全 文 ：第２９卷第５期
２０１１年１０月
上 海 交 通 大 学 学 报 （农 业 科 学 版）
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＳＨＡＮＧＨＡＩ　ＪＩＡＯＴＯＮＧ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ）
Ｖｏｌ．２９Ｎｏ．５
　Ｏｃｔ．２０１１
文章编号：１６７１－９９６４（２０１１）０５－００２０－０５　 ＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．１６７１－９９６４．２０１１．０５．００４
收稿日期：２０１０－１２－２１
基金项目：上海市科委重点攻关项目（０８３９１９１０１００）；上海市农委重点攻关项目（农科攻２００７第１－１号）
作者简介：李　冰（１９８４－），女，硕士生，研究方向：球根花卉，Ｅ－ｍａｉｌ：０４１６０６９６＠１６３．ｃｏｍ；
史益敏（１９５５－）为本文通讯作者，男，博士，教授，博士生导师，研究方向：球根花卉，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｉｙｉｍｉｎ＠ｓｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
风信子软腐病病原的鉴定和杀菌剂试验
李　冰１，马晓红１，沈　强２，顾俊杰２，史益敏
（１．上海交通大学 农业与生物学院，上海２００２４０；２．上海鲜花港企业发展有限公司，上海２０１３０３）
摘　要：在上海生长的风信子发生软腐病的球茎中分离了菌株ＥＰ，对纯化的菌株ＥＰ进行传统方
法鉴定；并进行１６ＳｒＤＮＡ序列同源性分析，结果表明ＥＰ与Ｅｒｗｉｎｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ
同源性达到９７％，确定风信子软腐病病原为Ｅｒｗｉｎｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　ｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ。风信子软腐
病病菌在不同杀菌剂浓度下的生长试验表明，杀毒矾抑菌效果最好，有效浓度０．６４×１０－６ｇ／ｍＬ时
细菌停止生长，其次为吗啉胍乙铜和农用链霉素可溶性粉剂，有效浓度分别为２×１０－４ｇ／ｍＬ和
５．７６×１０－４ｇ／ｍＬ时，细菌停止生长。
关键词：软腐病病菌；鉴定；杀菌剂试验；胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种
中图分类号：Ｓ６８２．２＋９　　　　文献标识码：Ａ
Ｒａｐｉｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｏｆｔ　Ｒｏｔ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　ａｎｄ　Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ
Ｔｅｓｔ　ｉｎ　Ｈｙａｃｉｎｔｈｕｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ
ＬＩ　Ｂｉｎｇ１，ＭＡ　Ｘｉａｏ－ｈｏｎｇ１，ＳＨＥＮ　Ｑｉａｎｇ２，ＧＵ　Ｊｕｎ－ｊｉｅ２，ＳＨＩ　Ｙｉ－ｍｉｎ１
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｊｉａｏｔｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００２４０，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｆｌｏｗｅｒ　Ｐｏｒｔ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０１３０３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　１６ＳｒＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ａ　ｓｔｒａｉｎ　ｏｆ　ＥＰ　ｗａｓ
ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｆｒｏｍ　ｈｙａｃｉｎｔｈ　ｒｏｔｔｉｎｇ　ｂｕｌｂ　ｉｎ　Ｓｈａｎｇｈａｉ，ａｎｄ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｅｒｗｉｎｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　ｓｕｂｓｐ．
ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ．Ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　９７％ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ＥＰ　ｓｔｒａｉｎ　ａｎｄ　Ｅｒｗｉｎｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ．Ｔｈｅ
ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　ｔｅｓｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　０．６４×１０－６　ｇ／ｍＬ　ｏｆ　Ｍａｎｃｏｚｅｂ （Ｓｙｎｇｅｎｔａ　ｐｒｏｄｕｃｔ）ｈａｓ　ｍｏｒｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ
ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　ａｂｉｌｉｔｙ，ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　５．７６×１０－４　ｇ／ｍＬ　ｏｆ　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ　ａｎｄ　２×１０－４　ｇ／ｍＬ　Ｍｏｒｏｘｙｄｉｎｅ　Ｂ
Ｃｏｐｐｅｒ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｓｏｆｔ　ｒｏｔ　ｂａｃｔｅｒｉａ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ　ｔｅｓｔ；Ｅｒｗｉｎｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　ｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ
（Ｅｃｃ）
　　细菌性软腐病是风信子生产栽培中的重要病
害，其蔓延速度快、传播途径广，给生产上造成的损
失大。花卉的细菌性软腐病，是由欧文氏杆菌属欧
文氏软腐细菌和假单胞杆菌属的一些细菌引起的病
症。该病危害面较广，且易泛滥成灾，是一种对花卉
生长威胁较大的病害。细菌侵染根茎、球茎、鳞茎、
块根、叶柄、叶片等营养器官，为害仙客来、君子兰、
马蹄莲、鸢尾、蔓绿绒、百合、唐菖蒲、风信子、秋海
棠、花叶万年青、虎皮兰、仙人掌、菊花、大丽花、花叶
芋、飞燕草、羽衣甘蓝等花卉［１］，植株受到这种革兰
第５期 李　冰，等：风信子软腐病病原的鉴定和杀菌剂试验
氏阴性菌侵染后，病势发展迅速并在几天内造成大
面积腐烂死亡。风信子作为重要的观赏植物，其生
产受到软腐病的严重威胁。此病在立陶宛、日本、波
多黎哥、德国、阿根廷、新西兰和中国的台湾均有发
生，给花卉生产造成巨大经济损失，至今没有特效的
农药能抑制该病的发生［２］。中国大陆引种风信子以
来，由于受温度、湿度等气候条件的影响，北京、上
海、广西、云南等地都有不同程度的发生［２］。
目前普遍认为软腐病的病原主要是由欧文氏菌
属的细菌引起［３］，在欧文氏菌属中某些种产生果胶
酶，使植物组织的薄壁细胞浸离降解，引起植物组织
软腐，这与风信子的发病症状非常相似，这类病原被
归入“ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ”群或称软腐群。其中最重要的病
原菌是胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种
（Ｅｒｗｉｎｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　ｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ，Ｅｃｃ，又叫
Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ　ｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ，
Ｐｃｃ）、胡萝卜软腐欧文氏菌黑胫亚种（Ｅｒｗｉｎｉａ
ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　ｓｕｂｓｐ．ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃａ，Ｅｃａ．）和菊欧文氏菌
（Ｅ．ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ），此外，杓兰欧文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａ
ｃｙｐｒｉｐｅｄｉｉ）和大黄欧文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａ　ｒｈａｐｏｎｔｉｃｉ）
也被归入此群［４］。
软腐病病原和防治的研究现今较多的集中于马
铃薯、大白菜、甜菜、魔芋等蔬菜类作物，花卉上主要
是马蹄莲［５］、鸢尾［６－７］、龙舌兰［８］等植物，国内之前关
于风信子的研究主要在栽培［９］花粉活力及育性等方
面［１０］。本文就上海地区风信子软腐病展开研究，确
定病原及其形态和特征，并进行相关农药杀菌剂抑
菌试验，以期为国内风信子软腐病防治提供借鉴。
１　材料与方法
１．１　供试材料
２００９年７月在上海交通大学七宝农场不同种
植点选取风信子Ｂｌｕｅ　Ｇｉａｎｔ的感病种球共１０头，从
感病种球中提取和纯化出一种菌株记为ＥＰ。药敏
试验所用农药：７５％百菌清可湿性粉剂（上海升联化
工有限公司）；８０％纯白多菌灵超微可湿性粉剂（重
庆树荣化工有限公司）；农用链霉素７２％可溶性粉
剂（石家庄通泰生化总厂）；甲基托布津（ＴＯＰＳＩＮ－
Ｍ）７０％可湿性粉剂（江苏龙灯化学有限公司）；烯酰
吗啉５０％可湿性粉剂（合肥星宇化学有限责任公
司）；２０％吗啉胍乙铜（病毒克ＴＭ）ＷＰ（山东烟台金
诺生物工程有限公司）；敌克松（４５％敌磺钠）湿粉
（辽宁省丹东市农药总厂）；杀毒矾（噁霜·锰锌）：含
代森锰锌５６％和噁霜灵８％（苏州先正达作物保护
有限公司）。
１．２　方法
１．２．１　病原菌分离纯化和致病性测定　
病原菌分离纯化采用梯度稀释法分离菌种［１１］，
取不同浓度梯度的菌悬液２００μＬ滴于已经冷却凝
固的肉汁胨（ＮＡ）平板培养基上，用涂菌棒涂菌，每
个浓度做３个重复，１６～４８ｈ后观察结果，拍照，观
察形状并记录。之后用接种环挑取不同的单菌落在
ＰＤＡ培养基上划线纯化培养３～５次，观察形状并
记录作为鉴定依据［４］，之后接种于ＮＡ培养基上，于
－２０℃条件下保存菌株待进一步实验。
致病性测定：将在 ＮＡ固体培养基上纯化培养
了２４ｈ分离得到的菌株记为ＥＰ，用无菌水配成浓
度为１×１０８　ＣＦＵ／ｍＬ （ｃｏｌｏｎｙ　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｕｎｉｔｓ　ｐｅｒ
ｍＬ）的菌悬液，接种病原。马铃薯块接种感染采用
针刺接种法［１１］。
１．２．２　病原菌的形态和染色观察　
接种纯化的菌种ＥＰ于 ＮＡ平板上，观察其菌
落形态及细菌生长状况，制备菌悬液，滴１滴于载玻
片上，亚甲基蓝染色，显微镜（ＸＳＰ－９ＣＤ：上海蔡康
光学仪器有限公司）下观察细菌形态。鞭毛染色采
用赖夫生染色法［７］。革兰氏染色采用结晶紫、草酸
铵染色法，并用３％ ＫＯＨ溶解试验验证［９］。
１．２．３　病原菌的１６ＳｒＤＮＡ基因同源性分析　
采用ＣＴＡＢ法提取病原菌 ＤＮＡ，扩增引物上
游引物ＰＦ：５－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＡＴＧＧＣＴＣＡＧ－
３［１２－１３］；下游引物ＰＲ：５－ＡＣＧＧＴＴＡＣＣＴＴＣＴＴＡ
ＣＧＡＣＴＴ－３［１２－１３］（由上海生工合成）。ＰＣＲ体系
为：１０×缓冲液２．５μＬ，２．５ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰｓ　１μＬ，
２５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＭｇＣｌ２１．５μＬ，５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＦ、ＰＲ各１
μＬ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶（５Ｕ／μＬ，Ｐｒｏｍｅｇａ）０．１μＬ，
模板ＤＮＡ　１．０μＬ，最后加ｄｄＨ２Ｏ至终体积２５μＬ。
ＰＣＲ反应参数为９５℃预变性５ｍｉｎ，９４℃３０ｓ，５４
℃退火３０ｓ，７２℃延伸２ｍｉｎ，３０次循环，最后７２℃
延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ产物经电泳，割胶纯化回收后由
华大生物技术有限公司测定。ＤＮＡ序列同源性通
过ＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴ　ｓｅｒｖｅｒ（Ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．
ｎｉｈ．ｇｏｖ）分析，系统进化树通过 Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ
（ｂｉｏＮＪ）方法建立。
１．２．４　风信子软腐病菌杀菌剂试验　
参照薛伟等人的方法［１４］，采用含毒介质法中的
最低抑制浓度法测定，在经过初试情况下，每种药剂
选定５个浓度进行测定，求出抑菌最低有效浓度。
１２
上 海 交 通 大 学 学 报 （农 业 科 学 版） 第２９卷
具体的操作是：将配好的不同浓度的每种药剂分别
与定量（５０ｍＬ／瓶）的ＮＡ培养基混合，摇匀后倒平
板（每瓶倒入７个直径７０ｍｍ的平皿），待其凝固
后，用接种环将菌悬液接种于培养基上。每个培养
皿中按４个方位接种４点，对照用与药剂等体积的
无菌水与培养基混合。于２８℃培养箱中培养，每隔
１２ｈ观察１次，检查细菌生长情况。每种药剂重复
６次，最后进行统计，计算出抑菌最低有效浓度。结
果检查标准：看不见接种点或接菌点干缩的，为抑制
生长，用“－”表示，浓度就用“Ｃ－”表示；接种点有菌
落生长，统计菌落直径并用“＋”表示，浓度用“Ｃ＋”
表示。
计算方法：每种药剂每次试验有５个浓度，根据
公式Ｃ′＝（Ｃ＋ ＋Ｃ－）／２，求出抑菌最低有效浓度
Ｃ′，再求该药剂几次重复试验的平均值Ｃ＝ （Ｃ′１＋
Ｃ′２＋…＋Ｃ′ｎ）／ｎ，则该平均值Ｃ就为这一药剂的
最低有效浓度。
２　结果及分析
２．１　病原菌分离纯化和致病性测定结果
在ＮＡ培养基上纯化培养１８ｈ后观察发现ＥＰ
菌落成乳白色，带透明状，光滑、圆形，有光泽，轻微
隆起，直径０．４～０．５ｍｍ。培养时间加长，菌落变
为半透明状。
将纯化菌种ＥＰ，接种于马铃薯上，２４ｈ时在针
刺孔周围出现腐烂状小点，２ｄ后呈水渍状，流出大
量液体，并伴有腐臭味；４、５ｄ后马铃薯出现外黑褐
色，针刺孔向周边扩展，发出恶臭。选取风信子｀Ｂｌｕｅ
Ｇｉａｎｔ健康种球进行接种试验，３ｄ后观察针刺孔周
边组织颜色较正常组织稍浅，随后腐烂的面积逐渐
增大并同时向纵深发展，有粘液流出，伴有腐臭味。
２．２　病原菌的形态和染色观察
在光学显微镜下观察菌株ＥＰ，亚甲基蓝染色观
察菌体表现为短杆状（图１），单生，大小为０．５～１
μｍ×１～３μｍ（图２）；结晶紫草酸铵染色观察菌体
颜色呈红色（图３），用接种针从溶有菌体的ＫＯＨ挑
起５～８ｃｍ高度观察到有丝状物出现，说明菌株是
革兰氏阴性菌；赖夫生染色法观察鞭毛多２～６根
（图２），周生。
２．３　病原菌的１６Ｓ　ｒＤＮＡ基因同源性分析
　　以菌株ＥＰ的基因组ＤＮＡ为模板，通过引物
ＰＦ、ＰＲ进行ＰＣＲ，１％琼脂糖电泳，结果见图４，获
得１　２５６ｂｐ的特异性片段并提交 Ｇｅｎｂａｎｋ，登入号
为 ＨＱ３２４２５８。ＤＮＡ序列同源性分析表明，ＥＰ与
已经报道的能够引起软腐病的相关菌株比较，与
Ｅｃｃ的同源性最高，达到９７％。系统进化树结果表
明（图５），ＥＰ与Ｅｃｃ（Ｐｃｃ）在同一簇中，由此确定风
信子软腐病病原为Ｅｃｃ。
２．４　农药杀菌剂抑菌试验
挑取单菌落，分别接种在不同浓度的 ＮＡ带毒
培养基中，每个处理３个重复，倒置培养在２８℃的
恒温培养箱中，记录４８ｈ后的观察结果（表１）。根
据表１中的数据结果，针对不同农药的抑菌效果，进
一步缩小农药梯度进行试验，并得出每种农药的最
低抑菌浓度（表２）。用ＤＵＮＣＡＮ新复极差法测验
表明：各不同农药处理之间存在显著性差异。在α
＝０．０５条件下，农用链霉素、杀毒矾和２０％吗啉胍
乙铜三者与其他处理之间存在显著性差异。结合浓
度分析，发现杀毒矾抑菌效果最好，有效浓度０．６４
×１０－６ｇ／ｍＬ即起到抑菌作用；其次为２０％吗啉胍
乙铜和农用链霉素７２％可溶性粉剂，在有效浓度２
×１０－４　ｇ／ｍＬ和５．７６×１０－４　ｇ／ｍＬ即可起到抑菌
作用。
３　讨　论
细菌的分类和鉴定工作目前已进入分子水平，
其中１６ＳｒＤＮＡ基因的同源性分析已成为细菌种属
２２
第５期 李　冰，等：风信子软腐病病原的鉴定和杀菌剂试验
图５　菌株ＥＰ和其他软腐病原细菌１６ＳｒＤＮＡ基因序列比较
Ｆｉｇ．５　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｏｆ　１６ＳｒＤＮＡ　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ＥＰ　ｆｒｏｍ　Ｈｙａｃｉｎｔｈ　ａｎｄ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｏｆ　Ｈｙａｃｉｎｔｈ
表１　不同浓度梯度农药４８ｈ后抑菌效果（菌落直径）
Ｔａｂ．１　Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄｅ　ａｆｔｅｒ　４８ｈ（Ｃｏｌｏｎｙ　ｄｉａｍｅｔｅｒ）
农药杀菌剂
Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄｅ
待测农药表观浓度梯度 （×１０－３ｇ／ｍＬ）
Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄｅ　ａｐｐａｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｇｒａｄｉｅｎｔ
０．２　 ０．６　 ０．８　 １　 ２　 ４　 ６　 ８　 １０
７５％百菌清可湿性粉剂
Ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｏｎｉｌ（７５％ｐｕｒｉｔｙ）
１．１＋ ０．７＋ ０．７＋ ０．５＋ ０．４＋ ０．２＋ ０－ ０－ ０－
８０％多菌灵可湿性粉剂
Ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ（８０％ｐｕｒｉｔｙ）
１．２＋ ０．８＋ ０．６＋ ０．４＋ ０．４＋ ０．２＋ ０－ ０－ ０－
农用链霉素７２％可溶性粉剂
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（７２％ｐｕｒｉｔｙ）
０．５＋ ０．２＋ ０－ ０－ ０－ ０－ ０－ ０－ ０－
甲基托布津７０％可湿性粉剂
Ｔｈｉｏｐｈａｎａｔｅ－ｍｅｔｈｙｌ（７０％ｐｕｒｉｔｙ）
１．０＋ ０．７＋ ０．７＋ ０．４＋ ０．２＋ ０．２＋ ０－ ０－ ０－
烯酰吗啉５０％可湿性粉剂
Ｄｉｍｅｔｈｏｍｏｒｐｈ（５０％ｐｕｒｉｔｙ）
１．１＋ ０．８＋ ０．８＋ ０．６＋ ０．５＋ ０．５＋ ０．３＋ ０－ ０－
２０％吗啉胍乙铜（病毒克ＴＭ）ＷＰ
Ｍｏｒｏｘｙｄｉｎｅ　Ｂ　Ｃｏｐｐｅｒ（２０％ｐｕｒｉｔｙ）
０．８＋ ０．５＋ ０．５＋ ０．２＋ ０－ ０－ ０－ ０－ ０－
敌克松４５％敌磺钠湿
Ｆｅｎａｍｉｎｏｓｕｌｆ（４５％ｐｕｒｉｔｙ）
１．０＋ ０．７＋ ０．５＋ ０．３＋ ０．３＋ ０．３＋ ０．２＋ ０－ ０－
杀毒矾可湿性粉剂８％
Ｏｘａｄｉｘｙｌ　ａｎｄ　５６％ Ｍａｎｃｏｚｅｂ
０－ ０－ ０－ ０－ ０－ ０－ ０－ ０－ ０－
　　＋：菌株生长；－：菌株无生长迹象
　　＋：Ｓｔｒａｉｎ　ｇｒｏｗｔｈ；－：Ｎｏ　ｓｉｇｎｓ　ｏｆ　ｓｔｒａｉｎ　ｇｒｏｗｔｈ
鉴定的标准方法之一，在细菌的分类研究中起着重
要作用［１５］。本研究采用１６ＳｒＤＮＡ基因的同源性
分析，结合传统研究方法，根据病原菌形态大小以及
分子研究，快速鉴定风信子软腐病病原为Ｅｃｃ，这与
３２
上 海 交 通 大 学 学 报 （农 业 科 学 版） 第２９卷
表２　不同农药杀菌剂４８ｈ后最低抑菌浓度
Ｔａｂ．２　Ｍｉｎｉｍｕｍ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄｅ　ａｆｔｅｒ　４８ｈ
序号
Ｎｕｍｂｅｒ
农药名称
Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄｅ
最低抑菌平
均表观浓度
／（×１０－３ｇ·ｍＬ－１）
Ｍｉｎｉｍｕｍ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ
ａｖｅｒａｇｅ　ａｐｐａｒｅｎｔ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
平均表观浓
度标准差
Ａｖｅｒａｇｅ　ａｐｐａｒｅｎｔ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎ
最低抑菌平
均有效浓度
／（×１０－３ｇ·ｍＬ－１）
Ｍｉｎｉｍｕｍ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ
ａｖｅｒａｇｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
１ ７５％
百菌清可湿性粉剂
Ｃｈｌｏｒｏｔｈａｌｏｎｉｌ（７５％ｐｕｒｉｔｙ）
２Ｂ ０．００５７７　 １．５
２ ８０％
多菌灵超微可湿性粉剂
Ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ（８０％ｐｕｒｉｔｙ）
２Ｂ ０．００５７７　 １．６
３
农用链霉素７２％可溶性粉剂
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（７２％ｐｕｒｉｔｙ）
０．８ＣＤ　 ０．０００２８８　 ０．５７６
４
甲基托布津７０％可湿性粉剂
Ｔｈｉｏｐｈａｎａｔｅ－ｍｅｔｈｙｌ（７０％ｐｕｒｉｔｙ）
２Ｂ ０．０００２８８　 １．４
５
烯酰吗啉５０％可湿性粉剂
Ｄｉｍｅｔｈｏｍｏｒｐｈ（５０％ｐｕｒｉｔｙ）
８Ａ ０．０００２８８　 ４
６ ２０％
吗啉胍乙铜
Ｍｏｒｏｘｙｄｉｎｅ　Ｂ　Ｃｏｐｐｅｒ（２０％ｐｕｒｉｔｙ）
１Ｃ ０．０００２８８　 ０．２
７
敌克松４５％敌磺钠湿粉
Ｆｅｎａｍｉｎｏｓｕｌｆ（４５％ｐｕｒｉｔｙ）
７ＡＢ　 ０．０００２８８　 ３．１５
８
杀毒矾可湿性粉剂
８％ Ｏｘａｄｉｘｙｌ　ａｎｄ　５６％ Ｍａｎｃｏｚｅｂ １×１０
－３　Ｄ　 ２．８８×１０－７　 ０．６４×１０－３
　　注：拥有相同字母的处理之间差异不显著（Ｐ＜０．０５）
　　Ｎｏｔｅ：Ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｌｅｔｔｅｒ（Ｐ＜０．０５）
荷兰Ｊａｆｒａ等人在研究风信子软腐病防治时指出风
信子软腐病病原是Ｄｉｃｋｅｙａ　ｚｅａｅ不同，Ｄｉｃｋｅｙａ属
之 前 归 于 Ｅｒｗｉｎｉａ　ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ （Ｅｃｈ．）和
Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ（Ｐｃｈ．）［１６］。通过本实
验的系统发育树分析，可以发现所提菌株 ＥＰ与
Ｄｉｃｋｅｙａ　ｚｅａｅ处于不同的分支，这可能与风信子栽
培所处的地理位置和气候等因素不同有关。
鉴于风信子软腐病的危害性和广泛性，对风信
子软腐病的防治和控制性研究亟待开展。目前国际
上常用的软腐病控制方法是通过灌溉、地膜覆盖和
土壤通气等措施来预防［１７－１８］，而防治仍主要使用化
学杀菌剂，本实验在鉴定出软腐菌病原后，研究了８
种常用农药杀菌剂对软腐病病原体的抑菌效果，从
抑菌最低有效浓度来看，杀毒矾抑菌最低有效浓度
最小，为０．６４×１０－６ｇ／ｍＬ；其次是２０％吗啉胍乙铜
最低有效浓度为２×１０－４ｇ／ｍＬ，接下来是农用链霉
素７２％可溶性粉剂，有效浓度５．７６×１０－４ｇ／ｍＬ，甲
基托布津和多菌灵、百菌清位于其后。根据实验室
的分析结果，杀毒矾、吗啉胍乙铜和农用链霉素对软
腐病病菌的生长具有显著的抑制效应，与其他杀菌
剂相比，较低浓度即可起到抑制病原细菌生长的作
用，可以作为田间实际药用施肥的参考。
参考文献：
［１］　王森，李依娜．花卉细菌性软腐病的症状识别与综合
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