全 文 ：第 卷第 期
年 月
河南工业大学学报 自然科学版
群
,
文章编号 一 一 一
网络出版网址 〔, 、 一
网络出版时间 一一
猴腿蹄盖旅总黄酮的纯化工艺研究
王晓林 , 钟方丽 , 薛健飞
吉林化工学院 化学与制药工程学院 ,吉林 吉林
摘要 以解吸率为考察指标 ,通过单因素试验确定了 一 型大孔吸附树脂纯化猴腿蹄盖菠总黄
酮的工艺条件 其最佳工艺条件为 猴腿蹄盖旋总黄酮提取液的 值为 一 、上柱液质量浓度
为 留 、上样量为 创 、吸附速率为 一 小 、解吸液为 乙醇 、解吸速率为 一 、解
吸液用量为 在最佳纯化条件下 , 猴腿蹄盖旋干浸膏中总黄酮的含量由 提高到
,说明上述纯化工艺条件在猴腿蹄盖旋总黄酮的纯化方面具有一定的应用价值
关键词 猴腿蹄盖菠 总黄酮 大孔吸附树脂 纯化
中图分类号 文献标志码
箭 台少 习 口 材料与方法
猴腿蹄盖旅 ,又名多齿蹄盖旅 、猴腿菜 、猴腿
儿 ,属于蹄盖藏科植物 ,在吉林省长白山区广泛分
布 `蹄盖旅科是真藏植物的主要药用科属之一 ,
主要含有黄酮 、有机酸 、蜕皮街酮 、菇类等众多生
理活性物质 ,具有抗菌 、抗病毒 、抗氧化 、抗肿瘤等
功效 ,可以治疗痢疾 、消肿止痛 、外伤出血 、驱蛔
虫 、疮毒疖肿 、癌症等 猴腿蹄盖藏富含氨基酸 ,
具有补虚舒络 、清热解毒 、润肺理气 、安神 、降压 、
利尿 、驱风湿 、止血之功效 ,它又是人们喜爱的山
野菜 ,被称为 “山野之王 ” ,是珍贵的药食两用山野
菜 ,既可在山上采摘 ,也可进行人工栽植 ,发展前
景非常广阔 圳 猴腿蹄盖旅既可鲜食 ,又可制成干
品 、罐头 、冷冻或盐渍制品等 ,其各种制品常年出
口日本 、韩国 、香港等地 目前关于藏类植物黄酮
类成分的提取 、纯化 、含量测定的研究已有公开报
道 洲 ,而有关猴腿蹄盖蔽总黄酮的相关研究比较
少 本课题采用大孔 吸附树脂对猴腿蹄盖旅总黄
酮的纯化工艺进行了研究 , 探索出猴腿蹄盖藏总
黄酮纯化的基本工艺条件 , 为更有效地开发猴腿
蹄盖旅提供了基本依据
收稿 日期 一 一
作者简介 王晓林 一 , 男 ,山东五莲人 ,副教授 , 硕士 ,研究 方向
为天然产物有效成分的提取及纯化 艺
材料与试剂
芦丁对照品购于中国药品生物制品检定所 猴
腿蹄盖藏采自吉林市蛟河地区 , 经吉林化工学院
药学系薛健飞博士鉴定为蹄盖旅科植物猴腿蹄盖
旅 水为重蒸馏水 大孔树脂 一 、 一 、
一 、 一 、 一 、 一 购于西安蓝晓科技
有限公 司 硝酸铝 、氢氧化钠 、亚硝酸钠 、无水乙醇
均为分析纯试剂
仪器
型紫外可见分光光度计 海精密科学
仪器有限公司 一 型超声波提取仪 济宁金百
特电子有限公司 一 型多功能粉碎机 荣聪精
密科技有限公司 型电子天平 上海精密科
学仪器有限公司 一 型恒温水浴锅 海
申生科技有限公司 一 型电热鼓风干燥
箱 中国重庆实验设备厂 一 型旋转蒸发仪
上海亚荣生化仪器厂 一 型循环水真空泵 河
南省巩义市英峪仪器一厂
方法
总黄酮含量的测定
检测波长的选择
称取猴腿蹄盖威粉末 , 加人 乙醇
,加热 回流提取 次 ,每次 ,合并滤液 ,浓缩
至相对密度为 一 ℃ , 蒸馏水定容至
,制成供试品溶液 精确称取 ℃干燥至
恒重的芦丁对照品 , 置于 卫 容量瓶
河南工业大学学报 自然科学版 第 卷
中 ,加人适量 乙醇 ,超声处理使之溶解 , 乙
醇定容至刻度 , 配制成质量浓度为 留 的
芦丁对照品溶液 精确吸取供试品溶液 至
容量瓶中 ,加人蒸馏水 ,摇匀 ,精确吸
取芦丁对照品溶液 ,置于 容量瓶中 ,
加人 乙醇 ,摇匀 , 述两种溶液中分别
加人 亚硝酸钠溶液 ,摇匀 ,放置 ,
再加人 硝酸铝溶液 ,摇匀 ,放置 ,
最后加人 氢氧化钠溶液 , 分别用蒸馏
水 、 乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 巧 ,采用
分光光度法在 进行扫描 扫描结果显
示 , 供试品溶液和对照品溶液均在 处有吸
收峰 ,所以选择测定波长为
标准曲线的绘制
精确吸取芦丁对照品溶液 、 、 、 、
、 ,分别置于 个 容量瓶中 ,加人
亚硝酸钠溶液 ,摇匀 ,放置 ,加人
硝酸铝溶液 , 摇匀 , 放置 , 加人
氢氧化钠溶液 , 用 乙醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,放置 巧 以相应试剂为空白对照液 ,
采用分光光度法在 波长处测定吸光度
以吸光度 为纵坐标 , 质量浓度 为横坐标 ,绘
制标准曲线生 ,回归方程为 一 ,
二 ,表明芦丁对照品在 一 留
范围内呈良好的线性关系
精密度试验
精确吸取芦丁对照品溶液 于 容
量瓶中 ,按 “ ”的方法 ,在 处连续 次
测定吸光度 , 为 , 结果表明仪器精密
度良好
稳定性试验
精确吸取供试品溶液 于 容量瓶
中 ,按 “ ”的方法 ,在 处每间隔一定
时间 、 、 、 、 、 卜测定其吸光度 结果表
明 ,供试品溶液在 内稳定 ,之后吸光度逐渐下
降
重现性试验
精确称取同一批干燥的猴腿蹄盖藏 份 ,每份
, 按供试品溶液制备方法制成 份供试品溶
液 ,然后按 “ ”的方法 ,在 处测定吸光
度 , 为 ,表明该方法重现性良好
加样回收率试验
精确称取 份含量已知的猴腿蹄盖蔽干浸膏
粉末 , 每份加人 质量浓度为 翻 的
芦丁对照品溶液 , 按供试品溶液制备方法制成
份供试品溶液 ,然后按 “ ”的方法 ,在
处测定吸光度 , 并计算回收率 , 平均回收率为
, 值 ,结果见表
表
取样量 样品含量 对照品加人量
加样回收率结果
测得总量 回收率 平均回收率
一
一肠
乡
刀
斗`八乃月﹃乙︸,﹄护,曰`
样品含量测定
精确吸取提取液 、 吸附后溶液及解吸液各适
量 ,以相应试剂为空 白 ,按 “ ”的方法 ,于
处测定吸光度 , 通过回归方程计算出吸附后溶
液及解吸液中总黄酮的含量 , 进而计算出吸附后
溶液及解吸液中总黄酮的质量和吸附率 、 解吸率
以及干浸膏中总黄酮的含量 ,计算公式如下 一, ,
吸附率 , 。」
解吸率 。 。一 , 」
纯度 少 ,
式 中 公,为猴腿蹄盖藏总黄酮样品液中总黄酮的
起始质量浓度 , 留 ,为吸附 后猴腿蹄盖
旅总黄酮样品液中总黄酮的质量浓度 , 留 几
为解吸液中猴腿蹄盖藤总黄酮的质量浓度 , 岁
为猴腿蹄盖旅总黄酮样品液的体积 , 矶
为解吸液的体积 , ,为解吸液干燥后干浸膏的
质量 , 为解吸液中总黄酮的质量 ,
猴腿蹄盖旋总黄酮的纯化
大孔吸附树脂的预处理
对 一 、 一 、 一 、 一 、 一 、 一
种不同类型的大孔吸附树脂进行预处理 ,备用
大孔吸附树脂的物理性能
上述 种不同类型的大孔吸附树脂的物理性
能见表
第 期 王晓林 ,等 猴腿蹄盖旋总黄酮的纯化工艺研究
表 种大孔树脂的物理性能
树脂种类 外观 极 性 平均孔径 川 比表而积, ·一, 孔隙率
孔 容
·一,
住卜兮、︸卜气``哎气、︸,二, 、飞一
一
一
一】
一
书 一
乳白色不透明球状颗粒
黄色不透明球状颗粒
乳自色不透明球状颗粒
自色不透明球状颗粒
乳自色不透明球状颗粒
乳白色不透明球状颗粒
辛贪径范围
一
一
一
一
一
非极性
中极陕
中极性
非极性
中极性
中极性
猴腿蹄盖旋总黄酮提取液的制备
称取猴腿蹄盖蔽粉末适量 , 加入 倍量的
乙醇进行提取 ,提取 次 ,每次 ,过滤 ,滤液
合并 , 减压浓缩至无醇味 , 转移至 容量瓶
中 ,蒸馏水定容至刻度 ,摇匀 ,即得猴腿蹄盖藏总
黄酮提取液
结果与分析
树脂静态吸附及解吸的考察
取处理后的大孔吸附树脂 一 、 一 、
一 、 一 、 一 、 一 各 , 加入到
具塞三角瓶中 , 加人总黄酮质量浓度为
梦 的猴腿蹄盖旅总黄酮提取液 , 每
振摇 次 ,约 , ,共 ,静置 ,过滤 分
别吸取各树脂吸附后的溶液 置于
容量瓶中 ,在 处测定吸光度 ,计算各树脂
的吸附率 ,将静态吸附的树脂抽滤至干 ,然后加人
乙醇解吸 ,每 振摇 次 ,约
、 ,持续 ,静置 ,过滤 `川 分别吸取各解吸
液 置于 容量瓶中 , 在 处测
定吸光度 ,计算各树脂的解吸率 种树脂在相同
条件下 ,经过 的静态吸附及解吸附 ,其静态
吸附率和解吸率数据见表
表 种孔树脂对猴腿蹄盖旋总黄酮的静态吸附率与解吸率
树脂种类 吸附后药液质量浓度· 一, 吸附率
解吸液质量浓度
· 一, 解吸率
一
一
一
一
一
一
一科
石
刀
一
一
万
】
,
万
石
】
刀
由表 可知 , 一 型树脂的吸附率最高 ,其
次是 一 型树脂 , 一 型树脂的吸附率最低
而 解 吸率 从 高 到 低 的顺 序 为 一 、 一 、
一 、 一 、 一 、 一 ,综合考虑 ,选择
一 、 一 、 一 、 一 进入动态试验
树脂动态吸附及动态解吸的考察
取处理 后的 一 、 一 、 一 、 一 型
树脂各 ,湿法上柱 ,分别加人 总黄酮质量
浓度为 岁 的猴腿蹄盖旅总黄酮提取
液 ,以 小的流速进行吸附 ,收集吸附后溶液 ,
于 处测定吸光度 , 然后用 乙醇
以 小的流速进行动态解吸 ,收集各解吸液 ,于
测定吸光度 在相同条件下 ,经过动态吸附
与解吸 ,分别计算出 仁述树脂对猴腿蹄盖藏总黄
酮的动态吸附率和解吸率 种树脂在相同条件下
的吸附率和解吸率数据见表
表 种孔树脂猴腿蹄盖菠总黄酮的动态吸附率与解吸率
树脂种类 吸附后药液质量浓度, · 一` 吸附率
解吸液质量浓度
· 一, 解吸率
一
一
一
一
刀 石
刀 一
河南工业大学学报 自然科学版 第 卷
由表 可知 , 一 型树脂的吸附率最高 ,其他
种树脂的吸附率差别不明显 ,而 一 型树脂的
解吸率最低 , 其他 种树脂的解吸率差别较小 但
综合考虑 一 型树脂的解吸量最高 , 所以选择
一 型树脂进行进一步工艺优化
一 型大孔吸附树脂纯化工艺的优化
上柱药液质量浓度的考察
取已处理的 一 型大孔吸附树脂 份 , 各
,湿法装柱 ,各加人猴腿蹄盖旅提取液 总黄酮质量
浓度为 梦 以及稀释了 、 、 、 倍
的样品溶液 ,以 小的流速进行吸附 ,收集
各过柱液并记录体积 , 然后用 乙醇以
爪的流速进行解吸 , 收集各解吸液并记录体积 ,
于 处测定吸光度 ,计算解吸率 ,结果见表
由表 数据可知 , 卜柱药液质量浓度对吸附率
和解吸率的影响没有规律可循 , 综合吸附率和解
吸率的数据可以看出原液浓度的解吸量最高 ,所
以选择 原液浓 度 即相 当于 原生药 质量浓 度
留 为 柱药液质量浓度
上样量的考察
取已处理的 一 型大孔吸附树脂 份 , 各
,湿法装柱 ,各加人猴腿蹄盖旅提取液 总黄酮质
量浓度为 留 、 、 、 、 , 按上
述方法进行吸附和解吸 ,计算解吸率 ,结果见表
由表 可知 ,随着 样量的减少 ,吸附率和解
吸率均有所提高 ,但上样量为 巧 和 的吸
附率和解吸率差别较小 ,为了提高效率 ,选择上样
量为 巧 ,即上样液中总黄酮的量与树脂量之比
约为 岁
吸附速率的考察
取已处理的 一 型大孔吸附树脂 份 , 各
,湿法装柱 ,各加人猴腿蹄盖威提取液 总黄酮浓
度为 留 , 分别以 、 、 、 、
的流速进行吸附 ,收集各过柱液并记录体积 ,
吸取各树脂吸附后的溶液 ,在 处测
定吸光度 ,并计算吸附率 ,结果见表
由表 可以看出 ,随着吸附速率的加快 ,吸附
率逐渐降低 ,所以吸附速率最好控制在 一 小
解吸液体积分数的考察
取已处理的 一 型大孔吸附树脂 份 , 各
,湿法装柱 ,分别加人猴腿蹄盖旅提取液 总黄酮
浓度为 留 各 ,以 一 爪 的
流速进行吸附 , 收集过柱液并记录体积 , 分别用
、 、 、 、 乙醇各 以
的流速进行解吸 ,分别收集解吸液并记录体积 ,于
处测定吸光度 ,并计算解吸率 ,结果见表
表 上样药液质量考察结果
稀释倍数 药液浓度质量浓度口 只· 一协
吸附后药液质量浓度
, · 一,
解吸液
了 · 一` 吸附率 解吸率
石 】
】
,
刀
刀】
石
名
书
名
几样量 吸附后药液质最浓度· , 一,
表 上样量的考察结果
吸附后药液质最浓度
了 · 一, 吸附率 解吸率
月
,
一
一
一 一
】 】
︸气,` 、
书 一
一
表 吸附速率考察结果
吸附速率 〔 ·一, 吸附后药液 么 · 一 吸附量 吸附率
石
刀 石
名 月 刃
` 石
第 期 王晓林 ,等 猴腿蹄盖菠总黄酮的纯化工艺研究
︵一习洲·韵︸如械啊暇
由表 可知 ,不同浓度的乙醇溶液对总黄酮的
解吸能力不同 ,在其他纯化条件相同时 ,随着乙醇
体积分数的升高 ,解吸率逐渐增大 ,但乙醇体积分
数为 和 时 ,二者解吸率相差较小 ,从成本
考虑 ,选择解吸液乙醇体积分数为
解吸速率的考察
取已处理的 一 型大孔吸附树脂 份 , 各
,湿法装柱 ,各加入猴腿蹄盖藏提取液 总黄酮质
量浓度为 留 , 以 一 的
流速进行吸附 ,收集各过柱液并记录体积 ,用
乙醇 , 分别以 、 、 、 、 的流速进行
解吸 , 收集各解吸液并记录体积 , 于 处测
定吸光度 ,并计算解吸率 ,结果见表
从表 可以看出 ,随着解吸速率的增大 ,解吸
率逐渐降低 ,解吸率在解吸速率为 一 卜时较
高 ,纯化时可以将解吸速率控制在 小左右
解吸液用量的考察
解吸液用量的考察结果见图 由图 可知 ,
当解吸液用量为 时 , 解吸液中的总黄酮含
量已经很低了 ,所以为了降低解吸液的使用量 ,选
择解吸液用量约为
,
一曰
《
解吸液用量
胡
图 】解吸液用量考察结果
上柱药液 的考察
取已处理的 一 型大孔吸附树脂 份 ,各
,湿法装柱 ,准备 份 巧 的猴腿蹄盖藤提取
液 总黄酮质量浓度为 留 ,调 为
一 、 一 、 一 、 一 、 一 、 一 、 一 , 按上
述方法进行吸附 , 然后用 乙醇各 以
的流速进行解吸 , 收集解吸液并记录体积 ,
于 处测定吸光度 ,并计算解吸率 ,结果见
表
表 解吸液乙醇浓度考察结果
乙醇体积分数 吸附后药液】 · 一,
解吸药液
· 吸附率 解吸率
一
石 一
一
气, ,` ︸、
表 解吸速率考察结果
解吸速率 ·一, 吸附后药液· 一, 吸附率 弘
解吸药液
了 · 解吸率
一
一
一
石
万
名
石
石
,
一
,
表 上柱药液 值考察
药液 值 吸附后药液 吸附率 解吸药液 解吸率气 了火
乡
,
一
一
一
石
夕 一
《
刀
一
一
,一︺︸、卜﹄一﹄︸,`、叹,才
河南工业大学学报 自然科学版 第 卷
由表 可知 , 当上柱药液 值为 一 时 ,
吸附率和解吸率均最高 ,其次为 值为 一 时 ,
而且二者差别不大 ,所以可以将上柱液的 值调
节为 一 ,最好控制上柱药液 值为 一
工艺验证试验结果
通过上述试验结果可知采用 一 型大孔吸附
树脂纯化猴腿蹄盖藏总黄酮的较佳工艺为 吸附速
率 一 小 , 提取液质量浓度相当于原生药浓度
岁 , 解吸液乙醇体积分数 , 解吸速率
爪 ,解吸液用量约为 ,提取液的 值为
为了考察上述纯化工艺的稳定性 ,进行了 次验
证性试验 ,取已处理的 一 型大孔吸附树脂 份 ,
各 ,湿法装柱 ,各加人 值为 一 的猴腿蹄盖
旅提取液 总黄酮浓度为 梦 巧 ,以
山的流速进行吸附 ,然后用 乙醇以
爪的流速进行解吸 , 收集解吸液并记录体积 ,
于 处测定吸光度 ,计算总黄酮的质量浓度 ,
然后吸取提取液 、解吸液各 倒人称重
后的蒸发皿中水浴浓缩至干 , 放人温度调为 ℃
的电热鼓风干燥箱中干燥至恒重 ,称重 ,计算干浸
膏中总黄酮的含量 按优化的猴腿蹄盖旅总黄酮纯
化工艺进行 次验证试验 ,其平均吸附率和解吸率
分别为 和 , 猴腿蹄盖威干膏中总黄
酮的含量由 提高到 ,结果见表
表 工艺验证试验结果
试验次数 吸附后药液· 一, 吸附率
解吸药液
了 · 一, 解吸率 浸膏质量 含量
样品液
,︼,、,`月
石
万
刀
刀
一
一
名
结论
采用 种不同类型的大孔吸附树脂对猴腿蹄
盖藏总黄酮的纯化工艺进行了研究 , 确定了 一
型大孔吸附树脂纯化猴腿蹄盖旅总黄酮的效果较
好 ,其最佳工艺条件为 猴腿蹄盖藏总黄酮提取液
的 值为 一 、上柱液质量浓度相当于原生药质
量浓度为 留 、上样量为 岁 总黄酮量 树
脂量 、吸附速率为 一 小 、解吸液为 乙
醇 、解吸速率为 小 、解吸液用量为 在上
述条件下 , 猴腿蹄盖藏干膏中总黄酮的含量由
提高到 , 表明 一 型大孔树脂对
猴腿蹄盖威总黄酮具有一定的纯化作用 ,为猴腿蹄
盖藏总黄酮的工业化生产提供了基本的依据
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刀 脚
一 , 一 , 一
叮 。 二 献 卿 鳍 , 以 郡 ,
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