全 文 ：高效液相色谱法测定滇白珠糖浆中水杨酸含量
贵州省遵义三四一七医院药械科(563003) 冯宝琦
贵州省同济堂制药股份有限公司技术中心(贵阳 550002) 周 宁
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:1000-744X(2006)08-0732-01
滇白珠又名透骨香 , 为杜鹃花科植物滇白珠(Gaultheria
yunnanensis(Franch)Rehd)的根 , 具清热解毒 、活血祛瘀 、祛
风除湿 、降气平喘的作用[ 1] ,含有机酸 、苷类 、黄酮类 、木脂素
类等多种化合物[ 2] ,其中水杨酸(salicy lic acid , C7H 6O 3)具有抑菌 、镇痛 、抗炎等作用。由于一定剂量的水杨酸通过消化
道吸收 , 可产生刺激性毒副作用[ 3] , 因此应确切掌握滇白珠
糖浆中水杨酸的含量。中国药典测定阿司匹林中游离水杨
酸的限量采用滴定法或比色法 ,这些方法不适于测定中药制
剂中的水杨酸含量 ,为此建立高效液相色谱法测定滇白珠糖
浆中水杨酸的含量。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 、样品 、试剂 Agilent 1100 高效液相色谱仪(在线
脱气机 、二元梯度泵 、自动进样器 、柱温箱 、二极管阵列检测
器 、化学工作站等);滇白珠糖浆由贵州同济堂药业有限公司
提供;水杨酸对照品(0106-9702 , 供含量测定用 , 中国药品生
物制品检定所);甲醇色谱纯 ,乙酸乙酯为分析纯 , 水为纯净
水。
1.2 色谱条件 Hyper sil ODS(5 μm , 250 mm×4.0 mm i.
d., Agilent)色谱柱 , 甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)为流动
相 ,流速 0.7 ml/min , 柱温35 ℃, 检测波长 300 nm。在上述
色谱条件下 ,水杨酸与其他成分分离良好 , 理论板数以水杨
酸峰计算不低于5 000 ,分离度大于 1.5。
2 实验方法和结果
2.1 供试品溶液的制备 精密量取本品 10 ml , 置 100 ml
圆底烧瓶中 ,加入乙酸乙酯回流提取 3 次 ,每次 25 ml , 提取
0.5 小时 , 放冷 ,分取乙酸乙酯层 , 合并乙酸乙酯 ,回收乙酸乙
酯至干 ,残留物用甲醇溶解 , 并定容至 5 ml , 0.45 μm 微孔滤
膜滤过 ,取续滤液即得。
2.2 空白对照溶液的制备 根据处方及制法制备缺滇白珠
药材的空白对照溶液。
2.3 标准品溶液的配制及线性关系的考察 精密称取对照
品水杨酸适量 ,用甲醇溶解 , 摇匀 ,制成 1 ml含 4.21 , 10.52 ,
21.04 , 31.56 , 42.05 , 52.60 μg 的对照品深液 ,精密吸取对照
品溶液 10 μl依次进样。记录色谱图。以水杨酸的进样浓度(μg/ ml)为横坐际 , 峰面积为纵坐标进行线性回归 , 得线性回
归方程Y =19.630 807 , r=0.9998 , 表明水杨酸进样浓度在
4.21～ 52.60 μg/ ml间线性关系良好。
2.4 精密度试验 精密量取本品 10 m l ,按供试品溶液的制
备项制备供试液 ,连续进样 5 次 , 记录色谱图。 5次进样测得
水杨酸含量平均结果为 8.36 μg/ ml , RSD=0.16%, 说明精
密度良好。
2.5 稳定性试验 精密量取本品 10 ml ,按供试品溶液的制
备项制备供试液, 进样5 次 ,时间间隔 0、2 , 4 , 6 , 8小时 ,记录色
谱图 , 水杨酸含量平均值为8.36 μg/ ml , RSD=0.19%, 结果表
明本试验条件稳定。
2.6 重复性试验 取样品 5 份 , 各精密量取 10 ml , 按供试
品溶液的制备项制备供试液 ,进样 , 记录色谱图。 5 份样品水
杨酸含量平均值为 8.49 μg/ ml , RSD=0.53%, 说明重复性
良好。
2.7 加样回收率试验 取样品 5 份 , 各精密量取 5 ml ,于每
份中加入适量对照品 , 按供试品溶液的制备项制备供试液 ,
进样 , 记录色谱图 , 计算水杨酸回收率 , 平均回收率为
98.55%, RSD=1.23%,表明回收良好。
2.8 样品测定 精密吸取供试品溶液 10 μl , 按上述色谱条
件测定 ,以外标一点法计算本品每毫升含滇白珠以水杨酸计
的含量 ,见表 1。
表 1 多批滇白珠糖浆中水杨酸的含量(μg/m l)
批号 含量(μg/m l) RSD(%)
20040103 8.49 0.76
20040319 7.96 0.85
20040506 5.25 0.89
20040721 7.37 1.01
20040910 8.11 0.76
3 讨 论
3.1 文献[ 4]报道滇白珠通过消化道吸收时 , 高浓度用药对
胃粘膜 、组织 、血管有刺激作用 , 低浓度无明显改变 , 可能与
滇白珠含水杨酸类化合物有关。 本文研究建立的方法对多
批滇白珠糖浆进行水杨酸含量测定(5.25 ～ 8.49 μg/ ml), 远
远低于中国药典对阿司匹林中游离水杨酸限量不高于 0.1%
的规定 ,据此初步说明滇白珠糖浆内服较为安全。
3.2 提取条件的选择 据水杨酸易溶于甲醇 、乙醇 、乙醚 ,
可溶于乙酸乙酯 ,微溶于水的特性 , 选择乙酸乙酯为提取溶
剂 ,比较了二种提取方法(超声提取和回流提取)和不同提取
时间(0.5 , 1.0 h)提取效果。结果表明滇白珠糖浆加入乙酸
乙酯回流提取 3 次 ,每次 25 m l ,提取 0.5小时 , 较为适宜。
3.3 分离条件的选择 对水杨酸的分离多选用十八烷基硅
烷键合硅胶为填充剂 , 本文选择了三种色谱柱:(1)Hypersil
ODS(5μm , 4.0 ×250 mm , Ag ilent)色谱柱 , (2)Hypersil
ODS2(5 μm , 5×200 mm , 大连依利特)色谱柱 , (3)Diamon-
silTM(钻石)HPLC C18(5 μm , 4.6×250 mm ,迪马公司)色谱
柱;及四个流动相:(1)甲醇-0.1%磷酸(30∶70);(2)甲醇-0.20%冰醋酸(50∶50);(3)乙腈-0.1%磷酸(50∶50);
(4)甲醇-0.1%磷酸(50∶50)进行系统适用性试验。试验
结果表明在以下色谱条件下:Hyper sil ODS(5 μm , 4.0×250
mm , Agilent)为色谱柱 , 甲醇-0.1%磷酸(50∶50)为流动
相 ,流速 0.7 ml/ min ,柱温 35 ℃, 检测波长 300 nm , 供试品
中水杨酸得到较好分离。
3.4 检测波长的确定 对水杨酸甲醇溶液于 190 ～ 400 nm
波长下扫描 ,最大吸收波长为 203 nm , 特征吸收为 236 nm
和 306 nm。在 300 nm 波长处水杨酸吸收峰灵敏度较高 , 其
他色谱峰干扰较小 , 水杨酸色谱峰的分离最为理想 , 故选用
300 nm 作为检测波长。
参考文献
1 贵州省药品监督管理局.贵州省中药材 、民族药材质量标准(2003
年版)[ S] .贵阳:贵州科技出版社 , 2003.308.
2 张治针 ,果得安 , 小池一男 ,等.滇白珠抗菌抗炎和镇痛活性的实
验研究[ J] .西北药学杂志 , 1999 , 14(2):60.
3 高锐 , 张艳秋.水杨酸磷酸酯的药理学研究[ J] .黑龙江医药 ,
2002 , 15(5):379.
4 马小军 ,赵玲.滇白珠及其同属药用植物研究进展[ J] .中草药 ,
2001 , 32(10):945.
·732· Guizhou Medical Journal , 2006 , Vol.30 , No.8