全 文 ：诱导百合鳞片芽的影响因子研究
李　黛1　　谈　锋2＊
(1.遵义师范学院生物系　贵州遵义　563002;　2.西南师范大学生命科学学院　重庆　630715)
摘要:采用正交试验的方法 ,在 MS 固体培养基上研究鳞片位置和不同浓度蔗糖 、6-BA(6-苄基腺嘌呤)及 NAA(α-奈乙酸)
对诱导淡黄花百合不定芽的影响。结果表明:最佳外植体为中层鳞片 ,最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/ L～ 1
mg/L NAA+3%～ 5%蔗糖。
关键词　淡黄花百合　丛生芽诱导　正交试验
Research of the Factors Affecting the Bud Induction of
Lilium sulphureum Baker Scale
Li Dai
1 , 　　Tan Feng2
(1.Dept.of Biology , Zunyi Normal College , Zunyi 563002;
2.College of Life Science of Southwest China Normal University ,Chongqing 630715)
Abstract:Using the method of orthogonal experiment ,we study the influence of scale position ,different density of
sucrose ,6-BA and NAA on the induction of Lilium sulphureum Baker s adventitious bud in MS solid medium.The
result shows that the best explant is scale in the middle.The best medium is MS+0.5mg/L 6-BA+0.5-1mg/L
NAA+3%-5% sucrose.
Key words　Lilium sulphureum Baker　Tufted-bud induction　Orthogonal experiment
淡黄花百合(Lilium sulphureum Baker)是百合科百合属中的一个野生种 ,为多年生宿根草本植物 ,产于贵州。
其经济器官主要是鳞片 ,可制成干片或加工成百合粉等 ,既可药用又可作为保健食品 。由于百合组织培养繁殖与
传统繁殖方法相比具有节省用种量 、繁殖速度快 、减少病害等优点 ,目前对百合组培快繁研究较多[ 14] 。但对药食
两用品种淡黄花百合的研究尚未见报道 ,本文诱导对淡黄花百合组培芽的影响因子进行了研究。
1　材料与方法
1.1　材料
供试材料为淡黄花百合(Lilium sulphureum Baker)鳞片 ,采自贵州省务川县野生林下 ,盆栽于西南师范大学生
命科学学院药用植物园内紫色壤土中。
1.2　方法
1.2.1　外植体消毒
将鳞茎用自来水冲洗干净 、分瓣 ,其中 14层鳞片为外层鳞片 ,510层鳞片为中层鳞片 , 11层以内的为内层鳞
片 ,分别在自来水下流水冲洗 30min左右 ,于超净工作台上用 75%的酒精浸泡 10 s左右 ,然后用 0.1%的升汞消
毒15min ,用无菌水冲洗5次以上 ,切去鳞片上部 ,留下长约 1 cm的中下部待用。
1.2.2　芽的诱导
采用正交试验筛选芽诱导的最佳培养基 ,研究激素和蔗糖浓度 、外植体位置对淡黄花百合鳞片芽诱导的影
响。所用基本培养基均为 MS培养基 ,正交试验采用 L9(3)4正交表 ,6-BA 、NAA 、蔗糖浓度和外植体位置四因素三
·18·
第 23 卷第 11 期　　2004年 11 月　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　Vol.23　No.11　Nov.2004
收稿日期:2004-07-02。
　作者简介:李黛(1962),女 ,副教授;主要研究方向为植物水分生理和植物组织培养。 　通讯作者:谈锋。
表1　L9(3)4正交试验表头设计表
水平 6-BA/A(mg/ L)
NAA/ B
(mg/ L)
蔗糖/C
(%)
外植体
位置/D
1 0.5 0.1 2 外
2 1 0.5 3 中
3 1.5 1 5 内
水平的试验设计见表 1。
将上述已灭菌的鳞片接种到正交试验的 9组
培养基中 ,每组 11瓶 ,每瓶接一个鳞片。在温度
为25℃,光照强度为 1 500 lx , 照光时间为 11 h/d
的条件下培养。26 d 后统计不定芽的数量和大
小 ,36 d后统计成苗情况 ,并进行方差分析 。
表 2　芽诱导 L9(3)4试验结果
组号 A B C D
外植
体数
(个)
不定芽
诱导率
(%)
不定芽
总数
(个)
增殖
倍数
芽的
大小
(分)
苗
数
(个)
愈伤组织
诱导率
(%)
愈伤组
织大小
(分)
1 0.5 0.1 2 外 11 46 33 3.0 1.82 2.55 82 3.27
2 0.5 0.5 3 中 11 91 109 9.9 6.55 6.91 91 6.55
3 0.5 1.0 5 内 11 100 85 7.7 6.73 3.46 100 5.27
4 1.0 0.1 3 内 11 91 52 4.7 4.55 2.36 82 3.27
5 1.0 0.5 5 外 11 64 34 3.1 1.82 2.91 82 5.09
6 1.0 1.0 2 中 11 100 71 6.5 3.46 2.00 100 3.27
7 1.5 0.1 5 中 11 100 81 7.4 6.18 4.55 91 5.27
8 1.5 0.5 2 内 11 82 39 3.6 2.36 0.55 64 2.18
9 1.5 1.0 3 外 11 73 40 3.6 2.73 2.18 91 4.73
　　注:芽的大小按记分方法进行评价,其记分方法是:除未形成芽的鳞片外 ,其余的鳞片按芽的大
小分成四组 ,根据生长情况 ,从好到差分别记 8分 、6分 、4分和 2分 ,未形成芽的记 0分 ,然后计
算出每组的平均得分。
表 3　芽诱导试验结果的方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度
平均偏差
平方和 F值 F0.05 F0.01
芽数
A 94.93 2 47.47 3.30＊ 3.10 4.85
B 13.66 2 6.83 0.48
C 66.81 2 33.41 2.32
D 360.63 2 180.32 12.53＊＊
e 1294.73 90 14.39
合计 1830.76 98
芽大小
A 54.38 2 27.19 6.80＊＊
B 30.14 2 15.07 3.77＊
C 109.17 2 54.59 13.65＊＊
D 190.38 2 95.19 23.80＊＊
e 360.00 90 4.00
合计 744.07 98
苗数
A 82.74 2 41.37 6.39＊＊
B 15.83 2 7.92 1.22
C 94.38 2 47.19 7.29＊＊
D 126.99 2 63.50 9.81＊＊
e 582.13 90 6.47
合计 902.07 98
愈伤组织大小
A 25.30 2 12.65 2.14
B 7.84 2 3.92 0.66
C 114.81 2 57.41 9.70＊＊
D 35.00 2 17.50 2.96
E 532.36 90 5.92
合计 715.31 98
　　　注:＊显著 , 　　＊＊极显著。
2　结果与分析
2.1　试验结果
将灭菌后的鳞片接种到上述正交
试验的 9组培养基上 ,约 8d鳞片转成
绿色或紫色 ,基部切口处呈淡黄色 ,大
部分有不明显突起 。26 d左右形成不
定芽。36 d左右部分不定芽形成苗 ,
长出长 12 cm 左右的叶片 。此外 , 在
部分鳞片上形成大量愈伤组织 。各组
培养基中芽和苗的生长情况见表 2。
　　对试验结果进行方差分析 ,结果
见表 3。
2.1.1　外植体位置对芽诱导的影响
从表 3可看出:鳞片位置对诱导
不定芽和苗都有较大影响 。从形成的
不定芽数量和大小来看 ,均以中层鳞
片最好 ,内层次之 ,外层最差 ,差异达
极显著水平 , 这与吕玉虎[ 5] 、阮少
宁[ 2] 、王刚[ 6]等人的研究结果不一致。
不定芽的诱导率也是接种中层鳞片的
2 、6 、7 组最高 ,分别为 91%、100%和
100%,平均为 97%;接种内层鳞片的
3 、4 、8 组培养基次之 ,分别为 100%、
91%和 82%,平均为 91%;接种外层
鳞片的 1 、5 、9组培养基最差 ,分别为
46%、64%和 73%, 平均 61%(见表
2)。从形成苗的数量来看 ,中层鳞片
最好 ,外层次之 ,内层最差 。方差分析
结果表明 ,鳞片位置对芽的数量 ,大小
和成苗数的影响都达到差异极显著水
平。此外 ,在试验中我们发现外层鳞
片较易受污染 ,内层鳞片诱导的芽虽
不易成苗 ,但将其切割下来转到新的
培养基上后可成苗 。因此 ,利用淡黄
花百合鳞片作外植体诱导不定芽时 ,
在外植体的选择上 ,应以中层鳞片为
主 ,较小的内层鳞片和 13层外层鳞片则应弃之。
·19·
第 23 卷第 11 期　　2004年 11 月　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　Vol.23　No.11　Nov.2004
2.1.2　蔗糖浓度对芽诱导的影响
从表 3可看出 ,不同蔗糖浓度诱导的不定芽数量和苗数各不相同依次为:3%>5%>2%,且对苗数的影响达
到了极显著水平 ,对不定芽数量的影响未达显著水平;不同蔗糖浓度诱导的不定芽由大到小依次为:5%>3%>
2%,均达极显著水平。这一结果说明 ,淡黄花百合诱导不定芽可选择 5%的蔗糖浓度 ,虽然增殖倍数会有所下
降 ,但不定芽较粗壮;也可选择 3%的蔗糖浓度 ,诱导出不定芽后 ,转入蔗糖浓度为 5%的培养基中壮苗 。
2.1.3　激素浓度对芽诱导的影响
从表 3可看出 ,6-BA的浓度差异对不定芽的数量和大小 、苗数的影响较大 ,均以 0.5mg/L 为最好 ,1mg/L 和
1.5mg/L较差 ,其中对不定芽数量的影响达到显著差异水平 ,对不定芽大小和苗数的影响达到极显著差异水平。
NAA浓度的差异对不定芽的数量和大小的影响以 1mg/L为最好 ,对苗数的影响以 0.5mg/L 为最好 ,但除对芽大
小的影响差异达显著水平外 ,其余的差异均未达到显著水平 。在正交试验中 ,2 、3组培养基中的鳞片诱导出的不
定芽数较多也较粗壮 ,第 2组培养基中的鳞片形成的苗数也较多(图 1 、图 2),这表明 ,淡黄花百合芽诱导的最适
培养基应为:MS+0.5mg/L6-BA +0.5mg/L ～ 1mg/L NAA 。
图 1　第二组培养基中诱导形成
的丛生芽和苗
图 2　第三组培养基中诱导形成
的丛生芽和苗
2.1.4　愈伤组织的诱导情况
在芽诱导的过程中往往伴随着愈伤组织的形成。试验中我们发现 ,激素对愈伤组织的诱导以 0.5mg/L6-BA
和0.5mg/L NAA为好 ,在此激素配比的培养基中 ,诱导出的愈伤组织块较大。
从鳞片位置看 ,愈伤组织的诱导率以 2 、6 、7组中的中层鳞片为最高 ,分别是 91%、100%、91%,平均 94%;1 、
5 、9组中的外层鳞片虽愈伤组织生长较好 ,但诱导率不如中层鳞片高 ,分别是82%、82%和 91%,平均 85%;3 、4 、8
组中的内层鳞片诱导率最低 ,分别是 100%、82%、64%,平均 82%,而且形成的愈伤组织也较小 ,所以诱导愈伤组
织以中层鳞片为宜。
愈伤组织在蔗糖浓度为 5%的 3 、5 、7组培养基中诱导率较高 ,分别为 100%、82%、91%,平均 91%,愈伤组织
较大生长也较好 ,蔗糖浓度为 3%的次之 ,2%最差 ,差异均达极显著水平 ,因此 ,诱导愈伤组织的蔗糖浓度以 3%-
5%为宜 。
参考文献
1　安利民 ,杨红燕 , 李惠芝等.利用组织培养对秦岭百合属植物的保种繁殖研究 ,西北植物学报 , 1996 , 16(5):57.
2　阮少宁 ,杨华 , 梁一池等.香水百合组织培养的试验研究 ,福建林学院学报 , 2001 , 21(2):142145.
3　李标 ,胡琼华 , 何显静.紫红花滇百合的组织培养 ,植物生理学通讯 , 2002 , 38(2):40.
4　庄志鸿 ,刘建.试管内形成东方百合鳞茎的组织培养 , 植物生理学通讯 , 2002 , 38(2):40.
5　吕玉虎 ,李彬青 , 吴淑平等.百合的离体组织培养和快速繁殖 ,信阳农业高等专科学校学报 , 2002 , 12(2).
6　王刚 ,杜捷 , 李桂英等.兰州百合和野百合组织培养及快速繁殖研究 ,西北师范大学学报(自然科学版), 2002 , 38(1):6971.
·20·
第 23 卷第 11 期　　2004年 11 月　　　　　　　　　　种　子(Seed)　　　　　　　　　　　Vol.23　No.11　Nov.2004