全 文 ：网络出版时间:2011 －7 －22 16:53 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． R． 20110722． 1653． 201108． 1183_037． html
凹顶藻萜提取物对荷 H22 肿瘤小鼠
氧化应激及 p53 和 MMP-9 表达的影响
梁 惠1，刘 颖2，韩 磊3，贺 娟3，张文卿4，马爱国1
(1．青岛大学医学院营养研究所，山东 青岛 266021;2．青岛大学医学院细胞与分子生物学实验室，山东 青岛 266071;
3．青岛大学医学院附属医院营养科，山东 青岛 266003;4．青岛大学医学院病原生物学实验室，山东 青岛 266071)
收稿日期:2011 － 02 － 18，修回日期:2011 － 05 － 04
基金项目:山东省科技厅科技攻关项目(No 2006GG2302002) ，青岛
大学青年科研基金
作者简介:梁 惠(1964 －) ，女，博士，教授，博士生导师，研究方向:
医学营养学，E-mail:qdlianghui@ 126． com;
刘 颖(1973 －) ，女，硕士，实验师，研究方向:营养生化
学，通讯作者，E-mail:shenghua005@ 163． com
Effects of Laurencia terpenoid extract on oxidative
stress and expression of p53 and MMP-9 in H22
mice
LIANG Hui1，LIU Ying2，HAN Lei3，HE Juan3，
ZHANG Wen-qing4，MA Ai-guo1
(1． Dept of Nutrition，Medical College，Qingdao University，
Qingdao Shandong 266021，China;2． Laboratory of Cellular
and Molecular Biology，Medical College，Qingdao University，
Qingdao Shandong 266071，China ;3． Nutrition Division of the
Affiliated Hospital，Medical College，Qingdao University，Qingd-
ao Shandong 266003，China;4． Dept of Pathogenic Biology，
Medical College，Qingdao University，Qingdao Shandong
266071，China )
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2011． 08． 037
文献标识码:A 文章编号:1001 － 1978(2011)08 － 1183 － 02
中国图书分类号:R-332;R284． 1;R329． 24;R345． 63;R349．
1;R394． 2;R735． 7;R979． 1
关键词:萜;凹顶藻;H22 肿瘤;p53;MMP-9;抗氧化
Key words:terpenoid;Laurencia;H22 tumor;p53;MMP-9;an-
ti-lipid peroxidation
肝癌是严重危害人类生命健康的顽症之一。近年来，海
洋萜类化合物的天然抗氧化、抗肿瘤活性已引起人们的广泛
关注［1］。凹顶藻是海洋萜类化合物的重要来源，课题组前期
已从三列凹顶藻中成功获得总萜含量为 63. 3%的凹顶藻萜
提取物，并进行一系列体内外实验，获得了可喜的研究结
果［2 － 4］。但目前关于凹顶藻萜类化合物对 H22 肿瘤 p53 和
MMP-9 表达及氧化应激水平的影响，国内外尚未见相关报
道。本实验以凹顶藻萜提取物为干预物，观察其对小鼠 H22
肿瘤的抑制作用，现将结果报道如下。
1 材料与方法
1． 1 实验动物及瘤株 清洁级昆明小鼠，18 ～ 23 g，♂，由
青岛市实验动物中心提供。H22 小鼠肝癌细胞株，由中国医
学科学院药物研究所引进。
1． 2 主要试剂 凹顶藻萜提取物(LTE) ，为本实验室所有;
兔抗小鼠突变型 p53 抗体、MMP-9 抗体(北京中山生物技术
有限公司) ;免疫组化试剂盒(北京中山生物技术有限公
司) ;SOD 及 MDA 检测试剂盒(南京建成生物工程研究
所) ;
1． 3 动物模型的建立 40 只昆明小鼠随机分为模型组、
LTE低、中、高剂量干预组。于小鼠左前肢腋窝皮下接种 2
× 109·L －1的 H22 肝癌细胞悬液 0. 2 ml。24 h后，模型组给
予大豆色拉油 0. 5 ml·d －1灌胃;LTE 低、中、高剂量干预组
给予大豆色拉油稀释的 LTE 溶液 25、50、100 mg·kg －1·
d －1 0. 5 ml灌胃;各组均连续给药 2 周，观察小鼠生长情况。
1． 4 样品采集 末次给药 24 h 后，小鼠腹主动脉取血，肝
素抗凝，用于抗氧化指标检测。完整剥离肿瘤，计算抑瘤率。
抑瘤率 /% =(对照组平均瘤质量 －给药组平均瘤质量)/对
照组平均瘤质量 × 100%。
1． 5 LTE对小鼠H22 肿瘤组织中突变型 p53 和MMP-9 表
达的影响 取上述各组小鼠新鲜肿瘤组织常规做石蜡切片，
按照 SP免疫组化试剂盒说明书操作。
1． 6 LTE对 H22 小鼠血浆过氧化指标的影响 按照试剂
盒说明书操作。
1． 7 LTE对红细胞溶血度的影响 采用比色法检测。
1． 8 统计学处理 使用 SPSS11. 5 软件进行统计学处理，两
组间比较采用 t检验。
2 结果
2． 1 实验小鼠成瘤情况 模型组小鼠肿瘤生长潜伏期
(TT)短，2 d即可成瘤，且生长迅速。与模型组比较，LTE 各
剂量组小鼠 TT达到 3 ～ 4 d，肿瘤生长缓慢。各组小鼠成瘤
率为 100%。
2． 2 LTE对 H22 小鼠肿瘤质量的影响 模型组小鼠肿瘤
质量较大，达到(2. 68 ± 0. 86)g;LTE 各组小鼠 H22 肿瘤生
长均明显受到抑制，分别达到(1. 94 ± 0. 52)、(1. 74 ± 0. 65)
和(1. 56 ± 0. 44)g，与模型组比较，差异有显著性(P ＜
0. 05)。且随着药物剂量的增加，抑瘤率逐渐升高，分别达到
27. 5%、34. 9%和 41. 4%，具有量效依赖趋势。
2． 3 LTE对小鼠H22 肿瘤组织中突变型 p53 和MMP-9 表
达的影响 LTE高剂量组突变型 p53 和 MMP-9 阳性细胞表
达率下降，与模型组比较，差异具有显著性(P ＜ 0. 05)。见
·3811·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 Aug;27(8) :1183 ～ 4
Tab 1。
Tab 1 Effect of LTE on expression of
p53 and MMP9 in H22 mice(珋x ± s)
Group n
Dose /
mg·kg －1·d －1
Positive rate /%
p53 MMP-9
Model 9 0． 00 42． 5 ± 1． 31 75． 1 ± 2． 68
LTE 9 25． 00 35． 6 ± 1． 69 65． 9 ± 1． 52
8 50． 00 30． 1 ± 1． 74 42． 6 ± 1． 36*
7 100． 00 20． 8 ± 0． 64* 32． 5 ± 0． 83*
* P ＜ 0. 05 vs model group
2． 4 LTE 对 H22 小鼠血浆过氧化指标的影响 LTE 高剂
量组 SOD酶活力明显升高，而中、高剂量组 MDA 含量则减
少，与模型组比较，差异有显著性(P ＜ 0. 05)。见 Tab 2。
2． 5 LTE对 H22 小鼠红细胞溶血度的影响 中、高剂量组
红细胞溶血度明显下降，与模型组比较，差异有显著性(P ＜
0. 05)。见 Tab 2。
Tab 2 Effect of LTE on hemolytic degree
and SOD and MDA in serum of H22 mice(珋x ± s)
Group n
Dose /
mg·kg － 1·d － 1
SOD /
kU·L －1
MDA /
μmol·L －1
hemolytic
degree /%
Model 9 0． 00 28． 87 ± 3． 17 57． 98 ± 4． 16 14． 52 ± 5． 67
LTE 9 25． 00 35． 01 ± 5． 84 45． 22 ± 8． 81 11． 42 ± 6． 63
8 50． 00 42． 95 ± 7． 23 32． 39 ± 6． 16* 7． 57 ± 3． 34*
7 100． 00 57． 13 ± 6． 38* 24． 85 ± 3． 68* 6． 40 ± 2． 16*
* P ＜0. 05 vs model group
3 讨论
突变型 p53 蛋白是肿瘤组织所特有的标志蛋白，检测该
基因蛋白在肿瘤组织中的表达情况是反映肿瘤生长状况的
一个重要指标［5］。MMP-9 又称明胶酶 B(gelatinase-B) ，检测
肿瘤组织中 MMP-9 蛋白的表达情况对评价药物对肿瘤的治
疗效果具有重要意义［6］。本实验结果显示，LTE干预组肿瘤
生长普遍被抑制，同时，其 p53 和 MMP-9 蛋白的表达水平明
显下降。表明 LTE可通过下调 p53 和 MMP-9 等凋亡相关蛋
白的表达，限制肿瘤组织的侵袭和转移能力，抑制小鼠 H22
肿瘤组织生长。
大量研究证实，肿瘤患者可通过多种途径引发氧化应
激，而提高 SOD、GSH 等抗氧化剂的表达水平及活性，可明
显抑制肿瘤细胞的生长并诱导其发生凋亡。H2O2 是活性氧
的一种，通常被用于诱导红细胞溶血，以检测红细胞膜抗氧
化能力［7］。本实验结果显示，一定剂量的 LTE 可明显提高
H22 荷瘤小鼠血浆中 SOD 酶活力，降低脂质过氧化物 MDA
含量，减少 H2O2 诱导的红细胞溶血。表明 LTE 具有较强的
抗氧化活性，可有效阻止脂质过氧化反应，提高机体抗氧化
能力，这可能也是 LTE抑制 H22 肿瘤生长的另一机制。
总之，凹顶藻萜类化合物作为一种海洋天然活性物质，
可有效抑制 H22 荷瘤小鼠肿瘤生长，值得进一步开发利用
和深入探索。
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·4811· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 Aug;27(8) :1183 ～ 4