全 文 ：第 71 卷第 2 期 厦 门 水 产 学 院 学 报
19 9 5 年 12 月 JO U R N L AO F X I AM E N F S H E IR E IS C O L L E G E
Vol
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17 N 02
D e e
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19 9 5
新型混合酶分离海萝原生质体的研究
陈菊琦
(厦门水产学院养殖系 , 厦门 3 6 1 0 2 1 )
摘要 : 本文报道使用新型混合酶 , 首次成功分离海萝原生质体的实验结果与培养结果 . 海萝
(G l o i lP e l t i : fu cr at a) 酶解 2 . 5 ~ h3 , 获得大量成活原生质体 。 并观察到原生质体的自融 。 原
生质体产率为 3 x 10 ` /克鲜藻 ; 成活率为 65 % 。 原生质浓厚的细胞经培养 , 可形成多细胞团
或愈伤组织状细胞团 , 这与小石花菜细胞的培养结果 , 基本类同 。 新型混合酶价格低廉 、 制
作简便 ; 在使用上 , 还有促进细胞分裂 、 细胞团较长时间存活的优点 。 新型混合酶的研制和
应用 ,对促进海藻生物工程的研究和海藻资源的开发 ,对推进 21 世纪海藻高新技术及其产业
的发展 , 将有重大的现实意义和战略性意义 。
关钮词 : 新型混合酶 , 海萝 , 原生质体 , 自融 , 海萝胶
有关红藻纲中 , 经济红藻原生质体酶法分离技术的研究 , 近十年来 , 国际上有一些
研究报告 , 不论是来自国外的还是国内的 , 研究者均以商品酶复合物为工具 , 借此使经
济红藻原生质体得以分离 . 过去十年的历史表明 : 以商品酶复合物为工具的这一研究方
法 , 使经济红藻原生质体方面的研究工作 , 进展缓慢 ; 原生质体分离有成功记载的种类 ,
占产胶红藻的比数甚小 ; 少数被成功分离的种类 , 其原生质体在培养中 , 大多因细胞存
活的寿命短促而使实验终止 。 若要切实改变这种状况 , 必须探索酶法技术发展的新路子 。
笔者认为 , 问题的解决 , 关键在于依靠科学技术开发善用现有生物资源 , 并研制对多种
产胶红藻有效的新型混合酶 。 对新型混合酶的解决途径 , 国外同行专家在五 、 六年前提
出过设想和建议以幻 , 但至今未见有成功的报道 。
笔者近几年来 , 开发利用多种廉价酶源 .l[ ’ 〕 , 并研制成功对多种经济红藻有效的新型
混合酶 。 实践表明 , 应用该新型混合酶 已成功获得药用红藻— 鹤鸽菜 3j[ 和产胶红藻—小石花菜 [’j 、 细毛石花菜 、 海萝等的原生质体 , 收到了研制新型混合酶的预期效果 。 并在
酶法技术及其细胞培养的基础上 , 进一步探讨产胶红藻企业化生产的可行性 。 现将新型
混合酶应用于海萝属 ( lG of OP elt is ) 的酶解效果 、 制备海萝 ( G . flt cr at a) 大量成活原生
质体的实验结果 , 原生质体的培养 、 观察结果 , 以及产胶红藻企业化生产的可行性等方
面的研究结果 , 报告于下 。
1 材料和方法
收稿 日期 : 1 9 9 5一 0 6一 2 9
厦 门 水 产 学 院 学 院 第 71 卷
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1 海藻采集与处理
海萝 (G . z f` r ca ta )在厦门海区沿岸出现时期较短 , 自 4 月中旬至 5 月下旬 , 于 91
年和 92 年的这一时期 , 采 自鼓浪屿浪大的高潮带岩石上 。 海藻采回后 , 先剔去具有囊果
的藻株 , 后用天然海水粗洗 。 一部分经显微镜下挑选不具生殖细胞或少具四分抱子囊的
作为实验用藻株 , 其余的则在低温室 中暂养留用 。 实验藻株的处理 : 切去其固着器部分 ,
将藻放入盛有天然海水的烧杯中 , 借用电动磁力搅拌器的搅拌力 , 经多次换海水将表面
泥砂等附着物彻底除掉 、 洗净 , 捞起海藻 , 用锐利刀片将藻垛成 1 m m Z 大小的碎块 。 用
适宜孔径的筛绢网兜住碎藻块 , 移至海水杯中 , 筛去碎屑并稍用力地反复揉搓 , 且多次
更换海水 , 可达到除尽附着硅藻的好效果 。 经消毒过滤海水冲洗 , 再用滤纸吸干表面的
水分 , 立即转入 7%。 K l 消毒海水中 , 浸泡 5~ 10 m in , 用消毒海水再次冲洗 , 待用 。
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2 原生质体的制备与收集
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2
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1 新型混合酶的配制 将粒花冠小月螺等生物取回后 , 经 1~ 2 天饥饿处理 , 以防
止肠 胃中未被消化 了的藻细胞等物带进酶液 。 在室温下 , 分别按一定工艺程序粗提其消
化酶 。 然后以粒花冠小月螺消化酶为主 , 其他生物酶为辅 , 按适当配比混合 , 配制成活
体生物酶混合液 , 亦即新型混合酶 (其 p H 值 6 . 5 左右勿需另作调整 ) , 此混合酶液最后
经 。 . 6 拼M 微孔滤膜抽滤灭菌 、 装瓶 、 贮入冰箱 。 在通常情况下 , 1 周内使用 , 均有较好
的酶解效果 。
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2 酶解条件 于 5 m l 活体生物酶混合液中 , 加入葡萄糖渗透剂 , 配成 0 . 8 ~ I M 的
葡萄糖酶液 。 待葡萄糖完全溶解后 , 按 1 m l 酶液 。 . 1 9 碎藻块的比例加入 , 并摇匀 , 放
于 26 ℃恒温水浴锅 中 , 黑暗酶解 2 . 5 ~ 3 h 。 酶解过程中用玻棒不时搅拌 , 约 0 . s h 蘸取
少许藻块作 1 次镜检 , 以观察藻细胞的解离状况 。
1
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2
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3 原生质体的收集与计数 酶解 2 . s h 左右 , 镜检观察到在酶液中或在碎藻块附
近 , 出现少数解离下来的海萝细胞 。 于该时刻起开始收集 。 收集之前 , 先将上层的酶液
倒入另 1个小烧杯中 , 以便再次使用 。 其余含藻块及细胞的酶液用 3 0 目筛绢双层过滤 ,
以比重为 1 . 0 25 的高渗消毒海水边冲洗 、 边柔搓筛绢 , 以助漓出更多的分离细胞 。 残留
在筛绢内的 , 未被完全解离的碎藻块 , 仍放回到原酶液中 , 再行黑暗酶解 0 . s h , 然后用
同法再次收集 。 将两次收集到的含有细胞的滤液合并于 1 个大离心管中 , 静置 20 m in , 再
用长型毛细吸管 自上而下地吸出中上层部分 , 以弃去杂质较多的下层 。 然后 , 这含有细
胞的滤液经 30 0 目筛绢双层过滤连续 3 遍 , 以除去细胞碎屑 。 所得细胞滤液用手摇离心
初浓缩 , 并用 比重为 1 . 0 2 5 的高渗消毒海水洗涤 、 离心 3 次 , 每次约 3 m in , 以彻底除去
酶液和糖分 。 经最后 1 次离心 , 离心管底部收集到的 , 显黄红色的聚集物 , 即为海萝的
分离细胞又称原生质体 。 然后 , 加入高渗消毒海水至一定刻度 , 充分摇匀 , 用吸管任取
1 滴 , 滴在洁净的血球计数板上计数 , 并以此数据换算 出在相 同条件下 , 1 克鲜藻可获得
的成活原生质体的个数即为原生质体产率 。
1
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3 原生质体的培养方法和观察方法
1
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3
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1 培养方法 将上述收集到的浓缩海萝原生质体 , 加入适量培养液 , 摇匀 , 即成原
生质体或细胞悬浮液 。 将此悬浮液一部分滴在事先在玻片上铺有薄薄一层海水配制的 1 .
5 一 2 %琼脂板上 ; 一部分直接滴在玻 片上 , 并盖于器皿中以保持一定湿度 。 静置 48 h , 待
第 2期 新型混合酶分离海萝原生质体的研究
细胞附着 。 附着之后 , 载有细胞的琼脂板则用滴加培养液的方式 , 使细胞进入液体—半固体的双层培养 。 每隔 2一 3 天滴加 1 次 (以琼脂板的大面不蒸发干为准 ) ; 直接滴在
玻片上的 , 则入浴培养 。 培养液 : 以 N 一 4 p p m 、 P 一 0 . 4 p p m 的氮磷海水培养液为基础 ,
每升中并加入 0 . 5 m g N A A 、 2 . 4 一 D 和多种维生素配制而成 。 培养液平 日置于冰箱内保
存 。 7 ~ 10 天更换 1 次培养液 。 光照强度 : 开始时在 2 0 ~ 3 0 0 L X 下培养 , 10 天后过渡到
5 0 0 ~ 60 0 L X
,
20 天以后一直在 70 。~ 1 0。。 L X 下培养 。 培养皿表面并盖有一层深绿色透
光塑料膜 , 使藻细胞吸收绿光以利于藻红素的形成 。 每日 12 h 光照 , 12 h 黑暗 , 由定时
器控制 。 培养温度 : 恒温室内 20 C 士 I C ; 实验室内温度变化范围 : 18 ~ 2 4 一 C 。
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3
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2 观察方法 滴片后的头 5 天 , 每 日不定时地观察多次 , 以后每日观察 1一 2 次 , 并
记录细胞变化的情形和出现变化的起始时间 。 挑选有代表性的 , 典型且清晰的个体 , 做
定点跟踪观察 , 必要时做显微测量和显微摄影等 。
2 酶解效果与培养结果
.2 1 新型混合酶应用于海萝的酶解效果
将海萝碎藻块投入酶液 , 酶解 1 . s h 观察 , 藻块稍有软化 、 边缘有 3 ~ 4 层细胞松动 ;
酶解 2 . s h , 藻块 已明显软化 , 镜检发现在较粘稠的酶液中 , 并有解离下来的少量海萝细
胞 ; 酶解 3 h , 藻块上有 80 %的细胞处于解离状态 。 经细胞收集 、 计数 , 原生质体产率为
3 x l 。“ 个 /克鲜藻 。 经显微镜观察 , 这些分离的海萝细胞其形态基本为圆形 、 细胞大小悬
殊 。 它们各占分离细胞总数的百分比如下 : 直径为 20 ~ 30 拼M 的约占 20 % ; 直径为 8~
15 拼M 的 , 约占 20 % ; .2 5 一 5 拼M 的 , 约占 60 % 。 上述的大细胞 , 原生质稀薄且较透明 ,
显而易见 , 它们来自髓部 。 当对初分离下来的大细胞镜下观察时就发现 , 它们的细胞形
态时有发生类似变形虫样地缓慢多变的情形 。 这是由于髓部的分离细胞 , 缺乏色素 , 无
法行光合作用 , 因而难于作适应性渗透调节 , 而表现出的不稳定状态 。 这些大细胞离体
后 , 失去养料来源 , 因而逐渐失去活力 , 维持不久便死亡消失 。 其余 80 %的中小型分离
细胞 , 原生质浓厚 , 并具有色素体 , 其中大部分细胞呈黄红色 ; 小部分细胞呈黄色 。 实
验 中并观察到原生质体的自融 (见图 ) 。
.2 2 海萝原生质体的培养结果
海萝原生质体 , 91 年分离培养 3批 , 培养观察最长的为 41 天 。 92 年分离培养 5 批 ,
培养观察时间最长的为 94 天 。 一般来说 , 自滴片后的头两天 , 观察到绿色的死细胞出现
较多 , 死细胞中大型细胞比数较多。 成活的中小型细胞 , 在入浴培养第二天以后 , 可基
本稳定 , 细胞成活率一般可维持在 65 写左右 。 并可在适宜的培养条件下行细胞分裂 。 其
细胞分裂方式和培养结果与笔者在前一篇报道的小石花菜原生质体的培养情况 , 基本类
同 。
2
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2
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1 形成多细胞团 充满色素体之小圆形 的原生质体 , 一般于培养的第 2 天开始细
胞分裂 , 并接着观察到分裂成 2 ~ 4 个细胞 的情形 , 这便是初始阶段的多细胞团 。 培养 1
周 , 已分裂成少则 6 个 、 多则 10 几个细胞 、 12 拼M x l3 拼M 大小的细胞团 (见图 ) 。 到第
厦 门 水 产 学 院 学 院 第 7 1卷
3 1天分裂成少则 0 1几个 , 多则 20 几个细胞 、 20 拼M x 25 拜M 大小的细胞团 。 培养 1 个
月 , 平均有 30 ~ 40 个细胞 、 40 拼M x s o 拼M 大小的细胞团 。 个别特大的细胞团可长成 1 0
拼M 又 1 25 拌M 大小 。 初始阶段的细胞团 , 细胞大小相差无几 , 随着细胞的繁殖 , 细胞大
小悬殊也越来越大 。 例如经 45 天培养的细胞团里 , 最小的细胞为 1 . 5 ~ 2 拜M 、 最大的为
5一 8 拌M 。 细胞团里的细胞基本为圆形 、 红色 , 深浅不一 。 经多次培养观察可以这样说 ,
来 自藻体表面的那些分离细胞 , 经分裂 , 可形成多细胞团 。
2
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2
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2 形成愈伤组织状细胞团 有关愈伤组织状细胞团的形成过程 , 在 《活体生物酶分
离石花菜原生质体的研究 》 一文中 , 已作详细描述 , 在此不再重述 。 愈伤组织状细胞团 ,
若从颜色上来分 , 有绛红色的 (甚至接近紫黑色的 ) 和淡黄色的 (或接近无色的 ) 两种
(见图 ) 。 显然 , 这与分离细胞在原藻体上着生部位色素的多寡有关 。 从色素浓郁之皮层
部位分离的细胞 , 通过分裂将发展为绛紫色的愈伤组织状细胞团 ; 从靠近髓部 、 色素较
淡之皮层部位分离的细胞 , 通过分裂将发展为淡黄色的愈伤组织状细胞团 。 相对而言 , 这
淡黄色的愈伤组织状细胞团 , 有时较易显现内部的细胞形态和细胞数 目 (尤其在培养 1个
月以后 , 更为明显 ) 。 培养 20 天后 , 愈伤组织状细胞团的表面 , 开始长出与细胞团颜色
相同的 , 不定数的 “ 芽 ” , 这些 “ 芽 ” 开始时由 1~ 2 个细胞组成 , 10 天后 , 有的能隐约
看到 20 ~ 30 个细胞组成的 “ 芽 ” 。 一般绛红色愈伤组织状细胞团上长的 “ 芽 ” 较粗壮 , 而
淡黄色愈伤组织状细胞团的 “ 芽 ” 较纤细 。 出 “ 芽 ” 后 , 又继续培养近两个月 , 就连这
粗壮的 “ 芽 ” , 也未见它有分化 。 淡黄色愈伤组织状细胞团 , 培养到 50 一 60 天时脱落出
许多无色的圆形细胞 , 其直径 2 . 5 拌M 不等 , 淡黄色愈伤组织状细胞团随之解体 。 总的来
说 , 两种愈伤组织细胞团 , 在培养的头 1个月里 , 生长都较快 , 个体大小悬殊较大 , 小
者约 40 拼M X 50 拌M 左右 , 大者可达 70 拌M x 90 产M 左右 已肉眼可见 , 培养 1个半月以
后 , 其生长速度均 明显减慢 。
3 讨论
红藻纲中 , 就 目前已成功分离原生质体的种类来说 , 原生质体培养大多获得多细胞
团或愈伤组织状细胞 团 , 仅角义菜 sj[ 与鹤鸽菜 s[] 两例获得完整藻株 。 不论是获得细胞团或
是获得完整藻株 , 它 们都能通过培养迅速繁殖 , 故对人类来说 , 两者同样都是有利用价
值的 。 海萝是提取海萝胶的唯一原藻 , 为主要经济海藻之一 。 在分类上属隐丝藻 目 。 从
它的原生质体培养结果来看 , 却与石花菜 目小石花菜原生质体培养实验 中所获得的结果 ,
基本类同 。 这意味着今后在产胶红藻的企业化生产中 , 细胞培养 、 细胞团收集这一 “ 微
繁殖 ” 生产工序 , 至少有 石花菜 、 海萝等产胶红藻可共用一条 “ 微繁殖 ” 生产线 。 倘若
按自然界产胶红藻之不同种类的旺盛季节来安排企业的生产 , 则可获得多种藻胶原料的
产品 。 如此行 , 必将使企业的生产效率和经济效益大幅度增长 。 至于 “ 微繁殖 ” 生产线
上的培养容器和培养方式 , 可考虑用绿色且透光的瓶 、 罐或管道 , 并以液体培养为宜 。 这
样可做到充分利用有效光能和营养盐 , 也便于补充 C O : , 只有从光能 、 温度 、 营养盐 、 碳
源等多方面 , 采取综合的有利措施 , 才能大幅度提高光合效率 , 并为确保下一阶段的中
第 2期 新型混合酶分离海萝原生质体的研究
型试验— 细胞团的大容量培养 (或大量生产 ), 创造必要的条件和必备的设施 。众所周知 , 在有机体内 , 每个细胞的生命活动 , 是受机体极其复杂的综合作用影响
和制约的 。 而海藻细胞一旦脱离机体 , 它们各 自的命运与前途将会怎样 ? 这又与何有关 ?
根据本实验中 , 各部位的分离细胞经培养所获得的 , 有显著差异的实验结果 , 可帮助我
们找到答案 。 那些不具色素 、 且原生质稀薄的髓部分离细胞经培养 , 仍然无分裂能力 , 有
的奄奄一息 ; 具有少量和较多量色素体的皮层部位分离细胞 , 则发展为有分裂能力和有
较强分裂能力的愈伤组织状细胞团 ; 那些充满色素体的表面分离细胞 , 则发展为有旺盛
分裂能力的多细胞团 。 据此笔者认为 : 细胞 自脱离有机体开始 , 则逐渐摆脱机体的复杂
影响和制约 , 从此 , 单离细胞的生命前途 , 或者说其潜在活力和细胞分裂能力 , 则唯独
与其内部行光合作用的色素体 (当然包含吸收光能的色素 ) 息息相关 。 对此 , 海藻生物
工程研究者必须预先能充分地了解 。 在实验中 , 只有紧紧把握色素体丰盈 、 藻色浓郁 、 原
生质浓厚的这部分个体 , 并加以科学利用 , 实验 才有成功的可能 。
该种新型混合酶目前还处于试制阶段 , 尚有一些值得继续深入探讨或有待改进之处 ,
然而 , 使用这一未臻完善的新型混合酶 , 已显示 出巨大的酶活力 , 并且有促进细胞分裂
和细胞团长时间存活等诸多优点 。 在海藻的酶法技术领域里 , 新型混合酶的问世 , 可以
说 , 较好地解决了使细胞壁组成成分复杂的经济红藻 , 行解壁的关键性技术难题 , 因而 ,
为经济海藻胞壁的酶解或原生质体的分离 , 奠定 了理论基础和技术基础 , 同时也为海藻
高新技术的发展 , 开拓了广阔的天地 。 本研究所采用的实验 方法和所获得的实验结果 , 将
再次为产胶红藻的企业化生产提供科学依据 。
总之 , 新型混合酶的研制 , 有自己的技术 , 有 自己的创造 , 它的成功和应用 , 对促
进海藻生物工程的研究 、 海藻资源的开发利用 , 对推进 21 世纪海藻高新技术及其产业的
发展 , 将有重大的现实意义和战略性意义 。
参考文献
1 陈菊琦 . 粒花冠小月螺消化酶对海藻解壁作用的研究 . 厦门水产学院学报 , 1 9 9。 , 12 ( 2) : 21 ~ 26
2 陈菊琦 . 大瓶螺消化酶对海藻解壁作用的研究 . 厦门水产学院学报 , 19 91 , 13 ( 1 ) : 1一 5
3 陈菊琦 . 活体生物酶分离鹤鸽菜原生质体的研究 . 厦门水产学院学报 , 1 9 9 3 , 15 ( l ) : 1 ~ 7
4 陈菊琦 . 活体生物酶分离石花菜原生质体的研究 . 厦门水产学院学报 , 1 995 , 17 ( 2 ) : l 一 7
5 张全启 . 角义菜 (hC 胡 d 、 , a c e l l a ut ` H ol m ) 原生质体分离 、 培养与再生的研究 . 青岛海洋大学学报 , 1 9 9 1 , 21
( l )
:
5 2~ 6 2
6 周一红等 . 鹤鸽菜原生质体分离与培养的研究 . 生物工程学报 , 1 9 89 , 5 (4 〕 : 2 97 ~ 3 02
7 P o ln e 一 F u ll e r M i e r o o g a n i s m s a s d ig e s r o r s o f s e a w e e d e e ll s · H y d r o b i o l o g i a . 1 9 8 7 , 1 5 1 / 1 5 2 : 4 0 5 ~ 40 9
8 P o ln e 一 F u l l e r 以 g e s t i o n o f s e a w e e d b y t h e m a r i n e a m o e b a T r i e h o s p h a e r i u m . H y d r o b i o lo g i a , 1 9 90 , 2 0 4 / 2 0 5 : 4 0 9一
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第 2 期 新型混合酶分离海萝原生质体的研究
型试验— 细胞团的大容量培养 (或大量生产 ) , 创造必要的条件和必备的设施 。众所周知 , 在有机体内 , 每个细胞的生命活动 , 是受机体极其复杂的综合作用影响
和制约的 。 而海藻细胞一旦脱离机体 , 它们各 自的命运与前途将会怎样 ? 这又与何有关 ?
根据本实验中 , 各部位的分离细胞经培养所获得的 , 有显著差异的实验结果 , 可帮助我
们找到答案 。 那些不具色素 、 且原生质稀薄的髓部分离细胞经培养 , 仍然无分裂能力 , 有
的奄奄一息 ; 具有少量和较多量色素体的皮层部位分离细胞 , 则发展为有分裂能力和有
较强分裂能力的愈伤组织状细胞团 ; 那些充满色素体的表面分离细胞 , 则发展为有旺盛
分裂能力的多细胞团 。 据此笔者认为 : 细胞 自脱离有机体开始 , 则逐渐摆脱机体的复杂
影响和制约 , 从此 , 单离细胞的生命前途 , 或者说其潜在活力和细胞分裂能力 , 则唯独
与其内部行光合作用的色素体 (当然包含吸收光能的色素 ) 息息相关 。 对此 , 海藻生物
工程研究者必须预先能充分地了解 。 在实验中 , 只有紧紧把握色素体丰盈 、 藻色浓郁 、 原
生质浓厚的这部分个体 , 并加以科学利用 , 实验 才有成功的可能 。
该种新型混合酶目前还处于试制阶段 , 尚有一些值得继续深入探讨或有待改进之处 ,
然而 , 使用这一未臻完善的新型混合酶 , 已显示 出巨大的酶活力 , 并且有促进细胞分裂
和细胞团长时间存活等诸多优点 。 在海藻的酶法技术领域里 , 新型混合酶的问世 , 可以
说 , 较好地解决了使细胞壁组成成分复杂的经济红藻 , 行解壁的关键性技术难题 , 因而 ,
为经济海藻胞壁的酶解或原生质体的分离 , 奠定 了理论基础和技术基础 , 同时也为海藻
高新技术的发展 , 开拓了广阔的天地 。 本研究所采用的实验 方法和所获得的实验结果 , 将
再次为产胶红藻的企业化生产提供科学依据 。
总之 , 新型混合酶的研制 , 有自己的技术 , 有 自己的创造 , 它的成功和应用 , 对促
进海藻生物工程的研究 、 海藻资源的开发利用 , 对推进 21 世纪海藻高新技术及其产业的
发展 , 将有重大的现实意义和战略性意义 。
参考文献
1 陈菊琦 . 粒花冠小月螺消化酶对海藻解壁作用的研究 . 厦门水产学院学报 , 1 9 9。 , 12 ( 2) : 21 ~ 26
2 陈菊琦 . 大瓶螺消化酶对海藻解壁作用的研究 . 厦门水产学院学报 , 19 91 , 13 ( 1 ) : 1一 5
3 陈菊琦 . 活体生物酶分离鹤鸽菜原生质体的研究 . 厦门水产学院学报 , 1 9 9 3 , 15 ( l ) : 1 ~ 7
4 陈菊琦 . 活体生物酶分离石花菜原生质体的研究 . 厦门水产学院学报 , 1 995 , 17 ( 2 ) : l 一 7
5 张全启 . 角义菜 (hC 胡 d 、 , a c e l l a ut ` H ol m ) 原生质体分离 、 培养与再生的研究 . 青岛海洋大学学报 , 1 9 9 1 , 21
( l )
:
5 2~ 6 2
6 周一红等 . 鹤鸽菜原生质体分离与培养的研究 . 生物工程学报 , 1 9 89 , 5 (4 〕 : 2 97 ~ 3 02
7 P o ln e 一 F u ll e r M i e r o o g a n i s m s a s d ig e s r o r s o f s e a w e e d e e ll s · H y d r o b i o l o g i a . 1 9 8 7 , 1 5 1 / 1 5 2 : 4 0 5 ~ 40 9
8 P o ln e 一 F u l l e r 以 g e s t i o n o f s e a w e e d b y t h e m a r i n e a m o e b a T r i e h o s p h a e r i u m . H y d r o b i o lo g i a , 1 9 90 , 2 0 4 / 2 0 5 : 4 0 9一
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第 2期 新型混合酶分离海萝原生质体的研究 7
图版说明
1
. 海萝藻块酶解 h l的情形 2. 酶解 2. s h的藻块经盖片轻压细胞解离的情形
3
. 收集到的部分海萝原生质体 4 . 细胞收集后 1 h 6观察到海萝原生质体的自融
5
. 培养第 7 天观察到旺盛分裂中的多细胞团 7 . 培养 2天的淡黄色愈伤组织状细胞团
6
. 培养 3 2天具有粗状 “ 芽 ” 的绛紫色愈伤组织状细胞团
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e l tis Pr o to Plas t
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Ch e n J
u q i
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,
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,
X i a m e n 3 6 1 0 2 1 )
A b s t r a c t
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e l t i s p r o t o p l a s t b y s u e e e s s f u l ly u s i n g a n e w t y p e o f m i x e d e n z y m e ( 1
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e
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m i x e d l i q u id o f v ia b l e b i o l o g i e a l e n z y m e ) f o r t h e f i r s t t im e
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A f t e r G l o ioP
e l t i s fl ` cr a t a b e i n g
e n z y m i s e d f o r 2
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5 一 3 h r s , l a r g e a m o u n t s o f s u r v iv a l p r o t o p l a s t e a n b e e o l l e e t e d a n d t h e
s e l f一 f u s io n o f p r o t o p l a s t e a n a l s o b e o b s e r v e d . T h e p r o d u e t i o n r a t e 15 3 又 1 0 6 in d / 9 f r e s h
a l g a e ; t h e s u r v i v a l r a t e 15 6 5%
.
T h e d e n s e e e l l s o f p r o t o p l a s t
, a f t e r b e i n g e u l t i v a t e d
,
m a y
f o r m m u l t i e e l l u l a r m a s s e s o r e a l l u s t is s u e 一 l ik e e e l! m a s s e s . T h e r e s u l t o f t h i s o b s e r v a -
t i o n 15 f u n d a m e n t a l l y t h e s a m e a s t h a t o f t h e e x p e r im e n t i n e u l t i v a t i n g G
e l i d i“ m d i v a r i
-
c a t : ` m e e l l s
.
T h e n e w t y p e o f m i x e d e n z y m e 15 l o w i n p r i e e a n d s im p le i n p r o d u e t io n
,
w h i l e
,
i n u s e
,
i t e a n p r o m o t e e e l l d iv i t i o n w i t h t h e a d v a n t a g e o f a l o n g e r s u r v i v a l t im e o f
t h e e e l l u la r m a s s e s
.
T h e d e v e l o p m e n t a n d a p p li e a t i o n o f t h e n e w t y p e o f m i x e d e n z y m e
,
i n t h e s t u d i e s o n a lg a e b i o l o g i e a l e n g i n e e r i n g
,
i n t h e e x p lo i t a t i o n o f a l g a e r e s o u r e e s
, a n d
,
i n p u t t i n g f o r w a r d t h e d e v e l o p m e n t o f a l g a e s e ie n e e i n t h e 2 1 s t e e n t u r y
,
w i l l b e o f g r e a t
,
r e a l i s t i e a n d s t r a t e g ie s i g n i f i e a n e e
.
K e y w o r d s
: n e w t y p e o f m i x e d e n z y m e
,
G l
o ioP
e l t i s
,
p r o t o p l a s t
, s e l f一 f u s i o n , f u n o r a n