全 文 ：量 , 精密称定 ,按 “ 2.2.1”项下制备供试液 , 照分光光度法在 250
nm处测定紫外吸光度 ,测定结果按外标法计算。结果见表 4。
表 3　加样回收率试验结果
序
号
样品称重
m/mg
样品中葛根
素量m/mg
加入葛根
素量 m/mg
测得葛根
素量 m/mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 5.08 3.662 2.973 6.693 101.97
2 5.25 3.784 2.973 6.774 100.58
3 5.29 3.813 2.973 6.784 99.94
4 5.13 3.698 3.716 7.387 99.28
5 5.21 3.755 3.716 7.504 100.89 100.69 1.29
6 5.32 3.835 3.716 7.495 98.50
7 5.09 3.669 4.459 8.230 102.28
8 5.08 3.662 4.459 8.214 102.08
9 5.17 3.727 4.459 8.217 100.70
表 4　提取物中总黄酮含量测定结果 %
批号 总黄酮含量 RSD
No.0511 68.77 1.26
No.0605 67.18 1.78
No.0802 72.06 0.27
3　讨论
前期实验中发现 ,不同厂家的葛根样品 , 葛根素含量相差较
大 , 2005年版《中国药典》规定葛根应为野葛的干燥根 , 粉葛另为
甘葛藤的干燥根 ,两者的葛根素含量差别较大 , 为了保证本品临
床疗效 ,故选择野葛投料。
取对照品溶液 1.0 ml置 25 ml的量瓶中 ,加 30%乙醇至刻
度 , 摇匀 ,在 200 ～ 400 nm波长范围内测定葛根素的紫外吸收光
谱 , 结果显示在 250 nm处有最大吸收。另取供试品溶液在 200
～ 400 nm波长范围内测定紫外吸收光谱 ,结果也显示 250 nm处
有最大吸收。同时空白溶剂在此处几乎无吸收 ,说明溶剂对测定
无干扰 。因此 , 选择 250nm作为检测波长。
采用高效液相色谱法和紫外分光光度法测定葛根提取物中
葛根素和总黄酮的含量 ,方法简便 、准确 、可靠 , 重复性良好 ,可为
葛根提取物的质量评价提供检测标准。
参考文献:
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制备葛根总黄酮工艺研究 [ J] .时珍国医国药, 2008, 19(6):1324.
收稿日期:2009-10-13;　修订日期:2010-01-28
基金项目:广东省自然科学基金团队项目(No.2004E039213);教育部新世纪优秀人才支持计划(No.NCET-07-0376)
作者简介:罗振宇(1984-),男(汉族),湖南娄底人 ,现任广州暨南大学生物医药研究开发基地在读硕士研究生 ,学士学位,主要从事新药研发工作.
＊通讯作者简介:熊　盛(1972-),男(汉族),湖北黄冈人 ,现任广州暨南大学生物医药研究开发基地副研究员 ,博士学位 ,主要从事生物技术药物研发
工作.
孔石莼抗病毒蛋白多糖的
提取分离及抗柯萨奇病毒 B3活性
罗振宇1 ,陈薪研 2 ,王小燕1 ,瞿　畅 1 ,张美英1 ,安卫征 1 ,熊　盛 1＊
(1.广州暨南大学生物医药研究开发基地 ,广东广州　510632;　2.广东药学院 ,广东 广州　510006)
摘要:目的 从绿藻孔石莼中分离具有抗病毒活性蛋白多糖提取物。方法 新鲜孔石莼经 pH7.0的磷酸盐缓冲液提取和
硫酸铵沉淀得到粗提取物 , 大孔树脂层析分离得到蛋白多糖。 经紫外扫描 、高温高压处理(121℃, 15min)和糖苷酶水解
测定提取物的性质。 MTT法检测蛋白多糖对 Hela细胞的毒性 , 细胞病变法(CPE)检测蛋白对柯萨奇病毒 B3(CVB3)引
起的细胞病变抑制作用。通过样品对细胞的保护作用 、对 CVB3增殖的影响 、对 CVB3感染细胞的综合作用 , 初步研究了
样品抗病毒作用的机理 。结果 从孔石莼中提取了蛋白多糖 , 得率为 0.5%。毒性试验结果表明 , 孔石莼蛋白多糖对 He-
La细胞的半数中毒浓度 TC50大于 8mg· ml-1。孔石莼蛋白多糖具有显著的抗 CVB3活性 ,通过试验测得孔石莼蛋白多糖
对 CVB3主要是预防作用和直接杀灭作用 , 其 IC50为 3.7μg· ml-1。结论 从孔石莼中分离到具有抗病毒活性的蛋白多
糖 , 具有很好的抗 CVB3活性。
关键词:孔石莼;　提取;　纯化;　孔石莼蛋白多糖;　抗病毒活性;　CVB3
中图分类号:R284　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)05-1090-04
ExtractionandPurificationofAnti-viralProteoglycanfromUlvaPertusaanditsActivity
aganinstCoxsackieVirusB3
ZHENYu-luo1 , XINYan-chen2 , XIAOYan-wang1 , CHANGQu1 , MEIYing-zhang1 , WEIZhen-an1 , SHENG
Xiong1＊
(1.BiomedicalResearch＆DevelopmentCenter, JinanUniversity, Guangzhou, GuangdongChina510632;2.
GuangdongPharmeceuticalUniversity, Guangzhou, Guangdong, China)
Abstract:ObjectiveToisolateantivirusproteoglycanfromthegreenalgae, Ulvapertusa.MethodsFreshUlvapertusawasex-
tractedbyphosphatebuffer, andthetotalproteinwasprecipitatedwithammoniumsulfateandthenpurifiedbymacroporousresin.
Thetoxicityandantiviralbioactivitywereevaluatedbycytopathiceffect(CPE)andMTTcolorimetricassay.ResultsTheTC50
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.5
(50% toxicityconcentration)ofproteoglycanpurifiedfromUlvalactucaL.ismorethan8000μg· ml–1 andtheIC50((50% in-
hibitoryconcentration)inhibitoryconcentration)was3.7μg· ml–1 , TI(therapeuticindex)was2 162.2.ConclusionIsolated
antiviralproteinsfromtheUlvalactucaL.exhibitspotentanti-CVB3 activityinvitro.
Keywords:UlvalactucaL.;　Extract;　Purify;　Antiviralefect;　ProteoglycanfromUlvalactucaL;　CoxsackievirusB3
(CVB3)
　　柯萨奇病毒 B(coxsackievirusB, CVB)属小核糖核酸科肠道
病毒属 , 是引起病毒性心肌炎最主要的病原体 , 其中以 CVB3对
心肌的亲和力最强 , 可导致心律失常 ,急 、慢性心功能不全 , 扩张
性心肌病甚至猝死 , 严重威胁人类健康 [ 1] 。柯萨奇 B3病毒是典
型的溶细胞病毒 , 目前尚无理想有效的药物。临床常用病毒唑作
为治疗药物 , 但存在毒性较大 , 常出现白细胞减少 、头痛 、不可逆
贫血 、血清胆红素升高 、致畸等副作用。 因此筛选 、研制新的抗
CVB3药物就显得尤为重要。
近年来 , 病毒感染性疾病呈现快速上升的趋势 , 而且新病毒
种类不断出现 , 但长期以来抗病毒的药物发展缓慢。陆地生物药
源越来越少 , 海洋生物为抗病毒新药的发现提供了广阔资源。第
一个抗病毒海洋药物为阿糖胞苷(Ara-C, Cytara-bine), 在
1955年被美国 FDA批准用于治疗人眼单纯疱疹病毒 [ 2] 。海洋
药物学的迅速发展 , 为药学研究开辟了广阔的前景 , 目前了解到
红藻和褐藻具有很多抗病毒 、抗菌 、增强抵抗力和提高免疫力等
的生物活性作用 [ 3] , 但绿藻研究方面比较少;孔石莼是海藻中蛋
白质含量最高的一种藻体 ,本文初步研究了从孔石莼中提取蛋白
多糖的方法 , 并研究了孔石莼蛋白多糖抗病毒活性及其初步作用
机制。目前海藻多糖抗病毒报道较多 , 但少见关于海藻糖蛋白或
者蛋白多糖抗病毒的报道 ,本文从含蛋白质丰富的绿藻孔石莼中
提取到具有抗病毒活性的蛋白多糖。
1　材料与仪器
1.1　材料 新鲜孔石莼(UlvaLactucaL.):广东湛江南海海域 ,
-70℃保存。自来水反复冲洗 , 以除去泥沙和盐分等杂质 , 蒸馏
水洗 3次 ,阴干表面的水分。
1.2 　试剂与仪器 浓硫酸 , 浓盐酸 , 氯化钡 , 硫酸铵 , 氯化钠 , 氯
化钾 , 磷酸二氢钾 , 磷酸氢二钠 , 硫酸钾等 , 以上试剂均为广州化
学试剂厂分析纯。 DMEM培养基(Hyclone公司);CO2培养箱
(日本 Sanyo公司);超净工作台(苏州净化设备公司);相差显微
镜(德国 Laica公司);酶标仪(美国 BIO-RAD公司);MTT(四甲
基偶氮唑蓝)Sigma公司产品。
1.3 　细胞株和病毒 Hela细胞株引自美国 ATCC公司 , 由本室
保存。细胞生长液为含 10%新生小牛血清的 DMEM, 细胞维持
液为含 2%新生小牛血清的 DMEM, 常规加入青霉素 100 U·
ml-1、链霉素 100 U· ml-1。柯萨奇 B3病毒(CVB3)武汉大学医
学院病毒研究所引进 。
2　方法
2.1 　孔石莼蛋白的提取与纯化 取新鲜海藻孔石莼 100 g剪碎 ,
用预冷磷酸盐缓冲液(pH=7.0)匀浆 , 超声破碎 [ 4] 。 4℃提取过
夜。高速冷冻离心(10 000r· min-1 , 30min), 取上清。用 DEAE
-Sepharose填料装柱 ,去离子水洗至柱子流出液无乙醇;用 0.01
mol/LpH7.0 PBS平衡层析柱 , 流速 1 ml/min, 打开紫外检测仪
和记录仪 , 至基线平直 、稳定 ,上样。用 0.01 mol/LpH7.0 PBS
缓冲液洗回至基线。按顺序用以 0.01mol/LpH7.0 PBS为母液
配制成的 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.3, 0.5, 1 mol/L氯化钠溶液洗
脱 , 收集各峰 , SDS-PAGE电泳分析结果 ,冻干样品测活性。
取新鲜海藻孔石莼 100 g剪碎 , 用预冷的磷酸盐缓冲液(pH
=7.0)匀浆 , 超声破碎 [ 4] 。 4℃提取过夜。 高速冷冻离心
(10 000 r· min-1 , 30min), 取上清 , 加硫酸铵盐至溶液浓度
60%, 4℃沉淀过夜 , 高速冷冻离心(12 000 r· min-1 , 30min), 沉
淀溶于 0.01mol· L-1的磷酸盐缓冲液中。在上清中加硫酸铵盐
至溶液浓度为 80%, 4℃沉淀过夜 , 高速冷冻离心(15 000 r·
min-1 , 30min), 离心沉淀溶于 0.01mol· L-1的磷酸盐缓冲液中。
两次离心的沉淀用 0.01mol· L-1的磷酸盐缓冲液透析 , 至溶液
中无硫酸根离子存在。
取大孔树脂 101充分溶胀好 , 装柱 , 去离子水洗至柱子流出
液无乙醇 ,上样 , 同时连接蛋白检测仪和记录仪 ,分别用体积分数
为 20%, 40%, 60%的甲醇洗脱 3个柱体积 ,再用 95%乙醇洗脱 3
个柱体积 ,收集各个蛋白峰 , 冻干 ,测活。收集活性峰。
2.2 　孔石莼蛋白的稳定性研究
孔石莼蛋白多糖常温下放置 24h, 进行冻干 , 测定样品抗病
毒活性 。
孔石莼蛋白多糖 121℃高压高温灭菌 15min, 进行抗病毒活
性测定 。
孔石莼蛋白多糖用特异性 N-糖苷酶酶解 , 超滤除去酶解缓
冲液 , 进行活性测定。
孔石莼蛋白多糖与体积分数为 95%乙醇室温下共作用 24h
透析除去乙醇 ,测抗病毒活性。
2.3　样品的毒性和抗病毒活性测定
2.3.1　细胞毒性测定 [ 5, 6] Hela细胞经消化后 , 加入 96孔培养
板中 , 每孔 100μl,细胞密度达到 2×105个· ml-1。待细胞长满
单层后 ,分别加入 60%硫酸铵沉淀的样品 、80%硫酸铵沉淀的样
品 、经过大孔树脂纯化后的两个样品(上样峰和 2号洗脱峰), 检
测其细胞毒性。参考 Mosmann[ 9]建立的 MTT法 , 样品采用维持
液培养基(含 1%小牛血清)稀释 , 加入样品 48 h后每孔加入 5
mg· ml-1MTT10 μl, 继续培养 4 ～ 6 h, 黄色的 MTT被活细胞的
线粒体脱氢酶还原成蓝色的甲簪结晶。小心吸出 MTT, 每孔加
入 DMSO(二甲基亚砜)100μl, 振荡混匀 , 15 min后甲簪结晶被
溶解 , 在波长 570nm下测定吸光度 OD值。计算细胞存活率 、药
物对细胞的半数毒性浓度(50% cytotoxicconcentration, TC50)。
细胞存活率(%)=实验组 A570/对照组 A570×100%。
2.3.2　样品抗病毒活性测定 Hela细胞经消化后 ,加入 96孔培
养板中 ,每孔 100μl,细胞密度达到 2×105个· ml-1。待其生长
为单层细胞 ,弃去培养液 , 将不同稀释度的药物和 100 TCID50病
毒各 50μl混合后直接加到单层Hela细胞上 , 每个浓度设 4个复
孔 , 继续培养 24 ～ 36 h, 待病毒对照组细胞病变达到 75%以上
时 , 每孔加入 5 mg· ml-1的 MTT10 μl, 继续培养 4 ～ 6 h,黄色
的 MTT被活细胞的线粒体脱氢酶还原成蓝色的甲簪结晶。小心
吸出 MTT,每孔加入 DMSO(二甲基亚砜)100μl, 振荡混匀 , 15
min后甲簪结晶被溶解 , 在波长 570 nm下测定吸光度 OD值。
OD值与活细胞的数量呈正相关。
2.4　孔石莼蛋白多糖抗病毒机理的初步研究 [ 7 , 8]
长成单层的Hela细胞 ,用 100TCID50 100μl的 CVB3感染 ,在感
染前后不同时间加入经过大孔树脂纯化得到的孔石莼蛋白多糖。
2.4.1　孔石莼蛋白多糖对 CVB3病毒的直接杀灭作用 将
100TCID50 50 μl的 CVB3与不同浓度的药品等量混合 , 药物的终
浓度分别为 24, 12, 6, 3, 1.5μg· ml-1 , 37℃培养 2 h后将各浓度
药物与病毒的混合液加入到单层 Hela细胞中 , 同时设病毒对照
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.5 时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期
组和正常细胞对照组。逐日观察细胞病变情况 ,待病毒对照组病
变达到 75%以上时 , 记录 CPE。 MTT法测吸光值。
2.4.2　孔石莼蛋白多糖对 CVB3病毒引起细胞凋亡的阻止作用
将 100TCID50 100μl的 CVB3病毒加入到长成单层的 Hela细胞
中 , 2 h以后 ,弃其上清 ,再加入样品至其终浓度。逐日观察 CPE,
待病毒对照组病变达到 75%以上时 ,记录各组 CPE,并用 MTT法
测其吸光值。
2.4.3　孔石莼蛋白多糖对 CVB3病毒引起细胞凋亡的保护作用
Hela细胞经胰酶(V+E)消化后 , 加入 96孔培养板中 , 每孔 100
μl,细胞密度达到 2×105个 · ml-1。待细胞长满单层后 ,先加入
孔石莼蛋白多糖至终浓度于 37℃的细胞培养箱中孵育 2h后 , 弃
上清 , 再加入将 100TCID50 /100μl的 CVB3病毒 , 逐日观察 CPE,
待病毒对照组病变达到 75%以上时 ,记录各组 CPE,并用 MTT法
测其吸光值。
3　结果
3.1　孔石莼蛋白的分离提取 通过前期预试验 , 我们发现孔石莼
中蛋白类物质兼具蛋白质和多糖特性 ,通过对孔石莼 C∶N比分
析所得产物是蛋白多糖 ,因此我们采用了两种技术路线 , 一是粗
提物直接上样阴离子交换树脂 DEAE-Sepharose, 进行分离纯
化;二是粗提物先进行硫酸胺分级分离 , 然后用大孔树脂对活性
组份进一步纯化。以活性为导向 ,评价纯化方法的可行性。由图
1和表 1可以看出 DEAE-Sepharose无法将粗提物很好的分离 ,
抗病毒活性主要集中在上样峰和 1.0mol/LNaCl溶液洗脱峰中 ,
其 IC50相对较高 , 而 60% ～ 80%硫酸铵沉淀的样品活性比 60%
硫酸铵沉淀的样品要好 30倍 ,所以进一步纯化 60% ～ 80%硫酸
铵沉淀的蛋白。把硫酸铵质量浓度 60% ～ 80%沉淀的孔石莼蛋
白粗提物经大孔树脂 101层析 ,用体积分数 20%、40%、60%的甲
醇和 95%的乙醇洗脱 , 出现如图 2所示的 2号峰。
SDS-PAGE电泳分析 DEAE-Sepharose各峰的结果如下。
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8分别代表 Marker,
穿透峰 , 0.2, 0.3, 0.5, 1.0, 0.1, 0.05mol/L
氯化钠溶液洗脱组分的条带
图 1　孔石莼蛋白粗提物经分离纯化后电泳结果
表 1　盐沉淀样品的抗病毒活性比较
分离方法 活性结果(IC50)
60%硫酸铵沉淀样品 200μg/ml
60% ～ 80%硫酸铵沉淀样品 6μg/ml
DEAE-Sepharose(fastflow)上样峰 88.36μg/ml
0.05mol/LNaCl溶液洗脱组分 无活性
0.1mol/LNaCl溶液洗脱组分 无活性
0.15mol/LNaCl溶液洗脱组分 无活性
0.2mol/LNaCl溶液洗脱组分 无活性
0.3mol/LNaCl溶液洗脱组分 无活性
0.5mol/LNaCl溶液洗脱组分 无活性
1.0mol/LNaCl溶液洗脱组分 227.27μg/ml
取 100ml蛋白质浓度为 80 μg/ml的 60% ～ 80%硫酸铵沉淀
组份 , 进行蛋白质纯化后得到各组分的干重和活性 , 见表 2。
图 2　大孔树脂 101洗脱曲线图
表 2　大孔树脂纯化前后各样品物质得率和抗病毒活性
样品 干物质得率 活性(IC50)
原物质 1 24mg/ml
上样峰 10.2% 3.7μg/ml
洗脱峰 84.3% 没有活性
3.2 　孔石莼蛋白提取物的稳定性研究 蛋白质因受物理因素或
化学因素的影响 ,改变了分子内部的特有结构 , 导致理化性质改
变 , 生理活性丧失 , 如果是蛋白多糖或者糖蛋白 ,因为糖基的保护
作用而使得蛋白质的性质更加稳定。蛋白多糖的生物活性多数
会因为糖苷键的水解而失活 ,因此本实验采用不同条件处理孔石
莼蛋白提取物 , 发现孔石莼蛋白提取物在常温下放置 24h, 其抗
病毒活性不改变。孔石莼蛋白提取物经过高压高温处理后 ,抗病
毒活性的有效浓度将由原来的 ng数量级上升到 mg数量级 , 抗病
毒活性损失严重。
60% ～ 80%硫酸铵沉淀样品和 95%乙醇共作用 24h,抗病毒
活性基本没有影响 , 故用大孔树脂纯化蛋白时 95%乙醇的洗脱
峰没有活性 ,并非说明是因 95%乙醇作用使样品抗病毒活性 , 而
说明样品中抗病毒活性的成分保留在上样峰中。
孔石莼蛋白经过特异性的 N-糖苷酶酶解后 , 抗病毒活性消
失 , 说明孔石莼蛋白中具有抗病毒活性的物质不是单纯的多糖或
者蛋白质 ,有可能是蛋白多糖或者糖蛋白。
表 3　样品稳定性研究
处理方式 处理前 IC50 /μg· ml-1 处理后 IC50
常温放置 24h 0.37 0.35μg/ml
高温高压灭菌 0.37 25.6mg/ml
特异性的N-糖苷酶酶解 0.37 没有活性
95%乙醇共置 24h 0.37 0.48μg/ml
3.3　各提取物的细胞毒性及抗病毒活性结果 孔石莼分离提取过
程中的各样品的Hela细胞毒性和抗病毒活性结果见表 4.结果表明 ,
孔石莼几种提取成分都有一定的抗病毒活性,尤其是粗提物经过大
孔树脂分离纯化后 ,所得上样峰中孔石莼蛋白多糖抗病毒活性得到
显著提高(IC50=3.7μg/ml),同时其治疗指数(TI=TC50/IC50)也得
到了提高。该样品抗病毒活性的具体结果见表 4。
表 4　不同样品的 TC50、IC50和治疗指数(TI)
蛋白样品 TC50 /mg· ml-1 IC50 /μg· ml-1 TI
60%硫酸铵沉淀样品 12 200 60
60% ～ 80%硫酸铵沉淀样品 24 60 400
大孔树脂纯化后的上样峰 8 3.7 2162.2
大孔树脂洗脱峰(2号峰) - - -
3.4 　孔石莼蛋白提取物抗病毒机理研究的结果 孔石莼蛋白多
糖(大孔树脂分离所得的上样峰样品)的抗病毒活性机理初步研
究发现 ,样品的预防效果比较明显 , 其 IC50 =400ng/ml, 同时样品
也具有直接灭活病毒的作用 , 其 IC50 =19μg/ml, 其 CPE观察结
果见图 3。
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.5
图 3　大孔树脂上样峰对病毒的抑制作用
4　讨论
大孔吸附树脂是以苯乙烯和丙酸酯为单体 ,加入乙烯苯为交
联剂 , 甲苯 、二甲苯为致孔剂 , 它们相互交联聚合形成了多孔骨架
结构。树脂是一类含离子交换集团的交联聚合物 ,它的理化性质
稳定 , 不溶于酸 、碱及有机溶剂 , 不受无机盐类及强离子低分子化
合物的影响。树脂吸附作用是依靠它和被吸附的分子(吸附质)
之间的范德华引力 , 通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作 ,
使有机化合物根据有吸附力及其分子量大小可以经一定溶剂洗
脱分开而达到分离 、纯化 、除杂 、浓缩等不同目的。本试验采用大
孔树脂进行生物大分子活性物质的分离纯化少有报道 ,试验过程
中曾尝试用离子交换的方法分离抗病毒活性成份但未成功失败 ,
用凝胶柱的方法也未能较好分离活性物质成分 , 因此 ,采用大孔
树脂进行分离 , 虽然大孔树脂分离粗提物也没有得到单一的物
质 , 但可得到活性更强的较纯提取物 , 为下一步的研究工作提供
了方便。
本试验以抗病毒活性为导向 ,应用盐析沉淀 、大孔树脂层析 、
离子交换层析等多种方法 ,从孔石莼中分离到了具有明显抗病毒
活性的蛋白多糖。目前抗病毒药物中大多是小分子化合物或者
是中药复方制剂 , 糖蛋白或者蛋白多糖具有抗病毒活性的报道并
不多 , 生物大分子抗病毒活性在将来的药物研发中应该更具有专
一性。因为生物大分子对人体的副作用小 ,所以开发具有抗病毒
药物的生物活性大分子将是以后药物发展的重要方向。因此本
试验所研究的生物活性大分子对新药研究将提供一定的帮助。
近年来多糖 、糖蛋白或者蛋白多糖抗病毒活性的研究开始增
多 , 其主要原因可能有多种。 海藻多糖是重要的抗病毒活性物
质。也因为目前没有很好的方法来分离蛋白质和多糖或者糖蛋
白和蛋白多糖 , 所以很多研究是停留在多糖或者蛋白抗病毒活性
研究的层面上。AdhikariU[ 9] , MandalP[ 10]等研究了从褐藻中提
取的多糖抗疱疹病毒 ,且这些多糖对细胞没有毒性。 Filho[ 11]等
人在从高粱属植物中分离纯化得到一种抗病毒的多肽。也有人
从多叶奇果菌子实体中分离得到一种分子量大约为 29.5KD的
新型抗病毒蛋白。体外抗病毒活性的 IC50为 4.1μg/ml[ 3] 。这些
多糖和蛋白或者是糖蛋白大多都是抗疱疹病毒的 ,抗 CVB3的糖
蛋白或者蛋白多糖不多见 , 通过本实验室的前期工作发现 , 从孔
石莼中分离得到的这一抗 CVB3活性的蛋白多糖 , 目前本实验室
正在进行进一步的分离纯化与鉴定 ,并将继续研究这物质抗病毒
活性的机理。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.5 时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期