全 文 ：HPLC法测定大麦草片剂中 β -胡萝卜素含量
毕爱莲 ,杨娟华 ,许振强
(济南百诺医药科技开发有限公司 , 山东 济南 250014)
摘要:目的　建立大麦草片剂中 β -胡萝卜素的高效液相色谱的测定方法。 方法　色谱条件:色谱柱为 Capce ll pak
UG120 C18(4.6mm×150mm , 5μm);流动相为甲醇-乙腈(90∶10);流速为 2m L· min -1 ;检测波长为 450nm。结果　β-胡
萝卜素在 7～ 105μg·m L-1范围内线性关系良好(r =0.9994),平均回收率为 99.34%, RSD 为 1.27%。结论　本法简便 , 快
速 ,准确 , 灵敏 ,适用于大麦草片中 β -胡萝卜素的含量测定。
关键词:大麦草片　β-胡萝卜素　高效液相色谱法
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2008)05-0277-03
Determination of β-carotene in Damaicao Tablets by HPLC
BI Ai-lian ,YANG Juan-hua ,XU Zhen-qiang
(Ji′nan Bestcomm Pharmaceutical R&D Co., L td., Ji′nan 250014)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish a me thod fo r determination o f β -ca ro tene in Damaicao Table ts by rever sed-phase
high perfo rmance liquid chromato gr aphy.METHODS　Chromatog raphic conditions:using Capcell Pak UG120 C18(4.6mm ×
150mm , 5um)as chromato gr aphic column , methanol-acetonitrile(90∶10)as mobile phase;The f low rate wa s 2mL ·min-1 ,
detection w aveleng th was 450nm.RESULTS　The method was proved to be linear in the ranger o f 7 ～ 105μg · m L-1(r =
0.9994), RSD was 1.27 %, the aver age recove ry w as 99.34%.CONCLUSION　The method w as simple , r apid , accurate , sensi-
tive and reproducible.It w as suitable fo r determination of β-caro tene in Damaicao Tablets.
KEY WORDS:Damaicao Tablets;β-caro tene;HPLC
　　《本草纲目》中记载“麦苗 , 气味辛 ,寒 , 无毒。主治消酒
毒 ,暴热 、酒疽 、目黄。并捣烂绞汁滤服之 , 又解虫毒 , 除烦
闷。解时疾狂热 ,退胸隔热 , 利小肠” 。我国中医很早就认识
到大麦的药用价值。大麦草含有丰富的 β-胡萝卜素 ,β -
胡萝卜素具有很高的营养价值。国际脂溶性抗氧化物学术
讨论会指出:β-胡萝卜素是维生素 A 的前体 , 在人体转变
过程中受到高度调节 , 服用大剂量不会发生中毒 , 可促进细
胞缝隙间连接交流[ 1] ,具有抗氧化作用[ 2] , 增强免疫力 , 提高
人体免疫系统抵抗癌症的能力等[ 3] 。 样品中的 β-胡萝卜
素一般经柱层析法 ,薄层色谱法和纸层析法分离 , 分光光度
法[ 4 ,5]或高效液相色谱法定量[ 6～ 9] ,前三种方法操作繁琐 , 准
确度差 ,本文在文献的基础上利用氧化铝层析法建立了大麦
草片中 β-胡萝卜素的高效液相色谱测定法 , 该法具有操作
方便 ,分离效果好 , 准确度高的特点。
1　材料与方法
1.1 仪器与试剂
1.1.1 仪器:Water s高效液相色谱仪:water s 600 泵;w ater s
2487 紫外检测器;数据系统:anaster chr omatog raphy data
processing station。
1.1.2 试剂:石油醚(沸程 30 ～ 60℃), 甲醇(色谱纯), 乙腈
(色谱纯), 三氯甲烷(优级纯), 三氧化二铝 , β -胡萝卜素标
准品(≥99%, sigma), 正己烷(优级纯)。
β-胡萝卜素标准储备液的配制:精密称取 β -胡萝卜
素标准品 3.5mg , 先用三氯甲烷溶解 , 再用石油醚溶解并洗
涤烧杯数次 , 溶液转入 50mL 容量瓶中 , 用石油醚定容成浓
度为 70μg ·mL-1 ,冷藏备用。
β-胡萝卜素标准储备液临用前标定:取 30μL 标准储备
液加正己烷 3.01m L ,在波长 450nm 处测 C , 根据:
C=A/ E×1/ 1000×3.01/0.03(mg ·m L-1),其中 E 为
常数 0.2638 , A 为 0.1835 ,结果:C=70μg ·mL-1 。
β-胡萝卜素的标准使用液:吸取不同体积的标准储备
液配制成不同浓度标准系列。标准使用液浓度系列为:7、
14 、35、70 、105μg·m L-1 。
1.2 色谱条件　色谱柱:Capcel Pak UG120 C18(4.6mm ×
150mm , 5μm);流动相为甲醇-乙腈(90∶10);流速:2mL ·
min-1 ;检测波长:450nm;进样体积:10μL 。
1.3 分析方法
1.3.1 样品处理:药片于研钵中研细 , 称取 3.868g 试样于
·277·齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Af f airs 2008 Vol.27 , No.5
50mL比色管中 , 用石油醚-丙酮(80 ∶20)混合液振摇提
取 ,用长吸管吸取上层黄清液并转入圆底烧瓶中 , 多次加石
油醚-丙酮(80∶20)混合液适量 ,重复提取直至提取液无色
(微带黄色),合并提取液置圆底烧瓶 , 用氮气吹干。
将上述试样提取液残渣用石油醚溶解完全 ,然后进行氧
化铝层析。氧化铝柱为 1.5cm(内径)×4cm(高), 先用洗脱
液丙酮∶石油醚(9∶95)洗脱 β-胡萝卜素 , 控制流速为 20
滴·min -1 ,收集于 50mL 容量瓶中 , 用洗脱液定容至刻度
50mL , 用氮气吹干 ,加入 1m L 石油醚溶解后作为样品液供
HPLC 分析用。
1.3.2 标准曲线绘制:分别取上述系列浓度的 β-胡萝卜素
标准使用液进样 ,以保留时间定性 , 峰面积标准曲线法定量 ,
以峰面积 Y 对β -胡萝卜素含量 X (μg ·mL-1)进行线性回
归 ,得回归方程为:Y =75180 X +845923 (r =0.9994)。
实验结果表明在 7～ 105μg·m L-1范围内 β-胡萝卜素含量
与峰面积之间呈良好的线性关系。标准色谱图见图 1。
图 1　标准色谱图
1.3.3 样品测定:在标准曲线测定的相同色谱条件下 , 根据
样液中 β-胡萝卜素的含量进样 , 样品色谱图见图 2。
图 2　样品色谱图
1.3.4 结果计算:据样品的色谱峰面积 ,按下式计算样品中 β
-胡萝卜素的含量。
X=V×C/M×1000×1/ 1000×1000
式中:X-试样中 β -胡萝卜素的含量 ,单位为 g· kg-1
或 g· L-1 ;V-定容后的体积 ,单位为 mL;C-试样中 β-胡
萝卜素的浓度(在标准曲线上查得),单位 mg · mL-1 ;M -
试样的量 ,单位为 g 。计算结果保留两位有效数字。
2　精密度 、稳定性与回收率的试验测定
2.1 精密度试验　精密吸取标准品溶液(0.07μg · μL-1)
10μL , 重复进样 5 次 ,测定峰面积 , 结果见表 1 ,平均峰面积
为 1318236.6 , RSD =1.2%。
表 1 精密度试验结果
进样次数 峰面积 平均峰面积 RSD (%)
1 1372265
2 1295872 1318236.6 1.2
3 1353261
4 1256996
5 1312789
　　实验表明 , 精密度良好。
2.2 稳定性试验　对上述 1.3.1 配制的样品溶液 , 配制后
2h、4h 、6h 、8h 各进样一次 ,记录峰面积 ,考察方法的稳定性 ,
结果见表 2。
表 2 稳定性试验结果
进样时间(h) 0 2 4 6 8
峰面积 1924117 1923758 1924666 1923996 1924068
平均值 1924121
RSD 0.018%
　　结果表明样品在 8h 内具有良好的稳定性。
2.3 回收率的试验测定　取已知含量为 4.6mg · g -1的样品
六份 , 每份大约 1g , 分别精密加入对照品约为 2.5mg(约为
测定方法中样品含量的半量)按上述色谱条件及测定方法测
定加样供试品溶液中的含量 , 分别计算平均回收率为
99.34%, RSD = 1.27%,结果见表 3。
表 3 回收率试验结果
称样量
(g)
已知样品中量
(mg)
加入对照品量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1.021 4.697 2.301 6.802 99.69
1.005 4.621 2.308 6.948 100.59
1.056 4.858 2.261 6.956 100.05 99.34 1.27
1.026 4.719 2.305 6.812 97.07
1.009 4.641 2.286 6.902 99.87
1.096 5.042 2.316 7.112 98.78
3　结论
值得注意的是 , 在样品处理的最后定容过程中 , 由于石
油醚极易挥发 , 因此要避免剧烈振荡 , 在室温较高时需要在
冰浴中操作。由于 β -胡萝卜素对光 、热 、氧化酶的作用较
为敏感 , 分析过程中应尽量低温 、避光。否则影响测定结果
的准确度和精密度。
本次实验结果为选择优良大麦草提供了科学依据。 本
文建立的大麦草药品中 β -胡萝卜素含量测定的高效液相
色谱法 , 前处理方法简单 ,快速 , 准确度和灵敏度均达分析要
求 , 适合大麦草药品中 β-胡萝卜素的含量测定。
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HPLC法测定双氯芬酸钠肠溶片的含量
徐迪
(江苏省南通药品检验所 , 江苏 南通 226006)
摘要:目的　建立高效液相色谱法测定双氯芬酸钠肠溶片中双氯芬酸钠含量的方法。方法　以 ODS 为固定相 , pH2.5
磷酸盐缓冲液-甲醇(25∶75)为流动相 ,检测波长为 284nm , 柱温为 30℃, 流速为 1.0m L·min-1 , 外标法。结果　双氯芬酸
钠的线性范围为 1.04 ～ 20.8mg· L-1(r =0.9999 , n =5), 回收率为 100.1%。结论　方法简便 、快速 , 能准确测定双氯芬酸
钠肠溶片中双氯芬酸钠的含量。
关键词:高效液相色谱　双氯芬酸钠肠溶片　含量测定
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2008)05-0279-02
Determination of Diclofenac Sodium Enteric-coated Tablets by HPLC
XU Di
(Nantong Institute fo r D rug Contro l , Nantong 226006)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish an H PLC method fo r de te rmination of diclofenac sodium in Diclofenac Sodium En-
te ric-coated Tablets.METHODS　Using Diamonsil ODS (150×4.6mm , 5μm)as coulmn , pho sphate buffe red so lution(pH 2.5)
-methano l(25∶75)as mobile phase , and the flow rate was 1.0mL ·min -1 , detection w aveleng th w as 284nm.RESULTS　The
linear range w as 1.04 ～ 20.8mg · L-1 fo r diclofenac sodium(r =0.9999 , n =5).The average recovery were 100.1%
.CONCLUSION　This method was r apid , simple and accurate.I t can be used fo r determination o f diclofenac sodium in Diclofe-
nac Sodium Enteric-coated Tablets
KEY WORDS:H PLC;Diclofenac Sodium Enteric-coa ted Tablets;determina tion
　　双氯芬酸钠肠溶片是一种非甾体抗炎镇痛药。本文采
用 H PLC 法可以测定双氯芬酸钠的含量 , 该方法快速 、简
便 ,结果准确。
1　仪器与试药
Ag ilent 1100 高效液相色谱仪系列 , 包括 G1322A 脱气
装置 , G1311A 四元泵 , G1313A 自动进样器 , G1316A 柱温
箱 , G1315A 二极管阵列检测器 , 1100 色谱工作站。 Diamon-
sil ODS(150mm×4.6mm , 5μm)色谱柱;双氯芬酸钠对照品
(中国药品生物制品检定所 , 批号:100334-200302), 双氯芬
酸钠肠溶片市售;甲醇为色谱纯 , 水为二次纯化水。
2　色谱条件
用十八烷基键合硅胶为填充剂;以 pH2.5 磷酸盐缓冲
液(取等量 0.01M 磷酸和 0.01M 磷酸二氢钠混合而成)-
甲醇(25∶75)为流动相 ,检测波长为 284nm , 流速为 1mL ·
min-1 ,进样量为 10μL , 柱温为 30℃, 理论塔板数按双氯芬
酸钠峰计算不低于 1500。样品色谱图见下图 。
图　样品高效液相色谱图
3　实验方法与结果
3.1 线性关系　精密称定双氯芬酸钠对照品 10.40mg ,加甲
醇溶解并定量稀释制成每 1mL 约含 0.1040mg 的溶液 , 作
为对照贮备溶液。精密量取 1.0 、5.0、10.0 、15.0 、20.0m L ,
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