全 文 ：　　文章编号: 1008-3499( 2001) S0-0008-02
分光光度法测定单胞藻数量初步研究
李士虎 ,朱　明
(淮海工学院海洋与水产学院 养殖教研室 , 江苏 连云港　 222042)
摘　要: 用分光光度计测定不同数量藻类在特定波长的吸收峰值 ( OD值 ) ,并和实际数量值进行比较 ,发现它们具有
良好的线性关系。 可用 OD值来表示藻类的数量值 ,简化藻类数量的测定方法和操作时的工作量。
关键词: 分光光度法 ; 数量测定 ; 单胞藻
中图分类号: S968. 4　　　文献标识码: A
0　引言
近 20多年来 ,随着鱼、虾、蟹、贝、海参等一些名特水产
品种类工厂化育苗的发展壮大 ,生物饵料产业也相应受到重
视并得到发展 ,特别是单胞藻类。 单胞藻类作为天然生物饵
料具有以下的优点。
( 1)单胞藻类是活的生物 ,在水中能够正常生活 ,一般
不会影响水质。 能够在水中进行光合作用 ,放出 O2 ,吸收水
体中的 CO2以及氨氮 ,降解水中的富营养物质 ,有改善水质
的作用。
( 2)营养丰富 ,能满足水产动物的营养需要。 并且可针
对养殖对象筛选满足其各发育阶段营养需要的、饵料效果好
的单胞藻类。
( 3) 在适口性方面 ,大多数贝类和其他水产动物幼虫开
始摄食时 ,只能摄取几μm到十几μm大小的饵料。这样可以
通过选择大小合适、运动能力和分布水层都适合培育幼虫摄
食的单胞藻类进行培养来满足需求 ,而如此微小的饵料颗
粒 ,依目前的技术水平还难以用人工饵料代替。
( 4) 由于有些单胞藻细胞壁薄甚至无细胞壁 ,所以很容
易被消化吸收 ,而且一般培育的幼虫都喜欢吃单胞藻类 ,作
为生物饵料的单胞藻在工厂化育苗生产中的重要性不言而
喻 ,单胞藻类在生产中的有无和是否充足 ,直接影响生产苗
种的质量和数量。因此 ,大多数育苗生产单位 ,都用相当的精
力、一定的水体来培养单胞藻类。在单胞藻类培养的过程中 ,
需要经常测定藻类的数量 ,如接种数量、投喂数量、藻种即将
老化时的最高数量等。
传统的藻类数量测定方法是用血球计数器进行的。虽然
该方法操作较简单 ,但由于要进行数量稀释 ,而且不同操作
人员在读数时取舍不同 ,往往会造成一定的实验误差。
由于单胞藻菌体是不透光的 ,光束通过藻液时 ,将会由
于被散射或被吸收而降低其透过量 ,因此 ,可考虑建立利用
分光光度法测定单胞藻数量的方法。
1　材料和方法
1. 1　试验材料
培养纯种的小新月菱形藻 ,用来作试验。
1. 2　最大吸收波长的确定
某种单胞藻在某一特定波长具有最高吸收峰 ,则此波长
为最大吸收波长 ,其测定方法是:
在不同波长下 ,测定样品的不同 OD值 ,把连续、多次在
不同波长下测得的 OD值进行比较 ,找出 OD值最大时的波
长 ,即为该种单胞藻的最高吸收峰。
经测定得小新月菱形藻的最高吸收峰为 454 nm。
1. 3　单胞藻液的数量分组和检测
取新月菱形藻液 (外观藻液为金黄色 ) ,分成 5个数量梯
度 ,测定每一数量下的 OD454值和实际数量值 ( 106 m L- 1 )。
1. 4　数据分析依据
用 x表示 OD454值 , y表示单胞藻的数量值 ( 106 m L- 1 ) ,
根据最小平方法 ,设二者间的函数关系式为:
y= ax+ b,
相关系数的表达式为:
r =
n∑ x y - ∑ x∑ y
[n∑ x 2 - (∑ x ) 2 ] 12 [n∑ n2 - (∑ y ) 2 ] 12 ,
常数 a ,b的计算公式为:
a =
( n∑ xy - ∑ x∑ y )
[n∑ x 2 - (∑ x ) 2 ] ,
b =
∑ y - a∑ x )
n
.
2　结果
取不同数量的藻液测其 OD454 ,如表 1所示。 其中 , r =
0. 885; a= 2. 509; b= 0. 199; y = 2. 509x+ 0. 199. 根据二者
关系所画的曲线图见图 1。
第 10卷· 专刊·
2001年 6月
淮　海　工　学　院　学　报
Journal of Huaihai Institute o f Techno lo g y
Vo l. 10 S. I.
June 2001
　
收稿日期: 2001-04-12
表 1　不同数量藻液 OD值
Table 1　 The OD values in accordance with
diff erent numbers of algae cells
序号 x y
1 0. 680 2. 100
2 0. 380 1. 050
3 0. 252 0. 525
4 0. 157 0. 262
5 0. 135 0. 131
∑ 1. 224 4. 068
图 1　 OD454值与数量的关系图
Fig. 1　 The relationship between the OD454 value and
the numbers of algae cells
　　因 r1= 0. 885大于 0. 8,所以 OD454值与数量值具有较强
的线性关系。因此 ,可以建立 OD值与数量的关系曲线 ,可以
用 OD454值来表示单胞藻的数量值 ,并通过 OD值测定掌握
不同时期单胞藻的数量。
3　讨论和结束语
( 1) 由于生产中 ,生产单位仅培育一种或两种单胞藻供
本单位生产使用 ,因此 ,本文仅用一种单胞进行试验 ,得出上
面的数据和图表。 依据此原理可以进行更大范围的实验 ,得
出较全面的数据。 本文旨在抛砖引玉 ,探讨单胞藻类数量测
定的新方法 ,简化单胞藻数量测定的操作 ,便于在生产实践
中更好地控制单胞藻类的数目。
( 2)建议在生产中 ,可根据经验直接用 OD值来取代数
量值 ,虽然随着各种单胞藻的个体大小、颜色的不同其 OD
值也不同 ,但根据对其它单胞藻做同样的试验 ,得出同一种
单胞藻的 OD值和数量关系是确定 ,因此在全面测定某种单
胞藻类在不同生长时期的 OD值后 ,可供以后应用时参考 ,
而直接用 OD值来取代数量值。
( 3)在单胞藻培养中 ,也可用 OD值来监测藻类生长情
况。从单胞藻接种培养开始 ,定时测 OD值直至藻类老化 ,列
出一系列 OD值 ,在以后的藻类培养中可作参考 ,通过随时
测 OD值来了解藻类生长状况 ,及时投喂或扩大培养。 本试
验小新月菱形藻生长最高峰时的 OD454值为 1. 5,在此后生长
5天内 , OD454值不再增加。 5天后 ,藻类老化急剧死亡 ,藻液
变清。因此 ,可以以 1. 5这个 OD454值作为该藻类培养的最高
OD454值 (临界值 ) ,在以后的藻类培养中 ,当 OD值接近此临
界时 ,要及时投喂或扩大培养。
参考文献:
[1 ]　山东省水产学校 .水产生物统计 [M ] .北京:农业出版社 , 1990.
[2 ]　陈明耀 .生物饵料培养 [M ].北京:农业出版社 , 1985.
作者简介:李士虎 ( 1971- ) ,男 ,江苏响水人 ,淮海工学院海洋与
水产学院养殖教研室助理实验师 ,主要从事养殖实验等方面的工作。
A Tentative Study on the Measuring of the Numbers of Unicellular
Algae by Spectrophotometer
L I Shi-hu, ZHU Ming
( Teaching and Research Section of Aquaculture, Col leg e of Marine Science and Aquaculture,
Huaih ai Ins ti tu te of Techn ology, Lianyung ang 222042, Ch ina)
Abstract: This paper com pares the light ov erdo sing ( OD) va lues of diffe rent-density a lg ae in specific waveleng th determined
by spect ropho tometer with the actual v alues of density. The comparison shows that ther e is a linear rela tionship between
them, forming a curv e diag ram. In this case, the density v alue of a lg a can be scaled by the OD value, thus simplifying the
measuring of a lg a density and reducing th e amount of w o rk ther ein.
Key Words: ov e rdo sing value; concent ration; unicellula r alga e
(本文责任编校: 褚金红 )
9· 专刊· 李士虎等: 分光光度法测定单胞藻数量初步研究