全 文 ：地耳草黄酮类成分ＵＰＬＣ－ＭＳ分析
陆黎１，韩乐２，邹立思２，刘训红２＊
（１．南京中医药大学附属南京市中医院，江苏 南京　２１０００１；２．南京中医药大学药学院，江苏 南京　２１００２３）
摘要：目的　建立超高效液相色谱－质谱仪联用技术（ＵＰＬＣ－ＭＳ）对地耳草中黄酮类成分分析的方法。方法　采用Ａｌｔｉｍａ　Ｃ１８
色谱柱（５μｍ，２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，ｉ．ｄ．），以乙腈－０．８％醋酸为流动相，梯度洗脱，流速为０．８ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５４ｎｍ，柱温
为３０℃。在电喷雾负离子模式下监测采集数据。结果　初步鉴定８种黄酮类化合物，并同时测定其中６种黄酮的含量。６
种黄酮类化合物的浓度与峰面积的线性关系良好（ｒ２＞０．９９８　２）；加样回收率为９７．６％～９９．７％。结论　该方法准确可靠，重
现性好，可作为地耳草内在质量评价的依据。
关键词：ＵＰＬＣ－ＭＳ；地耳草；黄酮类
中图号：Ｒ２８４．１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－０４８２（２０１３）０５－０４８２－０４
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｈｅｒｂａ　Ｈｙｐｅｒｉｃｉ　Ｊａｐｏｎｉｃｉ　ｂｙ　ＵＰＬＣ－ＭＳ
ＬＵ－ｌｉ　１，ＨＡＮ　Ｌｅ２，ＺＯＵ　Ｌｉ－ｓｉ　２，ＬＩＵ　Ｘｕｎ－ｈｏｎｇ２＊
（１．Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ，２１０００１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｕｎｉ－
ｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ，２１００２３，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　Ｕｌｔｒａ　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＵＰＬＣ－ＭＳ）ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｆｌａ－
ｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｈｅｒｂａ　Ｈｙｐｅｒｉｃｉ　Ｊａｐｏｎｉｃｉ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ａｎ　Ａｌｔｉｍａ　Ｃ１８ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ
ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　ａ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．８％ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｔ　ａ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　０．８ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ
ｗａｓ　２５４ｎｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３０℃．Ｔｈｅ　ｄａｔａ　ｗａｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ　ｉｏｎ　ｍｏｄｅ．ＲＥＳＵＬＴＳ
　８ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｂｅｉｎｇ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，ｓｉｘ　ｏｆ　ｔｈｅｍ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈｅ　ｄｅ－
ｔｅｃｔｅｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｈａｖｅ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ（ｒ２＞０．９９８　２），ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒ－
ｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　９７．６％～９９．７％．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｂｅｉｎｇ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ＵＰＬＣ－ＭＳ　ｃａｎ　ｂｅ
ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｈｅｒｂａ　Ｈｙｐｅｒｉｃｉ　Ｊａｐｏｎｉｃｉ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ＵＰＬＣ－ＭＳ；Ｈｅｒｂａ　Ｈｙｐｅｒｉｃｉ　Ｊａｐｏｎｉｃｉ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ
　　地耳草系藤黄科植物地耳草 Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ　ｊａ－
ｐｏｎｉｃｕｍ Ｔｈｕｎｂ．干燥全草，具清热利湿、解毒消肿
之功效，主治湿热黄疸、泄泻、痢疾、疮痂痈肿、急性
肾炎、血吸虫病等症，其注射液已广泛用于临床，治
疗急、慢性肝炎，效果均显著［１］。
目前对地耳草的质量控制，多用 ＨＰＬＣ法同时
测定地耳草中黄酮类成分的含量或进行指纹图谱评
价［２－３］。但有关采用 ＵＰＬＣ－ＭＳ联用技术对地耳草
的研究未见报道。本文采用ＵＰＬＣ－ＭＳ联用技术对
不同产地、不同采收期地耳草进行分析，测定其总离
子流图谱，并对部分色谱峰进行了初步归属，通过与
对照品及相关质谱数据比较分析，初步鉴定其中８
种黄酮类化合物，并用 ＵＰＬＣ－ＤＡＤ法对６种黄酮
类化合物的含量同时测定。该方法准确可靠，重现
性好，可作为地耳草内在质量评价的依据。
１　材料
ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ超高效液相色谱系统（包含
二元高压泵，自动进样器，柱温箱，二极管阵列检测
器）；ＳＹＮＡＰＴ质谱系统和 Ｍａｓｓｌｙｎｘ　４．１质谱工作
站（美国 Ｗａｔｅｒｓ公司）。
山柰酚对照品（中国药品生物制品检定所提供，
批号：１１０８６１－２００３０３）；槲皮素对照品（中国药品生
物制品检定所提供，批号：１００８１－９９０５）；芦丁对照品
（中国药品生物制品检定所提供，批号：００８０－９７０５）；
—２８４—
南京中医药大学学报２０１３年９月第２９卷第５期
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＮＡＮＪＩＮＧ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＴＣＭ　Ｖｏｌ．２９　Ｎｏ．５　Ｓｅｐ．２０１３
收稿日期：２０１３－０６－１０；修稿日期：２０１３－０７－０４
基金项目：江苏高校优势学科建设工程资助（ｙｓｘｋ－２０１０）
作者简介：陆黎（１９７６－），女，江苏南京人，南京中医药大学附属南京市中医院主管中药师。＊通信作者：ｌｉｕｘｕｎｈ１９５９＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2013.05.026
异槲皮苷对照品（上海博蕴生物科技有限公司，批
号：２１６３７－２５－２）；槲皮苷对照品（中国药品生物制品
检定所提供，批号：１１１５３８－２００３０２）；金丝桃苷对照
品（中国药品生物制品检定所提供，批号：１１１５２１－
２００３０３）。
乙腈（Ｍｅｒｃｋ　ＫｇａＡ试剂公司，ＨＰＬＣ级，批号：
１１－２０／２１／２２－３６）；甲醇（江苏汉邦科技有限公司，色
谱纯，批号：２００７０３１０２）；甲醇（上海实意化学试剂有
限公司奥佳化工有限公司，批号：２００７１０１８）；无水乙
醇（国药集团化试有限公司，批号：２００７０４１２）；蒸馏
水自制。其余所有试剂均为分析纯。
地耳草各产地样品实地采集或由当地药材公司
提供，不同商品由南京各医院门诊部中药房提供，编
号为：Ｓ１－河北，Ｓ２－江苏，Ｓ３－安徽，Ｓ４－广西，Ｓ５－福建，
Ｓ６－湖南，Ｓ７－江西，Ｓ８－南京市中医院，Ｓ９－南中医大
国医堂，Ｓ１０－南中医大百草堂，Ｓ１１－南京市传统中医
门诊部。地耳草不同采收期 （Ｓ１２－０８０５１３，Ｓ１３－
０８０５２３，Ｓ１４－０８０６０３，Ｓ１５－０８０６１３，Ｓ１６－０８０６２３，Ｓ１７－
０８０７０３，Ｓ１８－０８０７１３，Ｓ１９－０８０７２３）样品均采自福建
省尤溪县台溪乡台溪村第二洋。均经南京中医药大
学中药鉴定教研室刘训红教授鉴定为藤黄科植物地
耳草Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ　ｊａｐｏｎｉｃｕｍ Ｔｈｕｎｂ．干燥全草。留
样凭证存放于南京中医药大学中药鉴定实验室。
２　方法与结果
２．１　色谱－质谱条件
Ａｌｔｉｍａ　Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ　ｉｄ，５μｍ）；柱温３０
℃；流动相：Ａ－０．８％醋酸，Ｂ－乙腈；梯度洗脱：０～１０
ｍｉｎ，Ａ∶Ｂ为８９∶１１，１８ｍｉｎ，Ａ∶Ｂ线性改变到８４
∶１６，１８～３０ｍｉｎ，Ａ∶Ｂ为８４∶１６，３５ｍｉｎ，Ａ∶Ｂ
线性改变到７７∶２３，３５～４０ｍｉｎ为７７∶２３，５５ｍｉｎ，
Ａ∶Ｂ线性改变到６０∶４０，６５ｍｉｎ，Ａ∶Ｂ线性改变
到８９∶１１；６５～７０ｍｉｎ，Ａ∶Ｂ为８９∶１１；流速：０．８
ｍＬ／ｍｉｎ；检测器：ＤＡＤ；检测波长：２５４ｎｍ；进样量：
１０μＬ。
离子化模式：电喷雾离子化（负离子模式），毛细
管电压：３　０００Ｖ，锥孔电压：３０Ｖ，碰撞能电压：６
ｅＶ，ＭＳＥ碰撞电压：１０～５０ｅＶ，离子源温度：１２０
℃，除溶剂温度：３５０℃；除溶剂气体：６００Ｌ／ｈ氮气；
采集范围：ｍ／ｚ　１００～１０００，碰撞气体为氩气。
２．２　对照品溶液制备
精密称取芦丁对照品９．２８ｍｇ、槲皮素对照品
８．８４ｍｇ和山奈酚对照品５．６９ｍｇ，分别置于５０ｍＬ
量瓶中，用８０％甲醇溶解并定容。精密称取异槲皮
苷对照品７．２９ｍｇ、槲皮苷对照品８．７０ｍｇ、金丝桃
苷对照品６．４８ｍｇ，分别置于１０ｍＬ量瓶中，用
８０％甲醇溶解并定容。制得浓度分别为芦丁０．１８５
５ｍｇ／ｍＬ、金丝桃苷０．６４８ｍｇ／ｍＬ、异槲皮苷０．７２９
ｍｇ／ｍＬ、槲皮苷０．８７ｍｇ／ｍＬ、槲皮素０．１７６　７ｍｇ／
ｍＬ和山奈酚０．１１３　７ｍｇ／ｍＬ的对照品储备液。精
密吸取芦丁、槲皮素、山奈酚储备液６ｍＬ、异槲皮苷
储备液５ｍＬ、槲皮苷储备液８ｍＬ、金丝桃苷储备液
０．６ｍＬ，溶于５０ｍＬ量瓶中，则配成混合对照品液。
逐级稀释，使芦丁浓度依次为：１．１１３、４．４５２、６．６７８、
８．９０４、１１．１３０、２２．２６０μｇ／ｍＬ，金丝桃苷的浓度依
次为：０．３８８　８、１．５５５　２、２．３３２　８、３．１１０　４、３．
８８８、７．７７６μｇ／ｍＬ，异槲皮苷的浓度依次为：３．
６４８、１４．５９０、２１．８８６、２９．１８１、３６．４７６、７２．９５２μｇ／
ｍＬ，槲皮苷的浓度依次为：６．９６３、２７．８５０、４１．７７５、
５５．７００、６９．６３、１３９．２５１μｇ／ｍＬ，槲皮素的浓度依次
为：１．０６０、４．２４２、６．３６２、８．４８３、１０．６０４、２１．２０８μｇ／
ｍＬ，山 奈 酚 的 浓 度 依 次 为 ０．６８２、２．７３０、４．
０９５、５．４６０、６．８２４、１３．６４９μｇ／ｍＬ。
２．３　供试品溶液制备
精密称取样品粉末（过３号筛）１．０ｇ，加入８０％
甲醇５０ｍＬ，回流２７０ｍｉｎ，过滤，滤液用８０％甲醇
定容至１００ｍＬ量瓶中，过０．４５μｍ微孔滤膜，作为
供试品溶液。
２．４　标准曲线、检测限与定量限
精密吸取上述不同浓度的混合对照品溶液各
１０．００μＬ，进样作 ＨＰＬＣ分析，以对照品的峰面积
（Ｙ）对相应的浓度（Ｘ）进行线性回归，得回归方程、
相关系数及线性范围；以各化合物的信噪比等于３
（Ｓ／Ｎ＝３）时的相应浓度确定最低检测限（ＬＯＤ）；以
各化合物的信噪比等于１０（Ｓ／Ｎ＝１０）时的相应浓
度确定最低定量限（ＬＯＱ）。结果见表１。
２．５　方法学考察
精密度试验：在１ｄ内取一定浓度的混合对照
品液，重复进样６次，得日内精密度，各对照品平均
峰面 积 的 ＲＳＤ 分 别 为 １．５１％、１．９６％、１．
４７％、１．２３％、０．８２％、１．９０％；连续３ｄ取一定浓度
的混合对照品液，重复进样，得日间精密度，芦丁、金
丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、山奈酚的平均峰
面积 ＲＳＤ 分别为 ２．１１％、２．４３％、１．８４％、２．
０１％、１．４６％、２．７２％。
—３８４—陆黎，等：地耳草黄酮类成分ＵＰＬＣ－ＭＳ分析　第５期
表１　６种黄酮化合物的标准曲线、检测限与定量限
化合物 标准曲线 ｒ２
线性范围／
（μｇ·ｍＬ
－１）
检测限／
（μｇ·ｍＬ
－１）
定量限／
（μｇ·ｍＬ
－１）
芦丁 Ｙ＝３７　４５２　Ｘ＋４　３２１．５　０．９９８　８　１．１１～２２．２６　 ０．１０　 ０．３４
金丝桃苷 Ｙ＝２３　１６７　Ｘ＋２　７１６．７　０．９９８　６　 ０．３９～７．７８　 ０．０５　 ０．１２
异槲皮苷 Ｙ＝１５６　２７８　Ｘ＋２７　８３５　０．９９８　４　３．６５～７２．９５　 ０．３２　 １．１１
槲皮苷 Ｙ＝４０２　１０７　Ｘ＋５３　２１１　０．９９９　２　６．９６～１３９．２５　 ０．６４　 ２．１１
槲皮素 Ｙ＝６８　３２９　Ｘ＋１２　８３７　 ０．９９８　６　１．０６～２１．２１　 ０．１１　 ０．３４
山奈酚 Ｙ＝３０　４８１　Ｘ＋３　７６１．６　０．９９８　２　０．６８～１３．６５　 ０．０６　 ０．２２
　　稳定性试验：取地耳草（Ｓ９）样品供试液，分别
在１、２、４、８、１６、２４ｈ进样６次，６种黄酮平均峰面积
的 ＲＳＤ 分 别 为 １．７５％、２．４６％、１．０３％、１．
７２％、１．６５％、２．０２％。
重复性试验：精密称取地耳草（Ｓ９）样品６份，每
份１．０ｇ，分别按供试品液制备方法制成供试液，进
样测定，６种黄酮类成分平均迁移时间、峰面积的
ＲＳＤ 分 别 为 １．７８％、２．５８％、１．３３％、０．
９２％、０．７７％、１．４２％。
加样回收率试验：取已知含量的地耳草（Ｓ９）样
品５份，每份０．５ｇ，精密称定，分别精密加入不同量
的芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素及山奈
酚对照品，按供试品溶液制备方法制备加样回收供
试品溶液，并按样品测定方法进行测定，计算回收
率。各 对 照 品 的 平 均 回 收 率 分 别 为 ９９．
５％、９８．５％、９９．７％、９９．１％、９８．９％、９７．６％。
ＲＳＤ 分别为１．４２％、１．６３％、１．４３％、１．２１％、２．
３７％、２．３１％。
２．６　样品测定
精密吸取供试品溶液１０．００μＬ，注入超高效液
相色谱仪，进行测定。根据相应线性关系计算样品
含量。结果见表２，图１。
表２　不同产地、不同商品及不同采收期地耳草中６种黄酮含量测定结果（ｍｇ·ｇ－１，ｎ＝２）
ＮＯ． 芦丁 金丝桃苷 异槲皮苷 槲皮苷 槲皮素 山奈酚 总量
Ｓ１ － ０．０４２　７　 ４．２２２　１　 ８．０８２　４　 １．８４６　４　 ０．２６４　８　 １４．４５８　４
Ｓ２ － ０．０４８　１　 ７．２３１　１　 ８．７８５　１　 ２．１０３　７　 ０．２６６　８　 １８．４３４　８
Ｓ３ － － １．６２０　８　 ３．０４７　１　 １．６３８　１　 ０．１６５　３　 ６．４７１　３
Ｓ４　 ０．１５７　２　 ０．１０４　１　 ４．１３８　１　 ５．２８８　６　 １．５５６　１　 ０．１８０　９　 １１．４２５
Ｓ５　 ０．１２３　８ － ３．５６２　５　 ８．５１１　２　 １．５１９　６　 ０．２３６　１　 １３．９５３　２
Ｓ６ － － ４．０１１　８　 ５．１１９　０　 ０．５４４　５　 ０．０８４　８　 ９．７６０　１
Ｓ７ － － ２．４４１　６　 ４．０５７　９　 １．６８０　３　 ０．２０３　０　 ８．３８２　８
Ｓ８　 １．３０５　０　 ０．７６７　８　 １．６２７　８　 ２．０５９　７　 １．８４０　８　 ０．０８６　６　 ７．６８７　７
Ｓ９　 １．２５１　５　 ０．７２８　２　 １．４９３　２　 １．８８５　４　 １．８３０　０　 ０．０９６　１　 ７．２８４　４
Ｓ１０　 ０．９０５　３　 ０．７３６　０　 ３．０３２　８　 ４．５２９　４　 １．３２８　２　 ０．１６３　０　 １０．６９４　７
Ｓ１１ － ０．０４３　１　 ４．７８９　６　 ７．３００　８　 １．２０１　９　 ０．２８５　６　 １３．６２１　０
Ｓ１２　 ０．０７３　９ － ４．７９８　３　 ７．２９９　０　 １．２０６　２　 ０．２９５　４　 １３．６７２　８
Ｓ１３　 ０．１９８　８　 ０．５３２　６　 ７．９４７　１　 ３．２９１　０　 ２．８２０　１　 ０．３１７　４　 １５．１０７　０
Ｓ１４ － ０．０５２　５　 ３．９２４　４　 ８．４８１　１　 ２．１５４　４　 ０．３６４　９　 １４．９７７　３
Ｓ１５　 ０．１０５　２　 ０．２１１　０　 ３．１００　５　 ８．２０３　３　 ２．４３２　０　 ０．５３０　１　 １４．５８２　１
Ｓ１６ － － ６．２７２　６　 １２．９０１　０　 ２．７９２　０　 ０．９３５　１　 ２２．９００　７
Ｓ１７ － － ６．３４０　１　 １２．６７７　０　 １．５８４　０　 ０．２９９　８　 ２０．９００　９
Ｓ１８ － － ６．２１９　２　 ９．４５５　３　 ０．８５３　４　 ０．１５５　７　 １６．６８３　６
Ｓ１９ － ０．０３０　４　 ６．９９６　５　 ８．２３９　１　 ０．７２７　３　 ０．９４３　８　 １６．９３７　１
　　　　　　　　　　注：“－”表示未检出。
２．７　黄酮类成分鉴别
样品通过 ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＥＳＩ负离子模式扫描获
得地耳草图谱中的一些结构信息，因为黄酮类成分
在负离子模式扫描灵敏度较高。通过色谱图、ＵＶ
吸收和ＥＳＩ－ＭＳ质谱比较，结合对照品及相关文献
分析，初步鉴定出其中８个黄酮类成分（见表３，图
１）。
—４８４— 南京中医药大学学报２０１３年９月第２９卷第５期
１．二氢槲皮素－７－Ｏ－α－Ｌ－鼠李糖苷；２．芦丁；３．金丝桃苷；４．异槲皮苷；
５．槲皮苷；６．槲皮素－７－Ｏ－α－Ｌ－鼠李糖苷；７．槲皮素；８．山奈酚
图１　混合对照品液（Ａ）和样品液（Ｂ）的ＵＰＬＣ色谱图
３　讨论
１）色谱条件的优化　提取方法的选择：以芦丁、
金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、山奈酚的总含
量为指标，比较回流法与超声提取法，试验结果表
明，回流法提取的总含量高于超声提取法的含量，故
选择直接回流法制备供试品。
提取溶剂的选择：以芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、
槲皮苷、槲皮素、山奈酚的总含量为指标，比较６０％
甲醇、７０％甲醇、８０％甲醇、９５％甲醇等不同提取溶
剂，试验结果表明，以８０％甲醇提取，４种黄酮总含
量最高，确定８０％甲醇为提取溶剂。
提取条件的优选：选择溶剂用量、提取时间、提
取次数３个因素，每个因素选择３个水平，设定因素
水平表，进行正交试验，确定上述提取条件。
表３　地耳草黄酮类化合物鉴别
峰号 Ｒｔ（ｍｉｎ） ＭＳ（ｍ／ｚ） ＭＳ２（ｍ／ｚ） 鉴别
１　 ２２．０１　 ４４９［Ｍ－Ｈ］－ ３０３［Ｍ－Ｈ－Ｒｈａｍｎｏｓｅ］－ 二氢槲皮素－７－Ｏ－α－Ｌ－鼠李糖苷
２　 ２５．４６　 ６０９［Ｍ－Ｈ］－ ３０１［Ｍ－Ｈ－Ｇｌｕｃｏｓｅ］－ 芦丁
３　 ２６．８４　 ４６３［Ｍ－Ｈ］－ ３０１［Ｍ－Ｈ－Ｇｌｕｃｏｓｅ］－ 金丝桃苷
４　 ２８．３５　 ４６３［Ｍ－Ｈ］－ ３０１［Ｍ－Ｈ－Ｇａｌａｃｔｏｓｅ］－ 异槲皮苷
５　 ３７．５１　 ４４７［Ｍ－Ｈ］－ ３０１［Ｍ－Ｈ－Ｒｈａｍｎｏｓｅ］－ 槲皮苷
６　 ４４．７３　 ４４７［Ｍ－Ｈ］－ ３０１［Ｍ－Ｈ－Ｒｈａｍｎｏｓｅ］－ 槲皮素－７－Ｏ－α－Ｌ－鼠李糖苷
７　 ５１．２６　 ３０１［Ｍ－Ｈ］－２７３［Ｍ－Ｈ－ＣＯ］－，１５１［Ｍ－Ｈ－Ｃ８Ｏ３Ｈ６］－ 槲皮素
８　 ５８．０５　 ２８５［Ｍ－Ｈ］－ １５１［Ｍ－Ｈ－Ｃ８Ｏ２Ｈ６］－ 山奈酚
　　２）实验结果表明，不同产地及不同商品地耳草
黄酮类成分的含量具有一定差异。６种黄酮总量以
Ｓ２的药材含量较高，１１个样品中６种黄酮总量的范
围是６．４７～１８．４３ｍｇ／ｇ。地耳草中６种黄酮类成
分以槲皮苷和异槲皮苷的含量较高，芦丁和金丝桃
苷含量很少，有的样品也不含芦丁或金丝桃苷，槲皮
素以Ｓ２的药材中含量较高，槲皮苷与异槲皮苷均以
Ｓ２、Ｓ５的药材中含量较高。
３）不同采收期地耳草黄酮类成分分析结果显
示，６种黄酮总量以Ｓ１６的药材含量较高，不同采收
期样品中６种黄酮总量的范围是１３．６７～２２．９０
ｍｇ／ｇ。异槲皮苷以７月下旬含量较高，槲皮苷与槲
皮素以６、７月含量较高，山奈酚含量以６月下旬较
高，芦丁与金丝桃苷含量极低，动态变化不明显；异
槲皮苷、槲皮苷、槲皮素及山奈酚的总量以６月下旬
至７月上旬较高。
综上所述，地耳草商品药材或不同产地药材，由
于产区生态环境、药材采收加工或存贮等不同，导致
黄酮类成分含量具有一定差异，使药材品质参差不
齐；不同采收期地耳草中黄酮类成分呈现积累动态
变化。本文建立了ＵＰＬＣ－ＭＳ分析地耳草中黄酮类
成分的方法，为地耳草药材内在质量评价，确定其适
宜采收期提供科学依据。
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（编辑：李伟东）
—５８４—陆黎，等：地耳草黄酮类成分ＵＰＬＣ－ＭＳ分析　第５期