全 文 ：收稿日期:2016 － 05 － 12
基金项目:福建省卫生和计划生育委员会中医药科研课题 (wzze201309) ;福建省科技厅省属公益类科研院所基本科研
专项 (2015Ｒ1035 － 15)。
作者简介:胡娟，女，从事中药活性成分与质量标准研究。Email:huj@ fjtcm. edu. cn
基于 HPLC指纹图谱对牛樟芝质量评价研究
周春权1 庞文生2 胡 娟1，2*
1． 福建省中医药研究院，福建 福州 350003;2． 福建中医药大学，福建 福州 350122
【摘 要】 目的:建立牛樟芝子实体 HPLC指纹图谱，使用中药指纹图谱相似度软件进行分析，比较椴木上生长的
菌丝体、液态和固态发酵技术产生的牛樟芝指纹图谱相似度差异性，对不同方法生产的牛樟芝质量进行评价。方法:采用
岛津 LC － 20AT高效液相色谱仪配备 SPD － 20AV检测器，大连依利特 C18色谱柱，流速为 1mL /min，流动相为乙腈 － 0. 2%
冰乙酸水溶液二元梯度洗脱，检测波长 252nm，测定牛樟芝子实体 HPLC 指纹图谱。结果:在上述条件下，三种培养方法
产生的牛樟芝 HPLC指纹图谱相似度为 0. 787，其质量具有一定的稳定性和一致性。结论:通过比较牛樟芝指纹图谱差异
性，可以评价其质量。
【关键词】 牛樟芝;HPLC指纹图谱;质量评价
【中图分类号】Ｒ282. 71 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2016)15 － 0028 － 02
牛樟芝亦名牛樟菇、樟生薄孔菌、樟窟内菇、
红樟芝，寄生于台湾特有的保育类树种牛樟树，
通常腐生于牛樟树上百年的树干空洞内［1］。研究
表明，樟芝含有丰富的生理活性物质，包括多糖
体、三萜类化合物、超氧化物歧化酶、腺苷、小
分子蛋白质等，其中最主要的活性成分是多糖和
三萜类化合物［2］。牛樟芝有抗肿瘤、抗病毒、抗
过敏、降血脂、降血糖等作用，被台湾人视为
“神菌”，价格日涨，一度高过冬虫夏草［3］。
牛樟芝生长极为缓慢，自然产量稀少。为了
满足市场的需求，一些商家建立了液态和固态发
酵技术以缩短时间和增加牛樟芝产量［4］。也有一
些人在其它树木如香樟、沉水樟、甚至杉木上培
育“樟芝”，造成牛樟芝产品质量混乱。本项目建
立牛樟芝子实体 HPLC指纹图谱，分别对三批次牛
樟椴木、液态和固态发酵技术产生的 “牛樟芝”
HPLC指纹图谱共有模式进行比较，以进行质量
评价。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 日本岛津 LC － 20AT 高效液相色谱仪
配备 SPD －20AV检测器。
1. 2 材料 牛樟椴木、液态和固态发酵技术生产
牛樟芝的干燥子实体。乙腈 (德国 Merck 公司)
为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法
2. 1 供试品制备 牛樟芝供试品，5 倍量体积无
水乙醇浸泡 30min 后，水浴回流提取 2 次，每次
2h。合并两次提取滤液后减压浓缩至近干，真空
减压干燥得干浸膏粉。精密称取牛樟芝乙醇干膏
粉 1g，用色谱甲醇超声溶解，定容于 5mL 容量瓶
中，所得牛樟芝质量浓度为 0. 25g /mL。过 0. 45μm
滤膜，备用。
2. 2 色谱条件 采用乙腈 － 0. 2%的醋酸溶液进行
梯度洗脱，检测波长为 252nm，流速为 1mL /min，
室温，进样量 10μL，梯度洗脱程序见表 1。
表 1 牛樟芝 HPLC指纹图谱梯度洗脱程序
时间 乙腈 0. 2 % 乙酸 －水
0 10 90
20 30 70
40 55 45
60 100 30
2. 3 相似度计算 选择具有代表性的牛樟椴木、
液态和固态发酵技术生产牛樟芝的干燥子实体样
品各 3 个批次，通过实验获取样本图谱 (即指纹
图谱)并进行共有峰的提取，然后根据对共有峰
进行均值或中位数计算的结果建立样品的对照指
纹图谱;再将各样品的对照指纹图谱进行保留时
间、色谱峰匹配，最后采用相似度评价系统软件
自动计算相似度，采用双定性、双定量、相似度
等参数作为其质量评价的信息参数。
3 结果
3. 1 提取条件的优化与确定 在文献［5］的基础
上，采用无水乙醇对牛樟芝的三萜类成分的提取
效果较好;对比加热回流和超声处理提取牛樟芝
三萜的效果，发现加热回流的提取效果较佳;加
热回流 2 次、每次 2h，提取效果较好。
3. 2 色谱条件的优化与确定
·82· 中国民族民间医药 2016年 8月第 25卷第 15期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2016，Vol. 25，No. 15
3. 2. 1 检测波长的选择 采用对 245、250、252、
260nm 4个波长下的特征峰数目及峰面积进行比较，
其中 252nm波长下牛樟芝的三萜类成分具有最大吸
收，特征峰数目较多、峰面积较大，且基线平稳，
最终确定选择 252nm作为指纹图谱的检测波长。
3. 2. 2 梯度洗脱条件的确定 试验采用乙腈 －磷
酸溶液、乙腈 － 冰醋酸溶液，调节不同的酸浓度
进行梯度洗脱，其中乙腈 － 0. 2%冰醋酸系统的洗
脱效果较佳。
3. 3 指纹图谱的建立与分析 牛樟椴木牛樟芝 3
批，液态发酵牛樟芝 3 批，固态发酵牛樟芝 3 批;
通过对不同类型样品的指纹图谱进行比较，采用
国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系
统软件 (2004A 版)生成共有模式。三种类型的
牛樟芝 HPLC指纹图谱共有模式叠加图见图 1。
通过中药指纹图谱相似度软件得出牛樟芝
HPLC指纹图谱共有模式并与共有模式比较得出的
相似度，三种培养方法产生的牛樟芝相似度为
0. 787;所建立的方法不仅分离度较好，且标示出
了 7 个主要的特征峰，三种培养方法产生的牛樟芝
出峰均很明显。结果表明，牛樟椴木培养、液态
发酵、固态发酵牛樟芝指纹图谱相似度较好，其
质量具有一定的稳定性和一致性。
4 讨论
因牛樟芝具有解毒保肝、抗癌、提高免疫、
抗过敏、降血脂等神奇功效，素有 “药芝之王”、
“台湾森林中之红宝石”的美誉。由于野生牛樟芝
在民间的应用广泛，加之野生原料资源匮乏，其
价格不断高涨，并且激发了研究机构、生物公司
的强烈兴趣。
目前，牛樟芝人工培育大致可以分为椴木栽
培法、固体培养法、液体发酵法三种。椴木栽培
法利用樟芝原有宿主牛樟树椴木为培养基栽培牛
樟芝，能获得与野生牛樟芝相同之成分，功效相
同，避免野生牛樟树被盗伐，但培养时间长达二
至三年，培养成本高。固体培养法将牛樟芝菌种
以太空包进行菌丝体培养，太空包含有纤维物、
醣类、五谷杂粮类等，培养时间约三个月，培养
成本稍高。液体发酵法，利用液体发酵槽进行菌
种液体发酵以收取菌丝体，培养时间短，约 7 ～
14d左右，培养成本较低。
本文对不同的人工培育法生产樟芝的 HPLC 化
学指纹图谱比较表明，随着现代生物技术的不断
发展，不同人工方法培育的牛樟芝成份组成一致
性在不断提高，有利于牛樟树资源的保护，同时
满足人们对牛樟芝健康产品的需求。
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(编辑:熊金富)
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