全 文 ：高效液相色谱法测定滇白珠植物中滇白珠甙
赵玉娟　韩振泰　王文芝＊ 马小军　郑俊华
(中国林科院森林生态环境与保护研究所 ,北京 100091) (北京大学药学院 ,北京 100083)
摘　要　提出反相高效液相色谱法测定滇白珠甙含量的方法。反相 Kromasil C18柱 , 甲醇-乙腈-水(V V)=
25∶5∶70为流动相 ,紫外 220 nm检测 , 外标法定量。线性范围为 0.005～ 0.800 g L , r=0.9997 ～ 0.999 , 方法回
收率和标准偏差分别在 98.60%～ 102.90%和 0.58%～ 0.69%之间(n =6), 3 种甙的检测限在 0.01 ～ 0.02
mg L 之间。本方法快速 、准确 、重现性好 , 适用于工艺生产中质量控制。
关键词　高效液相色谱法 ,滇白珠 , 滇白珠甙
　2001-10-27收稿;2002-03-07接受
1　引　　言
滇白珠为杜鹃花科植物 Gaultheria yunnanensis(Franch.)Rehd.的根 ,广泛分布于我国西南地区和华
南地区 , 《中药大辞典》和《中国民族药志》均有记载 。它具有祛风除湿 、活血化瘀 、通络止痛 、清热解毒等
功效 ,用于治疗风湿性关节炎 、关节肿痛 、跌打损伤 、慢性气管炎和风寒感冒等症[ 1 , 2] 。北京医科大学张
治针博士报道[ 3] ,从滇白珠植物中提取并鉴定近 40个化合物 ,其中滇白珠甙是最重要的药效成分。有
关滇白珠甙的 HPLC分离定量尚未见报道 ,本文提出采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定滇白
珠植物中 3种主要滇白珠甙的含量 ,方法简便 、快速 、准确 。3种滇白珠甙分别以 D1 、D2 、D3 表示 ,结构
式分别为:
2　实验部分
2.1　仪器与试剂
Waters 244型高效液相色谱仪(沃特斯公司),包括 UV 486紫外检测器 、M 510泵 、Rheodyne进样器 、
M 730数据处理机。D1 、D2 和 D3 标准品由北京大学药学院郑俊华教授提供 。甲醇(北京化工厂)为优级
纯并经0.5μm滤膜过滤;水为重蒸水并经 0.45 μm滤膜过滤;磷酸(北京化工厂)为优级纯 。
2.2　标准样品和样品的配制
标样的制备:精确称取D1 、D2和 D3 标准各 2.5 mg 于 25 mL容量瓶中 ,用 25%甲醇定容至刻度 ,得
到混合标准溶液(浓度为 0.1 g L)。样品的制备:将滇白珠植物样品粉碎 ,过孔径 0.30 mm 筛。称取
2.00 g 样品于 250 mL具塞锥形瓶中 ,加入100 mL 甲醇-水(V V)为3∶7的混合液 ,在 90℃水浴回流提取
2 h ,冷却至室温后 ,定容过滤 ,待上机。
2.3　色谱条件
Kromasil C18柱(5 μm , 3.9×250 mm);流动相为甲醇-乙腈-水(25∶5∶70 , V V , 用 H3PO4 调 pH 至
第 30卷
2002 年 9 月　　　　　　　　　　　
分析化学(FENXI HUAXUE)　研究简报
Chinese Journal of Analytical Chemistry
　　　　　　　　　　　 第 9 期
1109～ 1111
3.5);流速 0.7 mL min;检测波长220 nm;灵敏度为 0.1AUFS;柱温为室温 。
3　结果与讨论
3.1　流动相的选择
滇白珠甙分子结构中均含多个甲氧基(CH3O-)和羟基(-OH),应当溶于甲醇和水 ,不同的甙中甲
氧基(CH3O-)和羟基(-OH)个数不同 ,分子极性和空间体积不同 ,在 C18柱上保留时间不同 ,调整流动
相中甲醇的比例必定可使三者分离 。经反复实验 ,当流动相为 25%CH3OH-75%H2O 时 ,可使三者达到
基线分离 。在流动相中加入少量乙腈并用磷酸调 pH≈3.5 ,峰形变窄 ,对称性极好 。
3.2　提取溶剂的选择
实验中发现 ,用纯甲醇作为溶剂来提取滇白珠甙 D1 、D2 和 D3 ,效果不理想;提取的样品通过 HPLC
分析 ,杂峰多 ,而 D1 、D2和 D3 峰形偏宽 ,对称性差;根据 D1 、D2和 D3 可溶于水的特性 ,改用水为溶剂 ,效
果也不好。从HPLC上看 ,杂峰少多了 ,但 D1 、D2 和 D3 峰高也变矮 ,计算结果 ,3种滇白珠甙含量偏低 ,
显然是提取不完全;最后 ,采用和流动相比例大致相似的溶剂 ,即 30%CH3OH-70%H2O为溶剂回流提取
效果最佳(图 1)。
解释如下:D1 、D2和 D3 分子结构中都含有两个或三个 CH3O-,根据相似者相溶的原理 ,CH3OH 应
该是最理想的提取溶剂。但由于 CH3OH分子极性大 ,样品中溶于甲醇的杂质也提取出来 ,因而杂峰多 ,
影响分离 。再看D1 、D2和 D3都是糖甙类物质 ,能溶于H2O ,也可选用H2O为溶剂提取 ,但由于D1 、D2和
D3 分子中含有庞大的有机基团 ,在水中溶解度不够大 ,造成提取不完全 ,所以测定结果含量偏低。用
30%CH3OH-70%H2O为溶剂提取 ,弥补了上述溶剂提取的缺点 ,是理想的选择 。
3.3　检测波长选择
从D1 、D2和 D3 分子结构看 ,均有共轭体系 ,可选用紫外 254 nm 、280 nm检测 。实际检测时 ,发现这
两种波长下样品杂质峰甚多 ,影响定量 。考虑到 3种甙在紫外 220 nm 都有高吸收值 ,而采用 220 nm检
测 ,一些杂质峰在 220 nm 则不被检测 ,使分离定量更为可靠。
3.4　标准曲线及线性范围
将标准混合液(浓度为 0.1 g L)配制成 0.005 、0.010 、0.020 、0.040 、0.080 、0.100 g L ,按选定色谱条
件进样 5 μL ,以进样量与峰面积作标准曲线 ,得到 D1 、D2 和 D3 线性方程及相关系数 。在 0.005 ～ 0.100
g L之间 3种化合物线性关系良好(见表 1)。
表 1　3种滇白珠甙线性方程 Y=A+BX 及相关系数
Table 1　The linear equation and correlation coefficient
滇白珠甙
Gaulthersides
线性方程 Linear equation
A B
相关系数(r)
Correlation coeffi cient
D1 13.30 538.52 0.9997
D2 24.56 578.91 0.9999
D3 81.70 503.11 0.9999
3.5　方法回收率 、精密度及检测限测定
取8份等量样品 ,在其中 4份加入一定量混合标准溶液 ,按照 2.2中样品溶液制备方法提取后测
定 ,计算 D1 、D2 和 D3 的回收率(见表 2)。将混合标准溶液(浓度为 0.1 g L)连续进样 6次 ,每次进样 5
μL ,计算 D1 、D2和 D3的相对标准偏差 RSD值(见表 2)。在选定的色谱条件下 ,以噪声的 3倍峰高所对
应的滇白珠甙含量为最低检测限 ,计算出3种成分的最小检出量(见表 2)。
3.6　样品的测定
在选定的色谱条件下 ,测定云南省不同地区滇白珠根 、茎 、叶的滇白珠甙含量。从实验结果发现 ,
D1 、D2和 D3 在根中含量高于茎 、叶 ,这也就是滇白珠根入药的道理 。我们在测定中还发现 ,不同地区滇
白珠中滇白珠甙的含量差别很大。
1110　　 分 析 化 学 第 30卷
图 1　标准品(a)及样品(b)色谱图
Fig.1　Chromatogram of standard(a)and sample(b)
1.D3;2.D1 ;3.D 2。
表 2　方法回收率 、精密度和检测限
Table 2　The recovery , precision and detection limit
滇白珠甙
Gaulthersides
回收率(%)
Recovery
相对标准偏差(%)
RSD
检测限(mg L)
Detection limit
D1 98.6 0.66 0.014
D2 102.0 0.58 0.020
D3 99.5 0.69 0.013
References
1　Ding Jinghe(丁景和).Medical Botany(药用植物学).Shanghai(上海):Shanghai Science and Technology Press(上海科学技术
出版社), 1996
2　Traditional Chinese Medicine Dictionary(中药大辞典)(Vol.1):1879～ 1880
3　Zhang Zhizhen(张治针),Guo Dean(果德安), Li Changling(李长龄).Chinese Traditional and Herbal Drugs(中草药).1998 , 20
(2):508～ 511
Determination of Gaulthersides(D1 , D2 and D3)in Yunnan Wintergreen
(Gaultheria Yunnansis)by Reversed Phase High Performance
Liquid Chromatography
Zhao Yujuan , Han Zhentai , Wang Wenzhi ＊
(The Research Institute of Forest Ecology , Environment and Protection , Chinese Academy of Forestry , Beijing 100091)
Ma Xiaojun , Zheng Junhua
(School of Pharmaceutical Sciences , Peking University , Beijing 100083)
Abstract　The Gaulteresides (D1 , D2 and D3)in Yunnan Wintergreen (Gaultheria yunnansis)extracts were
determined by reversed phase high performance liquid chromatography.The Waters Kromasil C18 column (5 μm ,
3.9×250 mm)was used and column temperature was 25℃, the detection wavelength was 220 nm , the mobile
phase was 25%(V V)methanol 5%(V V)acetonitrile , 70%(V V)H2O.The linear range was 0.005 ～ 0.800
g L , r=0.9997 ～ 0.9999;recovery was 98.6%～ 102.9% and RSD was 0.6%～ 0.7%(n=6).
Keywords　High performance liquid chromatography , Gaultheria yunnansis , gaulthersides
(Received 27 October 2001;accepted 7 March 2002)
1111第 9期 赵玉娟等:高效液相色谱法测定滇白珠植物中滇白珠甙