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收稿日期:2013-10-19
基金项目:山东省高等学校科技计划项目(J11LB64);山东省高校生物医学工程技术重点实验室资助课题
作者简介:邢占芬(1980-)，女，硕士，讲师，研究方向:中药质量控制;E-mail:xzhanfen0817@ 163. com。
* 通讯作者:成洪达，E-mail:chd_98766@ 163. com。
黄毛耳草 HPLC指纹图谱研究
邢占芬1，2，成洪达1* ，张平平1，2
(1. 山东万杰医学院药学系，山东 淄博 255213;2. 山东省高校生物医学工程技术重点实验室，山东 淄博
255213)
摘要 目的:建立黄毛耳草的 HPLC指纹图谱。方法:以 Hypersil BDS C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)为色谱柱，
甲醇-0. 1%醋酸溶液为流动相进行梯度洗脱，检测波长 345 nm，柱温 35 ℃，以乌索酸为参照物得到含有 9 个峰的共
有模式，以共有模式对不同产地黄毛耳草指纹图谱进行相似度分析。结果:从谱图相似度看出，不同产地黄毛耳草
指纹图谱基本一致，但也存在地域性差异。结论:HPLC指纹图谱可用于黄毛耳草的鉴别和质量控制。
关键词 黄毛耳草;HPLC指纹图谱
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)05-0789-03
Study on HPLC Fingerprint of Hedyotis chrysotricha
XING Zhan-fen1，2，CHENG Hong-da1，ZHANG Ping-ping1，2
(1. Pharmacy Department，Shandong Wanjie Medical College，Zibo 255213，China;2. Laboratory of Biomedical Engineering and Tech-
nology of Shandong Province University，Zibo 255213，China)
Abstract Objective:To establish HPLC fingerprint of Hedyotis chrysotricha. Methods:Hypersil BDS C18(250 mm × 4. 6 mm，5
μm)column was used with methanol and 0. 1% acetic acid solution as mobile phase in gradient mode，the flow rate was 1. 0 mL /
min. The detection wavelength was 345 nm and the temperature of the column was set at 30 ℃ . Using ursolic acid as the reference
standard，the mutual mode of Hedyotis chrysotricha containing nine common peaks was set up. The similarity of Hedyotis chrysotricha
from different habitats was analyzed. Ｒesults:The fingerprints of Hedyotis chrysotricha from different habitats were similar，but also had
habitat characteristics. Conclusion:The HPLC fingerprint can be used for identification and quality control of Hedyotis chrysotricha.
Key words Hedyotis chrysotricha (Palib.)Merr.;HPLC Fingerprint
黄毛耳草 Hedyotis chrysotricha (Palib. )Merr.
为茜草科耳草属植物，全草入药，又名敷地两耳草、
地坎风、石打穿等。具有清热除湿、解毒消肿、活血
舒筋等功效，用于治疗病毒性肝炎、跌打损伤、小儿
急性肾炎、风湿性关节炎和疮疔肿痛等症。主产于
广东、广西、福建、江西、江苏、浙江等地〔1〕。黄毛耳
草主要含有环烯醚萜类、三萜类、黄酮类、生物碱类
和甾醇类成分〔2〕，具有多种生物活性，是我国传统
验方肠炎宁片的重要原料药之一。
黄毛耳草药材收载于 1996 年版《江西省中药材
标准》，其药材标准中仅有 1 个显微鉴别和 1 个理化
鉴别，目前关于黄毛耳草质量控制的方法，也主要以
单指标质量控制和薄层色谱为主，尚未见黄毛耳草
指纹图谱的研究报道〔3，4〕。为有效控制黄毛耳草质
量，规范黄毛耳草市场，本研究采集不同产地的黄毛
耳草，建立黄毛耳草的 HPLC指纹图谱，以期为其鉴
·987·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 5 期 2014 年 5 月
别和质量控制提供依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 P1201 型高效液相色谱仪(大连依利
特);FA1004N型电子天平(上海精密科学仪器有限
公司);AS3120 型超声清洗机(天津奥特赛恩斯仪
器有限公司);FW177 粉碎机(济南精密科学仪器仪
表有限公司)。
1. 2 材料 甲醇、乙腈为色谱纯;冰醋酸为分析
纯;水为重蒸水;乌索酸对照品购自中国食品药品检
定研究院，批号:110742-201220。10 批黄毛耳草药
材购自各地药材市场，经山东万杰医学院药学系高
尔教授鉴定为茜草科耳草属植物黄毛耳草 Hedyotis
chrysotricha (Palib.)Merr. 的干燥全草。产地见表
2。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Hypersil BDS C18(250 mm × 4. 6
mm，5 μm)色谱柱;流速:1. 0 mL /min;进样量:20
μL。流动相:甲醇(A)-1%醋酸溶液(B)梯度洗脱，
洗脱程序为:0 ～ 10 min，40%A;10 ～ 35 min，67% A;
35 ～ 45 min，100% A。柱温:35 ℃;检测波长:
345 nm。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 供试品溶液的制备:取黄毛耳草药材粉末
(过 40 目筛)1. 5 g，精密称定，置锥形瓶中，加入
75%乙醇 30 mL，密塞，称重。超声(120 W，40 kHz)
30 min，放冷，再次称重，补足失重。摇匀，滤过，取
续滤液 2 mL用甲醇定容至 25 mL 量瓶中，经 0. 45
μm微孔滤膜过滤，即得。
2. 2. 2 混合对照品溶液的制备:精密称取乌索酸
对照品 2 mg、鸡屎藤苷甲酯 1. 6 mg，置 10 mL 量瓶
中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 稳定性试验:取同一份黄毛耳草药材样品
(S3)供试品溶液，分别于 0、4、8、12、24 h进样，各色
谱峰的相对保留时间和相对峰面积 ＲSD 均小于
3. 0%。表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 3. 2 精密度试验:取同一份黄毛耳草药材样品
(S3)供试品溶液，连续进样 6 次，考察各共有峰的
相对保留时间及相对峰面积的一致性，结果各共有
峰的相对保留时间的 ＲSD 均小于 2. 1%，相对峰面
积的 ＲSD均小于 3. 0%。表明仪器精密度良好。
2. 3. 3 重复性试验:取黄毛耳草药材样品(S3)5
份，按“2. 2. 1”项下方法制备供试品溶液，进行测
定，结果表明，各共有峰相对保留时间的 ＲSD 均小
于 3. 0%，相对峰面积的 ＲSD 均小于 3. 3%。表明
方法重复性良好。
2. 4 指纹图谱分析 以建立的高效液相色谱方法
分析 10 批不同产地的黄毛耳草药材色谱图见图 1。
通过谱图比较确定 9 个色谱峰为共有峰。9 个共有
峰的峰面积占总峰面积 97%以上，所选择的共有峰
可以较全面的反映样品中化学成分的信息。鸡屎藤
苷甲酯为黄毛耳草主要活性物质之一，且具有特征
性，但在本实验条件下，其色谱峰响应值较小;乌索
酸是黄毛耳草中含量较高的三萜类化合物，同时乌
索酸具有抗肝炎、抗肿瘤等多种生理活性，故本实验
选取乌索酸作为对照品。以乌索酸为参照，计算各
特征峰的相对保留时间、相对保留面积(表 1)。乌
索酸和鸡屎藤苷甲酯混合对照品 HPLC 色谱图见图
2。
图 1 不同产地黄毛耳草药材样品 HPLC指纹图谱
图 2 乌索酸(7 号峰)和鸡屎藤苷甲酯(8 号峰)
混合对照品 HPLC图
2. 5 黄毛耳草指纹图谱相似度分析 将 10 批药
材图谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系
统”(2004 A版)软件，自动匹配后生成对照图谱，以
此作为黄毛耳草药材的对照指纹图谱(见图 3)，进
行相似度评价，结果见表 2。从相似度结果可以看
出，各地之间黄毛耳草相似度较高，除福建宁德和浙
江温州两地样品相似度低于 0. 9 外，其余各地样品
相似度均大于 0. 9。
3 讨论
·097· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 5 期 2014 年 5 月
图 3 黄毛耳草药材 HPLC对照指纹图谱(示共有峰)
3. 1 提取方法、溶剂、时间考察 将黄毛耳草研细
成粉，比较了冷浸、超声、热回流 3 种提取方法，从色
谱图来看，超声提取色谱峰较多，基线平稳，总峰面
积最大，提取效率明显高于冷浸和热回流提取;超声
时间比较了 20、30、40 min，结果表明超声提取
30 min效果最佳。根据以上结果，黄毛耳草提取法
方法选择超声提取 30 min。分别考察了乙醇、75%
乙醇、50%甲醇 3 种提取溶剂提取效果，3 种溶剂提
取色谱图相似，通过对主要色谱峰面积考察可知，
75%乙醇提取色谱图总峰面积最大，峰形较好，故选
择 75%乙醇作为提取溶剂。
表 1 不同产地黄毛耳草共有峰相对峰面积
峰号
批号
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
1 0. 057 0. 056 0. 069 0. 056 0. 056 0. 065 0. 068 0. 049 0. 042 0. 067
2 0. 083 0. 079 0. 121 0. 080 0. 079 0. 112 0. 069 0. 098 0. 109 0. 126
3 0. 131 0. 138 0. 197 0. 132 0. 131 0. 198 0. 165 0. 131 0. 138 0. 129
4 0. 039 0. 042 0. 029 0. 042 0. 042 0. 076 0. 065 0. 033 0. 064 0. 043
5 0. 423 0. 407 0. 426 0. 411 0. 406 0. 445 0. 431 0. 541 0. 557 0. 411
6 0. 296 0. 283 0. 357 0. 288 0. 283 0. 231 0. 279 0. 277 0. 321 0. 336
7(S) 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000
8 0. 048 0. 051 0. 075 0. 052 0. 051 0. 054 0. 076 0. 059 0. 066 0. 071
9 0. 158 0. 151 0. 116 0. 153 0. 152 0. 151 0. 198 0. 202 0. 121 0. 178
表 2 10 批黄毛耳草药材样品相似度计算结果
批号 产地 相似度
S1 安徽省亳州市 0. 998
S2 安徽省亳州市 0. 963
S3 安徽省亳州市 0. 994
S4 安徽省黄山市 0. 990
S5 福建省宁德市 0. 890
S6 福建省福州市 0. 979
S7 浙江省台州市 0. 982
S8 浙江省温州市 0. 877
S9 河北省保定市 0. 969
S10 广西壮族自治区玉林市 0. 985
3. 2 指纹图谱的建立与分析 通过 10 批黄毛耳
草分析，确定了 9 个黄毛耳草特征峰构成的黄毛耳
草指纹图谱。对 8 个地区 10 批黄毛耳草进行相似
度分析，从结果看，虽然产地不同，但黄毛耳草的指
纹图谱相互间较为吻合，相似度较高，除福建宁德和
浙江温州两地样品相似度低于 0. 9 外，其余各地样
品相似度均大于 0. 9，体现了药材的特征属性，同
时，某些地区样品的相似度稍差，说明了药材也具有
明显的地域特点。
本实验建立了稳定可靠的黄毛耳草指纹图谱分
析方法，该方法谱图特征性明显，能够较全面的反映
中药黄毛耳草的内在品质，可用于药材真伪的鉴别。
但仅初步研究了黄毛耳草的指纹图谱，要达到对黄
毛耳草质量的全面控制，还需要进行大量样本分析
和谱效结合研究，以使黄毛耳草指纹图谱更加完整、
有效。
参 考 文 献
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