全 文 ：第 37 卷 第 4 期 河南大学学报(自然科学版) Vol.37　No.4
2007 年 7 月 Journal of H enan Univer sity(Natural Science) Jul.2007
阿尔泰狗哇花总黄酮和总皂苷定量分析方法研究
杨淑敏1 ,赵青岚1 ,李明静1 ,赵东保1 , 2＊ ,刘绣华1
(1.河南大学 化学化工学院 , 河南 开封 475001;　2.济源职业技术学院 ,河南 济源 454650)
　收稿日期:2006-09-16
　基金项目:河南省教育厅科技攻关项目(2006150032)
　作者简介:杨淑敏(1975-), 女 , 河南南阳人 , 硕士研究生 , 从事天然产物与药物化学方向研究.
　＊通讯联系人 E-mail:dongbaozhao@sina.com
摘　要:采用分光光度法 , 以槲皮素为对照品经 AlCl3-NaAc显色测定总黄酮含量 , 以齐墩果酸为对照品经香草
醛-高氯酸显色测定总皂苷含量.分析结果表明 , 原药材中总黄酮和总皂苷的含量分别为 17.79 和 40.86 mg/ g ,
线性范围分别为 30.6 ～ 112.2 μg(r =0.999 7)和 20 ～ 60 μg (r=0.999 7), 平均回收率分别为 97.7 %(RSD=
2.4 %, n=5)和 98.7 %(RSD=0.98 %, n=5).该法简便 、准确 、灵敏度高 、重现性好 , 也可用于阿尔泰狗哇花
总黄酮和总皂苷产品的含量测定.
关键词:阿尔泰狗哇花;总黄酮;总皂苷;紫外-可见分光光度法
中图分类号:O174.2 　　　文献标识码:A 文章编号:1003-4978(2007)04-0358-03
Determination of Total Flavnoids and Triterpenoidal Saponins
in Heteropappus altaicus (Willd.)Novopokr.by UV-Vis Spectroscopy
YANG Shu-min1 , ZHAO Qing-lan1 , LI Ming-jing 1 , ZHAO Dong-bao1 , 2＊ , LIU Xiu-hua1
(1 .College o f Chemistry and Chemical Engineering , Henan University , Henan Kai f eng 475001 , China;
2 .College o f J iyuan Vocational and Technical , H enan J i yuan 454650 , China)
Abstract:To de te rmine the to ta l flav onoids and trite rpenoidal saponins in H eteropap pus altaicus (Willd.)
Novopok r.by UV-Vis.Quercetin and o leanolic acid we re used as the refe rence compounds respectiv ely.The
calibra tions for total flavnoids and trite rpenoidal saponins showed good linearity o ver the ranges of 30.6 ～ 112.2 μg
(r=0.999 7)and 20～ 60 μg(r=0.999 7), respectiv ely.The recove ries w ere 97.7 %(RSD=2.4 %, n=5)fo r
total flavnoids and 98.7 %(RSD=0.98 %, n=5)for triterpenoida l saponins.The methods we re practical , rapid ,
accura te , and sensitive.We go t satisfactory re sults w hen determined flavno ids and triterpeno idal saponins in
Heteropap pus altaicus(Willd.)Novopokr.using the methods.
Key words:H eteropapp us altaicus(Willd.)Novopokr;to tal flavnoids;total trite rpenoidal saponins;UV-Vis
　　阿尔泰狗哇花(Heteropapp us al taicus(Willd.)Novopokr.)是一种传统蒙药 , 主要分布于东北 、华北 、
西北及四川 、湖北等地 ,在河南省焦作太行山区资源也很丰富 , 它能清热降火 、排脓 、润肺止咳[ 1] , 主要含精
油[ 2] 、黄酮[ 3-4] 和萜类[ 5-7]等有效成分.近年来的药理研究证实 ,阿尔泰狗哇花皂苷具有抗真菌 、抗肿瘤和免
疫调节[ 8-10] 等药理活性.本文通过优化显色条件及样品处理方法等 ,首次建立了快速 、准确测定阿尔泰狗哇
花中总黄酮 、总皂苷含量的分光光度方法 , 为评价该药用植物的质量和开发利用提供了科学依据.
1　仪器与试剂
Thermo Elect ron UV-540紫外分光光度仪;7550紫外-可见分光光度计(上海分析仪器厂).槲皮素(中
国药品生物制品检定所);齐墩果酸(中国药品生物制品检定所);所用试剂均为分析纯.阿尔泰狗哇花 ,
2004年 9月采自河南焦作 , 经焦作师范高等专科学校辛泽华教授鉴定 ,在自然通风条件下阴干 、粉碎 、备用.
2　实验方法
2.1　样品处理
DOI :10.15991/j.cnki.411100.2007.04.019
杨淑敏 , 等:阿尔泰狗哇花总黄酮和总皂苷定量分析方法研究 359　
2.1.1　制备总黄酮样品液
精确称取粉碎后的样品约 1.0 g(n=6), 置于索氏提取器中 , 用 90 mL 石油醚脱脂 ,脱脂粉末用 p=
90%乙醇 100 mL 提取至提取液无色 , 得乙醇提取液 , 蒸干 , 用甲醇溶解转移至 50 mL 容量瓶中 , 定容 , 摇
匀 , 作为总黄酮样品液 , 备用.
2.1.2　制备总皂苷样品液
精确称取粉碎后的样品约 1.0 g(平行 6份), 置于索氏提取器中 , 用 p=90%乙醇 100 mL 提取至提取
液无色 , 得乙醇提取液 , 蒸干 , 用约30 mL 蒸馏水溶解 , 水饱和正丁醇萃取 3次 , 每次 30 mL , 合并正丁醇
相 , 蒸干 , 用甲醇溶解转移至 50 mL 容量瓶中 , 定容 , 摇匀 , 作为总皂苷样品液 , 备用.
2.2　含量测定
以槲皮素为对照品经 A lC l3-NaAc显色测定总黄酮含量;以齐墩果酸为对照品经香草醛-高氯酸显色测
定总皂苷含量.
3　结果与讨论
3.1　条件选择
3.1.1　样品前处理
采用不同的前处理方法(先脱脂和直接提取)进行样品制备 , 结果显示 , 色素和脂溶性物质干扰总黄酮
测定 , 必须先用乙醚 、石油醚等溶剂提取除去后 , 再用醇提取;色素和脂溶性物质不影响总皂苷的测定 , 故
直接用乙醇提取 , 再用正丁醇纯化即可.
3.1.2　测定波长的选择
总黄酮:对照品槲皮素及总黄酮样品液与显色剂 AlCl3-NaAc 反应 , 吸收曲线上最大吸收波长在
272 nm.总皂苷:对照品齐墩果酸及总皂苷样品液与显色剂香草醛-高氯酸反应 , 吸收曲线上最大吸收波长
在 550 nm.因此测定波长 , 总黄酮选择 272 nm;总皂苷选择 550 nm.
3.1.3　显色条件的选择
分别对1 %AlCl3-MeOH 加入量 、1 mol/ L NaAc-MeOH 加入量 、显色温度 、显色时间 、显色稳定性进行
考察 , 最终确定分光光度法测定阿尔泰狗哇花总黄酮含量的条件为:用吸量管吸取样品液 0.10 mL 于
10 mL比色管中 , 加 1 %A lCl3-MeOH 3.50 mL 和 1 mol/ L NaAc-MeOH 1.00 mL , 用甲醇定容至 10 mL ,
摇匀 , 放置 10 min , 90 min内于 272 nm 处测定吸光度.
分别对显色剂 5 %香草醛-冰醋酸加入量 、高氯酸加入量 、显色温度 、显色时间 、显色稳定性进行考察 ,
最终确定可见分光光度法测定阿尔泰狗哇花总三萜皂苷含量的条件为:用吸量管吸取样品液 0.10 mL 于
10 mL 比色管中 , 70℃水浴中挥去溶剂 , 加 5 %香草醛-冰醋酸 0.20 mL 和高氯酸 1.00 mL , 摇匀 , 于 60℃
水浴中保温 25 min , 立即取出流水冷却 , 加冰醋酸 5 mL , 摇匀 , 90 min内于 550 nm 处测定吸光度.
3.2　线性关系考察
3.2.1　总黄酮
吸取槲皮素溶液(0.204 0 mg/mL)0.15 , 0.20 , 0.25 , 0.30 , 0.35 , 0.40 , 0.45 , 0.50 , 0.55 mL 于
10 mL比色管中 , 按“3.1.3”总黄酮含量测定条件显色并测定吸光度.以吸光度(Y)为纵坐标 , 取样量(X)
为横坐标 , 绘制标准曲线 , 回归方程为:Y =0.002 01+7.122 X , r=0.999 7 , 槲皮素含量在 30.6 ～ 112.2
μg 范围内线性关系良好.
3.2.2　总皂苷
吸取齐墩果酸溶液(0.200 0 mg ·mL-1)0.10 , 0.15 , 0.20 , 0.25 , 0.30 mL 于 10 mL 比色管中 ,按
“3.1.3”总皂苷含量测定条件显色并测定吸光度.以吸光度(Y)为纵坐标 , 取样量(X)为横坐标 , 绘制标准
曲线 , 回归方程为:Y =-0.011 2+10.53 X , r=0.999 7 , 齐墩果酸含量在 20 ～ 60 μg 范围内线性关系良
好.
标准曲线的校正:阿尔泰狗哇花全草的主要皂苷成分为狗哇花皂苷(Ⅰ)[ 5] , 为齐墩果烷型三萜皂苷 ,
因此本文以齐墩果酸为对照品制备标准曲线并按下式计算总皂苷含量:S t(mg/g)=2.648(Y +0.011 2)
Vs/(10.53×Ws)(Vs-样品液(mL), Ws-样品重(g), 2.648为狗哇花皂苷(Ⅰ)相对于齐墩果酸分子量的倍
360　 河南大学学报(自然科学版), 2007 年 , 第 37 卷第 4 期
数).
3.3　精密度实验
表 1　含量测定结果
Tab.1　Determination results of the content
样品 总黄酮含量/(mg/g)
总皂苷含量
/(mg/ g)
1 17.87 40.95
2 17.95 40.60
3 18.37 42.21
4 18.27 38.41
5 17.08 42.27
6 17.17 40.56
均值/(mg/g) 17.79 40.86
RSD/ % 3.1 3.4
　　精确吸取总黄酮和总皂苷样品液 0.1 mL , 分别按
“3.2.1” 、“3.2.2”项下操作并测定吸光度 , 结果 RSD分别
为 2.8 %和 0.91 %(n=5).
3.4　样品分析
精确吸取总黄酮和总皂苷样品液 0.1 mL , 分别按
“3.2.1” 、“3.2.2”项下操作测定吸光度 , 并计算原药材中
总黄酮 、总皂苷含量.结果如表 1.
　　由表 1 可见 , 每克阿尔泰狗哇花全草中含总黄酮
17.79 mg(干重), 含总皂苷 40.86 mg(干重).
3.5　加样回收实验
精密称取阿尔泰狗哇花粗粉 10份 , 每份约 1.0 g , 每 5份一组.一组加入一定量的槲皮素对照品溶液 ,
按“2.1”项下操作 , 制备总黄酮加样回收溶液;一组加入一定量的齐墩果酸对照品溶液 , 按“2.1”项下操作 ,
制备总皂苷加样回收溶液.分别按“3.4”样品分析项下操作测定吸光度 , 计算加样回收率 , 结果见表 2.总
黄酮和总皂苷的平均回收率分别为:97.7 %(RSD =2.4 %)和 98.7 %(RSD=0.98 %).
表 2　回收率实验结果(n=5)
Tab.2　The results o f recove ry test(n=5)
总黄酮
加入量/μg 测得量/μg 回收率/ %
总皂苷
加入量/μg 测得量/μg 回收率/ %
40.8 40.6 99.5 10.0 9.86 98.6
42.8 43.4 101.4 10.0 9.87 98.7
42.8 42.3 98.8 12.0 11.95 99.6
44.9 42.4 94.5 12.0 11.66 97.2
4　结论
采用分光光度法测定了阿尔泰狗哇花中总黄酮和总皂苷的含量 , 结果表明:本法简便 、准确 、灵敏度高 、
重现性好.该研究结果为阿尔泰狗哇花的综合开发利用提供了科学依据.
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责任编辑:马同森