、分光
光度法、高效液相色谱法以及毛细管电泳法等，其
中高效液相色谱法[4- 6]应用最为广泛。本试验建立了
用反相离子高效液相色谱法测定 VB1含量的方法，
操作简便、专属可靠、灵敏度高、经济实用。
1 试验材料
1.1 试验仪器
Waters HPLC 2695—2475；FW177 型粉碎机；
Sartorius，BP21117 电子天平；LHP—250 型恒温培
养箱。
1.2 试验试剂
0.1，0.01 mol/L盐酸溶液；混合酶溶液（淀粉酶
和木瓜酶）；乙酸钠溶液（pH值 6.0）；0.1 mol/L氢
氧化钠溶液；碱性铁氰化钾溶液；正丁醇；甲醇为
色谱纯，水为二次重蒸馏过滤水，其他试剂均为分
析纯。
1.3 样品
大麦草片，黑龙江省地王生物制药有限公司提
供；VB1标准品，质量分数为 99.9%以上，Sigma公
司提供。
收稿日期：2011- 03- 21
作者简介：惠秋沙（1952- ），女，江苏人，大学本科，副教授，研究方向：药物分析，中药复方及食品研究。
文章编号：1671- 9646 ( 2011 ) 07- 0115- 03
第 7期（总第 250期) 农产品加工·学刊 No.7
2011年 7月 Academic Periodical of Farm Products Processing Jul.
农产品加工·学刊 2011年第 7期
2 样品的制备
将样品放在捣碎机中捣碎后，精密称取 4.0～8.0 g，
置于三角瓶中，加入适量的盐酸溶液，控制样液中酸
浓度在 0.1 mol/L左右，将三角瓶的样液摇匀后，放入
高压杀菌锅内，在 121℃下保持 30 min。待冷却后取
出，轻摇数次，冷却至 40 ℃以下，加入 2.5 mL混合
酶液，摇匀后，置于 37 ℃培养箱中过夜。用浓度
0.1 mol/L氢氧化钠溶液将 pH值调至 6.0，再用二次
重蒸水定容至 50 mL。样液经滤纸过滤，取滤液
10 mL置于 25 mL比色管中，加入 5 mL铁氰化钾，
充分混合后再加 10.00 mL正丁醇萃取，经剧烈摇动，
静止分层，吸取正丁醇相进样。
3 色谱条件
色谱柱： UltimateTM column XB—C18， 5 μm，
4.6 mm×250 mm；
流动相：0.05 mol/L乙酸钠溶液与甲醇体积比为
60∶40；
柱温：室温；
流速：1.0 mL/min；
检测波长：激发波长 375 nm，发射波长 435 nm。
在此色谱条件下，VB1和样品中其他色谱峰基线
分离，VB1与其相邻的色谱峰的分离度大于 1.5；按
VB1峰计算，理论塔板数（n） 为 7 000以上；拖尾
因子（T） 为 1.22。
VB1标准品溶液色谱见图 1，大麦草片剂供试品
溶液色谱见图 2。
图 1 VB1标准品溶液色谱图
图 2 大麦草片剂供试品溶液色谱图
4 方法与结果
4.1 线性关系
精密称取 VB1标准品 1.0 mg置于 100 mL容量瓶
中，加入 0.01 mol/L的盐酸溶液溶解并定容。分别吸
取上述溶液 100，200，300，400，500 μL，置入 50 mL
容量瓶中，用 0.01 mol/L的盐酸稀释并定容。分别定
为 1，2，3，4，5 号标准品溶液。分别吸取上述
5种标准品溶液 5 μL进样，按色谱条件测定峰面积，
以峰面积积分值为纵坐标，VB1的含量为横坐标绘制
标准曲线。求得标准曲线回归方程 Y=1 040 404
000X- 232 72，相关系数 R2=0.999 8。以上结果表明，
在 0.000 1～0.000 5 μg内，VB1峰面积与进样量有
良好的线性关系。
VB1线性结果见表 1，VB1的标准曲线见图 3。
表 1 VB1线性结果
图 3 VB1的标准曲线
4.2 精密度试验
精密吸取 3号标准品溶液 5 μL，按上述色谱条
件重复进样 5次，测定峰面积，RSD＜2％。试验证
明，精密度良好。
精密度测定结果见表 2。
表 2 精密度测定结果
4.3 重现性试验
取批号为 258371的同批样品 5份，按以上的方
法制备供试品溶液，分别取 10 μL进样，测其峰面积
并计算含量， RSD＜2％。试验证明，重现性良好。
重现性试验测定结果见表 3。
标准品质量 m/μg
峰面积
0.000 1
82 008
0.000 2
185 030
0.000 3
290 089
0.000 4
401 430
0.000 5
498 170
次数 /次
1
2
3
4
5
VB1峰面积
290 180
287 652
280 324
285 762
283 523
平均值
285 488
RSD/％
1.2
116· ·
2011年第 7期
4.4 稳定性试验
4.4.1 标准品稳定性试验
精密称取 3 号标准品溶液 5 μL，分别在
0，4，8，12 h进样，按上述色谱条件测定峰面积积
分值，RSD＜2％。结果表明，标准品溶液在 12 h内
稳定。
标准品稳定性试验结果见表 4。
4.4.2 供试品稳定性试验
精密称取 4.3 项下供试品溶液 10 μL，分别在
0，4，8，12 h进样，按上述色谱条件测定峰面积积
分值，RSD＜2％。结果表明，供试品溶液在 12 h内
稳定。
供试品稳定性试验结果见表 5。
表 5 供试品稳定性试验结果
4.5 回收率试验
精密称取 5份已知含量的样品（批号为 258372）
约 3.0 g，研磨混合制成供试药粉，其中加入 1号 ~
5号标准品溶液 10 mL，按上述样品制备方法和色谱
条件，制备加样回收供试品溶液，并注入高效液相
色谱仪，计算回收率。平均回收率为 99.44%，在
95%~105%之间，结果证明，方法可靠可行。
回收率试验测定结果见表 6。
4.6 样品测定
按正文中含量测定方法测定不同批号的 6批样
品质量分数。
VB1质量分数测定结果见表 7。
表 7 VB1质量分数测定结果
5 讨论与小结
（1） 激发波长的选择：取 VB1标准品溶液适量，
以浓度 0.01 mol/L 的盐酸为空白，在波长 200～
500 nm内扫描，在激发波长为 375 nm处有最大吸
收，空白溶液在此波长处无吸收，故选用 375 nm波
长为激发波长。
（2） 大麦草片剂 VB1含量：大麦草片剂中 VB1
的质量分数大约为 0.22 μg/g，与相关文献中大麦草
原汁中的 VB1相差甚远，所以在大麦草提取液经浓
缩、干燥、粉碎、制粒、压片等过程，VB1可能遭到
破坏，也不排除添加辅料过多的因素。
（3） 本试验色谱条件简单、专属性强、灵敏度
高、干扰小，可作为大麦草片剂中 VB1的含量测定
方法。
参考文献：
陈大璋 . 神奇的麦绿素 [N] . 福建侨报，1993-8-19
（4） .
周柏林，沈思翔，李蓉萍 . 婴儿脑型脚气病的早期诊
断 [J] .浙江大学学报（医学版），2000，29（5），232.
朱杰. 脚气病诊治与 VB1拓展应用 [J] . 实用诊断与治疗
杂志，2005，19（3）：197-198.
毕爱莲，杨娟华，许振强. HPLC法测定大麦草片剂中 β
一胡萝卜素含量 [J] . 齐鲁药事，2008，27（5）：277.
李克，王华娟. 离子对反相高效液相色谱法同时测定复合
V片中 4种水溶性 V [J] . 色谱，2003，21（1）：66-68.
李叶 . 反相离子对高效液相色谱法测定更年灵胶囊中
VB6的含量 [J] . 中国当代医药.2010，17 (21)：46.
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
[6]
进样时间 t/h
0
4
8
12
峰面积积分值
290 132
288 356
289 763
291 065
平均值
289 829
RSD/％
0.39
表 4 标准品稳定性试验结果
表 3 重现性试验测定结果
试样号
1
2
3
4
5
样质量 m/g
5.022
4.939
5.034
5.212
4.695
峰面积值
207 483
204 298
209 904
218 990
193 887
质量分数 /μg·g-1
0.221
0.221
0.223
0.223
0.222
RSD/％
0.50
进样时间 t/h
0
4
8
12
峰面积积分值
207 890
207 415
210 132
206 172
平均值
207 902
RSD/％
0.80
生产批号
258369
258370
258371
258372
258373
258374
VB1质量分数 /μg·g-1
0.216
0.216
0.222
0.220
0.223
0.222
1
2
3
4
5
样质量
m/g
3.012
3.098
2.987
3.003
2.992
VB1质量
m/μg
0.663
0.682
0.657
0.661
0.658
加入 VB1质
量 m/μg
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
测得量
m/μg
0.671
1.076
1.268
1.432
1.622
回收率
/％
104.08
98.50
101.83
96.38
96.42
编号
表 6 回收率试验测定结果
惠秋沙：用反相离子色谱法测定大麦草片剂中 VB1的含量 117· ·