全 文 ：中国药房 2009年第 20卷第 24期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol.20 No.24 · 1845·
Δ河南省教育厅自然科学研究计划项目(2008A 360002);河南省
教育厅高等学校青年骨干教师资助计划(2008-23)
*主管药师。研究方向:中药活性成分及新药 。电话:0371-
65589287。E-mail:dx dbz@163.com
#通讯作者:教授 , 硕士研究生导师。研究方向:中药活性成分及
新药。电话:0378-3880680。E-mail:kangweny @hotmail.com
头状蓼提取物体外抗氧化活性研究 Δ
吴彩霞 1 , 2 *,刘瑜新 1 ,常 星 1 ,康文艺 1 , 2 #(1.河南大学天然药物研究所 ,开封市 475004;2.河南省疾病预防
控制中心 ,郑州市 450003)
中图分类号 R258;R97 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)24-1845-03
摘 要 目的:研究头状蓼提取物的体外抗氧化活性 。方法:以脂溶性维生素 E及二丁基羟基甲苯(BHT)作对照 ,采用清除二苯代
苦味酰基(DPPH)自由基 、清除 [ 2 , 2′-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐 ] (ABTS)自由基和铁离子(Fe 3 +)还原/抗
氧化能力 (FRAP)测定法检测头状蓼石油醚 、乙酸乙酯 、甲醇提取物的体外抗氧化活性 。结果:与头状蓼石油醚 、乙酸乙酯提取物
比较 ,头状蓼甲醇提取物清除 DPPH 自由基 、清除 ABTS自由基及还原 Fe 3 +的能力较强 。结论:头状蓼甲醇提取物具有较好的体外
抗氧化活性 。3种方法中 ,DPPH 方法和 ABTS方法相关性最高 。
关键词 头状蓼;体外;抗氧化;二苯代苦味酰基;2 ,2′-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐;铁离子还原/抗氧化能力法
In Vitro Antioxidant Activity of Extracts from Polygonum alatum
WU Cai_x ia , LIU Yu_x in , CHANG Xing , KANG Wen_y i(Insti tute of Natural Products , Henan University ,
Kai feng 475004 ,China)
WU Cai_xia ,KANG Wen_y i(Henan Center fo r Disease Control and Prevention , Zhengzhou 450003 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To study the in v itro antiox idant activ ity o f the ex t ract s f rom Polygonum alatum.METHODS:
2 , 2-dipheny l-1-picry lhydrazy l assay(DPPH), 2 , 2′-amino -di(3-ethy l-benzo thiazo line sulphonic acid-6)ammonium
salt assay(ABTS)and fer ric reducing antioxidant pow er assay(FRAP)were employed to analyze the antioxidant activity of
ex tracts(ligarine ex t ract , ace tic e ther ex trac t and methano lic ex t ract) from P.alatum w ith lipid-so luble vitamin and diben-
zy latiooluene(BHT)as controls.RESULTS:Compared with ligarine ex trac t and acetic e ther ex tract , the methano l ex trac t of
P.a lat um showed higher po tency in scaveng ing DPPH radical and ABTS radical and reducing Fe 3 +.CONCLUS ION :The
m ethano l ex tract o f P.a lat um show ed high antiox idant activ ity in vitro.Among the 3 methods , the closest cor relation w as
no ted betw een DPPH assay and ABTS assay.
KEY WORDS Polygonum a lat um ;In vit ro;Antioxidant activ ity;DPPH ;ABTS;FRAP assay
50μmol Aβ25 -35诱导 SH -SY5Y细胞 72 h后 , Bax 表达
上调 , Bcl-2表达下调 , Bax/Bcl-2比值增大 。当WERG 、
WEG 、WEAG 浓度分别为 1 、5 mg ·mL -1时 , 西洋参组 Bax/
Bcl-2比值最大 ,生晒参组次之 ,红参组最小。结果表明 ,红参保
护作用最强 , 生晒参保护作用次之 , 西洋参保护作用最弱 。
WERG 、 WEG 、 WEAG 对 Aβ25 -35诱导 SH -SY5Y 细胞的
Bcl-2 、Bax 蛋白表达的影响见图 2。
4 讨论
中药四性即中药的寒、热 、温 、凉 4种功能之气 , 是中医药
最基本的理论之一 。四性中寒和凉 、温和热 ,性质相同而程度有
异 ,热甚于温 ,寒甚于凉 。然而如何判别中药的寒 、热 、温 、凉 ,一
直是困扰中医药界的热点和难点问题 , 迄今未取得实质性的进
展 [1 ,2] 。本研究结果可以看出 ,不同药性的中药———红参(温性)、
生晒参(平性)和西洋参(凉性)对 Aβ25 -35诱导 SH-SY5Y 细胞
凋亡的影响是不同的[3] 。3种中药都能对Aβ25 -35诱导SH-SY5Y
细胞凋亡起到一定的抑制作用 , 但温性中药红参的保护作用最好 ,
平性中药生晒参次之 ,凉性中药西洋参的保护作用最弱。
综上所述 ,从凋亡学的角度研究中药的四性差异 ,有望为中
药四性理论的阐明提供新的研究思路和现代科学的依据 。
参考文献
[ 1] 胡胜全 ,余惠 ,刘塔斯 ,等.西洋参水提物对 Aβ25 -35诱
导的 SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用[ J].中药材 , 2008 ,
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(收稿日期:2009-03-12 修回日期:2009-06-25)
· 1846· China Pharm acy 2009 Vol.20 No.24 中国药房 2009年第 20卷第 24期
头状蓼为蓼科蓼属植物尼泊尔蓼 Polygonum alatum Bu_
ch.-Ham.ex D.Don的干燥全草 , 又名猫儿眼睛 , 分布于我
国东北 、华北 、中南 、西北至西南各省(区)。其味苦 、酸 ,性寒 。全
草入药 ,有清热解毒 、收敛固肠 、祛风湿之效 ,主治咽喉肿痛 、目
赤 、牙龈肿痛 、赤白痢疾 、风湿痹痛 [1 ] 。Anita Rathore 等 [2 ]分离
鉴定了尼泊尔蓼的黄酮类化合物 ,得到黄酮 、黄酮苷 、蒲公英赛
酮和 β -谷甾醇等成分 , 并发现黄酮类化合物可能是其解痉作
用的物质基础 。目前 , 国内外对该植物化学成分和药理活性的
报道处于空白 。近年来 ,李昌勤 [ 3 ]等对头状蓼中脂肪酸进行了
研究 。笔者采用目前应用普遍的清除二苯代苦味酰基(DPPH)
自由基 、清除 [ 2 , 2′—连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺
酸)二氨盐](ABTS)自由基和铁离子(Fe 3 +)还原/抗氧化能力
(FRAP)3种体外抗氧化活性分析方法 , 首次对头状蓼总的体
外抗氧化活性进行了考察 。
1 材料
1.1 仪器
UV -2000型紫外可见分光光度计(上海尤尼柯仪器有
限公司);旋转蒸发仪(东京理化公司);电子天平 (瑞士梅特
勒 -托利多仪器有限公司);CS-H 1型混合器(北京博励阳
科技公司)。
1.2 试药
DPPH(日本东京化成工业株式会社);Fe 3 +-三吡啶三
哑嗪(TPTZ ,比利时 Acros Organics公司);ABTS(美国Flu_
ka公司);6-羟基-2 , 5 , 7 , 8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧
酸 (T rolox ,美国 Aldrich公司);二丁基羟基甲苯 (BHT ,比利
时 Acros Organics 公司);头状蓼全草于 2007年 7月采集于
河南省栾川县 , 经河南大学天然药物研究所袁王俊副教授鉴
定为真品 ,标本存放于河南大学天然药物研究所 。
2 方法
2.1 头状蓼活性成分的提取
取头状蓼全草 30.193 9 g , 阴干 , 粉碎 , 300 mL 石油醚
浸泡 12 h 后置于索氏提取器中连续回流提取 , 共提取 3次 ,
每次 1 h ,浓缩 ,得头状蓼石油醚提取物 ,得率为 2.31%。挥
干溶剂 , 依次用 300 mL 乙酸乙酯 、 300 mL 甲醇浸泡 12 h ,
回流提取 3次 , 每次 1 h , 得头状蓼乙酸乙酯 、甲醇提取物 ,
得率分别为 2.13%和 6.19%。
2.2 抗氧化活性筛选方法
2.2.1 DPPH 法 :在 515 nm 波长处测定样品及阳性对照
BHT 对 DPPH 自由基的清除能力 。计算清除率 ,并计算半数
抑制率(IC 50)。
2.2.2 ABTS 法:在 734 nm 波长处测定样品及阳性对照
BHT 对 ABTS自由基的清除能力 。计算清除率 ,并计算IC 50 。
2.2.3 FRAP法:在 593 nm波长处测定样品及阳性对照BHT
还原 Fe3 +的能力 ,结果以 T rolox 当量表示 。当 C(Tro lox)=25 ～
400mol ·L -1时 ,有良好的线性关系(r =0.999 6)。
2.2.4 IC 50的计算:IC 50指抑制率为 50%时所需抗氧化剂
的浓度 ,根据不同浓度抗氧化剂的清除率作曲线求出 。
3 结果
3.1 头状蓼提取物对 DPPH 自由基的清除作用
抑制率越高 , DPPH 自由基清除越彻底 , 样品的抗氧化
活性越强 [ 4 ] 。头状蓼甲醇提取物清除 DPPH 自由基的能力
(IC 50=13.41μg ·mL -1)超过 BHT(IC 50=18.71μg ·mL -1),
约为 BHT 能力的 1.40 倍 ;头状蓼乙酸乙酯提取物清除
DPPH 自由基的能力 (IC 50=33.65 μg ·mL -1)低于 BHT的能力;头状蓼石油醚提取物在浓度为 55.56 μg ·mL -1时
的清除率为 11.41%,清除 DPPH 自由基的 IC 50值未测定 。
在实验浓度范围内 , 当头状蓼提取物浓度为 1.74 μg ·
mL -1时 ,头状蓼甲醇 、乙酸乙酯提取物对 DPPH 自由基的清
除率都较低 ,分别是 1.69%、3.29%。随其浓度增加 ,清除率
也逐渐增高 。当浓度增大到 55.56 μg ·mL -1时 , 二者清除
率分别增高到 90.82%、 79.04%。结果表明 , 头状蓼提取物
清除DPPH 自由基的能力与其浓度呈正量效关系 , 即随着头
状蓼提取物用量的增加 ,对 DPPH 自由基的清除率也增高 。
当头状蓼甲醇 、乙酸乙酯提取物的浓度分别 <27.78 、55.56
μg ·mL -1时 , 清除率与质量浓度呈线性关系 (r =0.994 、
0.999);当头状蓼甲醇提取物浓度>27.78 μg ·mL -1时 ,清
除率几乎不变 , 说明抗氧化作用已接近饱和 , 再增加头状蓼
提取物的用量 , 清除率变化不大 。头状蓼提取物和 BHT 对
DPPH 自由基的清除能力顺序为 :头状蓼甲醇提取物 >
BHT >头状蓼乙酸乙酯提取物 >头状蓼石油醚提取物 。头
状蓼不同溶剂提取物的抗氧化活性见表 1;抗氧化剂对
DPPH 自由基的清除作用见图 1 。
表 1 头状蓼不同溶剂提取物的抗氧化活性
Tab 1 Antioxidant activity of the different extracts of
P.alatum
样品 DPPH法(IC5 0 /μg ·mL- 1)
ABTS法
(IC5 0 /μg ·mL- 1)
FRAP法(x ±s)
/μmol TE· g- 1
头状蓼石油醚提取物 - - 119.58±2.52
头状蓼乙酸乙酯提取物 33.65 20.60 474.55±4.79
头状蓼甲醇提取物 13.41 8.77 1 052.00±11.07
阳性对照(BHT) 18.71 7.72 1 581.68±97.41
3.2 对 ABTS自由基的清除作用
3种提取物中 ,头状蓼甲醇提取物对 ABTS自由基的清除
能力最强 (IC50=8.77 μg ·mL), 但略低于 BHT(IC50=7.72
μg ·mL);头状蓼乙酸乙酯提取物清除 ABTS 自由基的能力
(IC 50=20.60μg ·mL)约为头状蓼甲醇提取物清除能力的
1/2.35;头状蓼石油醚提取物清除 ABTS自由基的 IC 50值未
测定 。在实验浓度范围内 ,当其浓度为 3.13μg ·mL 时 , BHT
及头状蓼乙酸乙酯 、甲醇提取物对 ABTS自由基的清除率分别
是 31.59%、18.43%、26.02%。随其浓度的增加 , 清除率也增
高 。当浓度增加到 25.00μg ·mL时 ,三者对 ABTS 自由基的
清除率分别增高到 86.25%、58.09%、98.81%, 且三者清除率
与浓度呈线性关系(r =0.990 、0.988 、0.993)。结果表明 ,头状
蓼提取物清除 ABTS 自由基的能力与其质量浓度呈正量效关
系 , 即随着提取物用量的增加 , 对 ABTS 自由基的清除率也增
高 。头状蓼提取物和 BHT 对 ABTS自由基的清除能力顺序为:
BHT >头状蓼甲醇提取物>头状蓼乙酸乙酯提取物>头状蓼石
油醚提取物 。抗氧化剂对ABTS 自由基的清除作用见图2。
中国药房 2009年第 20卷第 24期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol.20 No.24 · 1847·
Δ广西教育厅科研项目(200710MS 014);广西大型仪器协作共用
网资助项目(601-2008-014)
*讲师 , 硕士。研究方向:生化药理学、 心血管药理学。电话:
0771-5358342。E-mail:gx Lx 60@163.com
#通讯作者:教授 ,博士研究生导师。研究方向:心血管药理学、生
化药理学。电话:0771-5358272。E-mail:huangrenbin518@163.com
六月青含药血清对 HepG2.2.15细胞 HBV 复制的抑制作用 Δ
林 兴 1 * ,黄权芳 2 ,张士军 1 ,刘 曦 1 ,黄仁彬 1#(1.广西医科大学 ,南宁市 530021;2.广西中医学院第一附
属医院 ,南宁市 530023)
中图分类号 R285;R977 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)24-1847-03
摘 要 目的:研究六月青(LYQ)含药血清对 HepG2.2.15细胞乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用 。方法:采用血清药理学方
法 ,在 HBV 的体外细胞培养系统(HepG2.2.15细胞)中观察 LYQ 抗 HBV 的作用 。结果:LYQ 含药血清在 HepG2.2.15细胞培
养中可有效地抑制 HBV DNA 的复制 ,其作用呈显著的浓度-效应和时间-效应关系 。结论:LYQ 在体外能显著抑制 HBV ,可能
是复方六月雪主要活性成分之一。
关键词 六月青;含药血清;乙型肝炎病毒;HepG2.2.15细胞;抑制
Inhibitory Ef fect of Strobi lanthes aff inis -containing Serum on HBV Reproduction in HepG2.2.15 Cells
LIN Xing ,ZHANG S hi_jun ,LIU Xi ,HUANG Ren_bin(Guangx i Medical Universi ty , Nanning 530021 , China)
HUANG Quan_fang(The First Aff iliated Hospi tal to Guangxi T radit ional C hinese Medicine College ,Nanning
530023 , China)
ABSTRACT OBJECT IVE :To study the anti-HBV activ ity of St robi lanthes a f f inis in HepG 2.2.15 ce lls.M ETHODS :
The anti -HBV activity o f S.af fin is w as observed in the in vitro cell culture system of HBV(HepG 2.2.15 cells)by
serum -pharmaco logy method.RESULTS :The serum containing S.a f fi nis effectively inhibited the HBV DNA duplication
in H epG 2.2.15 cell culture , and its inhibito ry activity assumed dose-dependent and time -dependent m anner .CONCLU-
S ION :S.af finis can significantly inhibit HBV in vit ro and it maybe one of the m ain ac tive components o f Compound li-
uyuexue .
KEY WORDS S trobi lanthes af f inis ;Drug -containing serum ;HBV ;HepG 2.2.15 cells;Inhibition
3.3 还原 Fe3+的能力
3种提取物中 , 头状蓼甲醇提取物还原 Fe3 +的能力较强
(FRAP=(1 052.00±11.07)μmol TE ·g -1), 略低于 BHT
(FRAP=1 581.68±97.41 μmol TE ·g -1)。头状蓼乙酸乙酯 、
石油醚提取物的还原能力分别约为头状蓼甲醇提取物还原能
力的 1/2.46和 1/8.80。结果表明 , 头状蓼提取物和 BHT 对
Fe 3 +的还原能力顺序为:BHT >头状蓼甲醇提取物>头状蓼乙
酸乙酯提取物>头状蓼石油醚提取物 。
3.4 3种方法的比较
将 3种抗氧化法测定的结果分别进行相关性分析 , DPPH
和 ABTS 法 、DPPH和 FRAP 法 、ABTS 和 FRAP 法的相关系
数分别为 0.994 、0.957 、0.983 ,表明 3种体外抗氧化法能客观
地反映出头状蓼的总抗氧化能力 , 且 DPPH 和 ABTS法相关
性最高 。结果表明 ,头状蓼提取物和 BHT 的总的体外抗氧化能
力的顺序为:BHT >头状蓼甲醇提取物>头状蓼乙酸乙酯提取
物>头状蓼石油醚提取物。
4 讨论
笔者首次采用 DPPH 、ABTS 和 FRAP 3种方法对头状蓼
提取物进行体外总抗氧化活性考察 , 发现头状蓼有一定的体外
抗氧化活性 。不同提取溶剂的抗氧化活性不同 , 不同提取物清
除自由基的能力均随浓度增大而增大 。头状蓼甲醇提取物的总
的体外抗氧化活性最高 ,与 BHT 相近 ,可进一步进行体内抗氧
化活性筛选 。
参考文献
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[ 4] 谢学明 ,李熙灿 ,钟远声 ,等.龟板体外抗氧化活性的研究
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(收稿日期:2009-01-20 修回日期:2009-04-14)