全 文 ：［收稿日期］ 20130312(025)
［基金项目］ 贵州省中药现代化项目(20075016) ;贵州省中药现代化项目(20115081)
［第一作者］ 陈青凤，硕士研究生，从事中药质量标准及药物分析研究，Tel:18798000075，E-mail:007doing@ sina． com
［通讯作者］ * 李勇军，硕士，教授，从事中药工艺、质量控制及天然产物研究，Tel:0851-6908468，E-mail:liyongjun026@ 126． com
一测多评法测定透骨香中儿茶素、
白珠树苷、滇白珠苷 A的含量
陈青凤1，刘佳1，乔里1，刘丽娜1，2，龙庆德1，王爱民1，2，李勇军1，2*
( 1. 贵阳医学院药学院 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵阳 550004;
2. 贵州省药物制剂重点实验室，贵阳 550004)
［摘要］ 目的:建立透骨香中儿茶素、白珠树苷、滇白珠苷 A的一测多评含量测定方法。方法:采用高效液相色谱，以中
药透骨香为研究对象，以儿茶素为内参物，建立其与白珠树苷、滇白珠苷 A的相对校正因子，并进行含量测定，实现一测多评。
同时采用外标法测定 28 批透骨香中儿茶素、白珠树苷、滇白珠苷 A 的含量，验证一测多评法的准确性。结果:建立的校正因
子重复性良好，采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间无显著差异。结论:以外标法测定儿茶素，利用相对校正因
子实现对白珠树苷和滇白珠苷 A测定是准确的、可行的，一测多评法可以用于特定的不同类型成分间的测定。
［关键词］ 一测多评法;相对校正因子;高效液相色谱;透骨香
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)18-0126-05
［doi］ 10． 11653 /syfj2013180126
Simultaneous Quantitative Analysis of Three Components in
Gaultheria yunnanensis by Multi-Components Assay by Single Marker
CHEN Qing-feng1，LIU Jia1，QIAO Li1，LIU Li-na1，2，LONG Qing-de1，WANG Ai-ming1，2，LI Yong-jun1，2*
(1. School of Pharmacy，Guiyang Medical College，Engineering Ｒesearch Center for the Development and
Application of Ethnic Medicines and Traditional Chinese Medicine，Ministry of Education，Guiyang 550004，China;
2. Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics in Guizhou Province，Guiyang 550004，China)
［Abstract］ Objective:To develop a method of quantitative analysis of multi-components by single marker
(QAMS)for simultaneously determining catechin，gaultherin and gaultheroside A in G． yunnanensis． Method:A
HPLC method was developed as QAMS to determine the three principal components in Gaultheria yunnanensis．
Catechin was selected as the internal reference substance，and 2 relative correction factors (ＲCFs)to catechin were
calculated． The method was evaluated by comparison of the quantitative results between external standard method
and QAMS method． Ｒesult:No siginificant differences between the quantitative results of QAMS method and
external standard method were observed． Conclusion:It is feasible and suitable to determine catechin，gaultherin
and gaultheroside A in Gaultheria yunnanensis by QAMS，and this method can be used for a certain different types
of compounds．
［Key words］ quantitative analysis multi-components by single marker (QAMS) ;related correction factor
(ＲCF) ;HPLC;Gaultheria yunnanensis
透骨香为杜鹃花科植物滇白珠的干燥全株，具 有清热解毒、活血化瘀、祛风除湿的功效，用于风湿
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第 19 卷第 18 期
2013 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 18
Sep．，2013
痹症、眩晕、咳嗽哮喘、跌扑肿痛等症［1］。文献［2-5］
报道透骨香含有挥发油、有机酸、三萜类、黄酮类、香
豆素类、木脂素类等多种化学成分，其正丁醇提取部
位有较好的抗风湿性关节炎和镇痛作用［6-7］。为有
效控制透骨香药材质量，作者对正丁醇部位的主要
化学成分进行分析、分离制备研究，从中分离得到具
有代表性和专属性的活性成分儿茶素［8-9］、白珠树
苷［10］、滇白珠苷 A［6］。其中儿茶素对照品廉价且较
易得到，而白珠树苷，滇白珠苷 A 不易分离纯化获
得，本实验以儿茶素对照品为内参物，建立透骨香中
该成分与其余待测成分白珠树苷及滇白珠苷 A 的
相对校正因子，计算出其余成分的含量，实现多成分
的同步测定，为透骨香药材的质量控制及评价提供
一种新的技术手段。
1 材料
岛津 Prominenece UFLC高效液相色谱仪，SPD-
20A检测器，LC solution 工作站(日本岛津公司) ，
Agilent 1100 型高效液相色谱仪，阵列二极管检测
器，Chemstation 工作站(美国安捷伦公司) ，Agilent
Eclipse XDB-C18色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，
Waters Symmetry C18(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，
Waters XBriage C18(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，AE
240 型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有
限公司) ，CQ-250A-ST 型超声波清洗机(上海跃进
医用光学器械厂)。
儿茶素、白珠树苷、滇白珠苷 A 对照品(批号依
次为 20111125，20111216，20111203，本实验室自制，
经 HPLC 检查，用峰面积归一化法计算，纯度 ＞
98%) ;甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为
分析纯;透骨香药材采购于贵阳市三桥药材市场，经
贵阳医学院生药教研室龙庆德副教授鉴定为杜鹃花
科植物滇白珠 Gaultheria yunnanensis (Franch．)
Ｒehd．的干燥根与茎。
2 方法与结果
2. 1 方法学考察
2. 1. 1 色谱条件 Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱
(4. 6 mm ×150 mm，5 μm) ，柱温 35 ℃，流速 1. 0 mL
·min －1，检测波长 230 nm，流动相甲醇(A)-0. 1%磷
酸水(B) ，梯度洗脱 0 ～ 30 min，20% ～26%A。上述
色谱条件下，各组分分离度良好。色谱图见图 1。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 精密称定儿茶素、白珠
树苷及滇白珠苷 A 对照品 5. 05，15. 09，7. 68 mg，分
别置于 5 mL量瓶中，加甲醇溶液至刻度，制得各单一
对照品溶液，分别精密吸取 2 mL置于 10 mL量瓶中，
1. 儿茶素;2. 白珠树苷;3. 滇白珠苷 A
图 1 对照品(A)和样品(B)的 HPLC
加甲醇溶液至刻度，混合稀释制成每 1 mL 分别含儿
茶素0. 202 mg，白珠树苷0. 604 mg，滇白珠苷A 0. 307
mg的混合对照品溶液保存于 4 ℃冰箱，备用。
2. 1. 3 供试品溶液的制备 取透骨香粉末(过 40
目筛)约 1. 0 g，精密称定，置 100 mL具塞锥形瓶中，
精密加入甲醇溶液 50 mL，称重，超声 40 min，放冷，
用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过。精密吸取滤液
25 mL通过聚酰胺柱(聚酰胺 30 ～ 60 目，1 g，内径
为 1. 2 cm) ，用乙醇 100 mL 洗脱，收集流穿液与乙
醇洗脱液，水浴蒸干，残渣用甲醇适量溶解，转移至
5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，10 000 r·
min －1离心 10 min，取上清液，即得。
2. 1. 4 检测波长的选择 分别将儿茶素、白珠树苷、
滇白珠苷 A 进行全波长扫描，结果儿茶素在 206，
280 nm，白珠树苷在 206，230，286 nm，滇白珠苷 A在
208，277 nm有最大吸收。3种成分均在 220 ～240 nm
有较强吸收的光谱信息，为保证各成分都具有适宜的
灵敏度，因此选择 230 nm作为检测波长。
2. 1. 5 线性关系考察 精密吸取 2. 1. 2 混合对照
品溶液 1，2，4，8，16，20 μL，进样分析，每个体积进
样 3 次，取平均值。按 2. 1. 1 项色谱条件测定，记录
峰面积，以进样量(X，μg)为横坐标，以平均峰面积
(Y)为纵坐标，得儿茶素、白珠树苷、滇白珠苷 A 的
回归方程，结果表明各化合物在相应范围内线性关
系良好，见表 1。
2. 1. 6 校正因子计算 在上述色谱条件下，分别测
定不同进样体积时各成分的峰面积，根据相对校正
因子计算公式［11-12］，分别计算其他成分白珠树苷、
滇白珠苷 A 与内参物儿茶素的相对校正因子。结
·721·
陈青凤，等:一测多评法测定透骨香中儿茶素、白珠树苷、滇白珠苷 A的含量
表 1 3 种成分的线性关系和范围
化学成分 回归方程 r 线性范围 /μg
儿茶素 Y = 2. 00 × 106X + 1. 88 × 104 1. 000 0 0. 202 ～ 4. 04
白珠树苷 Y = 5. 70 × 105X － 2. 52 × 103 0. 999 9 0. 604 ～ 12. 08
滇白珠苷 A Y = 1. 00 × 106X － 1. 78 × 103 0. 999 9 0. 307 ～ 6. 14
果见表 2。
2. 1. 7 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液
10 μL连续进样 6 次，记录峰面积，结果儿茶素、白珠
树苷、滇白珠苷 A 峰面积的 ＲSD 分别为 0. 44%，
0. 53%，0. 58%，表明仪器的精密度良好。
2. 1. 8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10
μL，分别于配制后的 0，2，4，8，12，24 h进样分析，记
录峰面积，儿茶素、白珠树苷、滇白珠苷 A在 24 h内
峰面积的 ＲSD分别为 1. 5%，0. 42%，0. 39%。表明
处理后的供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 1. 9 重复性试验 称取同一批透骨香药材粉末
(过 40 目筛)约 1 g，6 份，精密称定，按 2. 1. 3 方法
制备供试品溶液，测定，结果儿茶素、白珠树苷、滇白
珠苷 A 的平均质量分数分别为 0. 039%，0. 33%，
0. 092%，ＲSD分别为 0. 82%，0. 76%，0. 86%。
表 2 3 种成分的相对校正因子
进 样 体
积 /μL
相对校正因子
f白珠树苷 /儿茶素 f滇白珠苷A/儿茶素
1 3. 653 1. 870
2 3. 664 1. 864
4 3. 523 1. 786
8 3. 489 1. 763
16 3. 478 1. 773
20 3. 501 1. 780
平均值 3. 551 1. 806
ＲSD /% 2. 4 2. 7
2. 1. 10 加样回收率 精密称取 0. 5 g 已知含量的
透骨香药材粉末(过 40 目筛)6 份，分别按各成分在
药材中的含量精密加入对照品溶液，相当于儿茶素
0. 21 mg，白珠树苷 1. 70 mg，滇白珠苷 A 0. 46 mg。
按供试品溶液处理方法制备样品，测定，计算加样回
收率，儿茶素、白珠树苷、滇白珠苷 A 的加样回收率
分别为 95. 8%，99. 4%，101. 1%，ＲSD 分 别 为
1. 6%，2. 4%，2. 9%。结果见表 3。
表 3 儿茶素、白珠树苷、滇白珠苷 A的加样回收率
化学成分 称量 /mg 含量 /mg 加入量 /mg 实测量 /mg 回收率 /% 平均值 /% ＲSD /%
儿茶素 503. 2 0. 199 2 0. 211 0. 397 5 94. 0 95. 8 1. 6
503. 9 0. 199 5 0. 211 0. 402 9 96. 4
507. 1 0. 200 8 0. 211 0. 401 9 95. 4
502. 0 0. 198 7 0. 211 0. 398 2 94. 5
500. 1 0. 198 0 0. 211 0. 404 7 98. 0
501. 5 0. 198 5 0. 211 0. 402 8 96. 8
白珠树苷 503. 2 1. 705 1. 7 3. 370 0 97. 9 99. 4 2. 4
503. 9 1. 707 1. 7 3. 365 0 97. 4
507. 1 1. 718 1. 7 3. 395 0 98. 5
502. 0 1. 701 1. 7 3. 364 0 97. 7
500. 1 1. 694 1. 7 3. 445 0 102. 9
501. 5 1. 699 1. 7 3. 437 0 102. 1
滇白珠苷 A 503. 2 0. 461 1 0. 462 0. 934 2 102. 4 101. 1 2. 9
503. 9 0. 461 8 0. 462 0. 910 2 97. 1
507. 1 0. 464 7 0. 462 0. 923 1 99. 2
502. 0 0. 460 0 0. 462 0. 948 2 105. 7
500. 1 0. 458 3 0. 462 0. 930 3 102. 2
501. 5 0. 459 6 0. 462 0. 922 8 100. 3
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 18
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2. 2 校正因子的重复性考察
2. 2. 1 色谱柱及高效液相色谱仪考察 试验分别
考察了 Prominenece UFLC，Agilent 1100 两种高效液
相色谱系统和 Aglient Eclipse XDB-C18(4. 6 mm ×
150 mm，5 μm) ，Waters Symmetry C18(4. 6 mm ×
150 mm，5 μm) ，Waters XBriage C18 (4. 6 mm ×
150 mm，5 μm)3 种色谱柱。精密吸取 2. 1. 2 混合
对照品溶液 1，2，4，8，16，20 μL，进行测定，按 2. 1. 6
项下计算儿茶素对白珠树苷、滇白珠苷 A 的相对校
正因子。结果见表 4。
表 4 不同仪器和不同色谱柱测得的相对校正因子
仪器 色谱柱
相对校正因子
f白珠树苷 /儿茶素 f滇白珠苷A/儿茶素
UFLC Eclipse XDB-C18 3. 551 1. 806
Symmetry C18 3. 705 1. 900
XBriage C18 3. 545 1. 973
Agilent1100 Eclipse XDB C18 3. 303 1. 851
Symmetry C18 3. 339 1. 920
平均值 3. 489 1. 890
ＲSD /% 4. 8 3. 4
2. 2. 2 待测组分色谱峰的定位 分别采用相对保
留值和保留时间差 2 种参数作为色谱峰定位标准，
考察了其在不同品牌仪器和不同规格色谱柱上的重
复性。结果表明各成分间保留时间差变化较明显，
而各成分间相对保留值变化不大，ＲSD ＜ 5%。因此
本研究选用相对保留值作为目标色谱峰的定位指标
比较合适。根据相对保留值再结合峰形及化合物的
UV光谱判断，即能够判断目标峰的准确位置。结
果见表 5。
表 5 不同仪器和色谱柱测得的相对保留值
仪器 色谱柱
相对保留值
r白珠树苷 /儿茶素 r滇白珠苷A/儿茶素
UFLC Eclipse XDB-C18 1. 35 2. 36
Symmetry C18 1. 30 2. 19
XBriage C18 1. 47 2. 45
Agilent1100 Eclipse XDB C18 1. 38 2. 47
Symmetry C18 1. 37 2. 38
平均值 1. 37 2. 37
ＲSD /% 4. 5 4. 7
2. 3 一测多评法与常规法结果比较 将收集的 28
批透骨香药材，按供试品溶液处理方法制备样品及
上述的色谱条件，分别精密吸取 10 μL 注入高效液
相色谱仪。采用外标一点法和 QAMS 法分别计算
透骨香药材中儿茶素、白珠树苷和滇白珠苷 A 的含
量。常规的外标法实测含量值与一测多评法计算的
含量值用相对偏差来进行比较，相对偏差在 3%以
内，表明 2 种方法测得成分含量值没有显著性差异，
说明透骨香药材应用一测多评法进行多指标成分质
量评价是可行的。见表 6。
表 6 外标法和一测多评法测定透骨香中儿茶素、
白珠树苷、滇白珠苷 A的含量 %
No． 产地
儿茶素 白珠树苷 滇白珠苷 A
外标法 外标法 QAMS 外标法 QAMS
1 安顺 1 0. 039 2 0. 326 0. 308 0. 091 6 0. 091 9
2 安顺 2 0. 035 8 0. 276 0. 269 0. 103 0. 104
3 安顺 3 0. 026 5 0. 102 0. 103 0. 054 9 0. 057 1
4 安顺 4 0. 101 0. 413 0. 410 0. 096 5 0. 099 3
5 毕节 1 0. 048 5 0. 211 0. 206 0. 093 0 0. 094 2
6 毕节 2 0. 050 2 0. 142 0. 145 0. 033 7 0. 035 5
7 清镇 1 0. 044 8 0. 125 0. 122 0. 105 0. 106
8 清镇 2 0. 058 2 0. 156 0. 154 0. 109 0. 115
9 龙里 1 0. 104 0. 221 0. 216 0. 210 0. 213
10 龙里 2 0. 054 4 0. 393 0. 391 0. 121 0. 124
11 关岭 1 0. 101 0. 605 0. 590 0. 098 9 0. 100
12 关岭 2 0. 072 0 0. 434 0. 435 0. 064 9 0. 067 4
13 晴隆 1 0. 102 0. 836 0. 825 0. 106 0. 112
14 晴隆 2 0. 103 0. 889 0. 867 0. 144 0. 146
15 贵定 0. 072 5 0. 413 0. 403 0. 116 0. 118
16 高坡 1 0. 059 7 0. 158 0. 154 0. 105 0. 107
17 高坡 2 0. 060 6 0. 130 0. 129 0. 095 5 0. 098 3
18 高坡 3 0. 067 2 0. 181 0. 182 0. 073 4 0. 076 5
19 花溪 0. 071 2 0. 337 0. 333 0. 077 9 0. 082 3
20 息烽 0. 046 9 0. 221 0. 221 0. 108 0. 112
21 铜仁 0. 097 0 0. 424 0. 422 0. 127 0. 131
22 贵阳 1 0. 054 9 0. 417 0. 414 0. 111 0. 114
23 贵阳 2 0. 029 9 0. 266 0. 267 0. 043 8 0. 045 6
24 贵阳 3 0. 050 3 0. 254 0. 255 0. 069 4 0. 072 4
25 遵义 0. 046 0 0. 123 0. 124 0. 116 0. 121
26 六盘水 0. 064 5 1. 16 1. 19 0. 062 8 0. 066 2
27 开阳 0. 032 7 0. 308 0. 316 0. 040 3 0. 042 4
28 习水 0. 052 4 0. 239 0. 245 0. 047 4 0. 049 9
3 讨论
作者采用超声、回流、索氏进行提取，结果显示，
3 种提取方法提取效果相差不大，而甲醇超声提取
完全，方法简单，故采用超声提取。以甲醇、70%甲
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陈青凤，等:一测多评法测定透骨香中儿茶素、白珠树苷、滇白珠苷 A的含量
醇、50%甲醇、30%甲醇作为透骨香药材的提取溶
剂，结果表明甲醇提取效率最高，因此选用甲醇作为
提取溶剂。提取时间考察了 10，20，30，40，50 min，
结果分析，40 min 与 50 min 较 30 min 提取完全，且
40 min与 50 min 差异较小，故确定提取时间为 40
min。作者在透骨香药材对照品分离制备过程中，发
现存在大量的鞣质成分，该类成分是导致高效液相
色谱上分离效果差的主要原因。通过聚酰胺柱处理
除去鞣质进行高效液相色谱分析，结果该法处理后
分离效果好，重复性好。
本研究选用易得及廉价的儿茶素对照品为内
标，建立儿茶素与白珠树苷、滇白珠苷 A 相对校正
因子，通过对 28 批透骨香药材测定，验证了 QAMS
法的准确性，并对一测多评法的技术适用性和应用
可行性进行了探讨研究。结果表明，试验建立的校
正因子比较可信，一测多评法推算的含量与实测法
所得含量基本一致。说明一测多评法能够实现在对
照品短缺的情况下，用于透骨香药材多指标成分含
量测定，可作为透骨香药材质量控制的有效方法
之一。
［参考文献］
［1］ 贵州省药品监督管理局．贵州省中药材、民族药材质
量标准［S］．贵阳:贵州科技社，2003:308.
［2］ 杨基森，马永骥，吴静澜，等．透古香油载体吸附物及
其稳定性研究［J］．中国中药杂志，1998，28(1) :29．
［3］ 熊玉兰，肖冰，马小军，等．滇白珠抗风湿性关节炎活
性成分研究［J］．中国中药杂志，2009，34(19) :48．
［4］ 张治针，果德安，李长岭，等．滇白珠木脂素苷的研究
［J］．药学学报，1999，34(2) :128.
［5］ 马学毅，魏涛，崔建军，等．贵阳滇白珠精油化学成分
研究［J］．分析测试通报，1992，11(1) :63.
［6］ 熊玉兰，肖冰，马小军，等． 滇白珠抗风湿性关节炎活
性成分研究［J］．中国中药杂志，2009，34(19) :2516.
［7］ 张治针，果德安，李长龄，等．滇白珠抗菌抗炎和镇痛
活性的实验研究［J］． 西北药学杂志，1999，14
(2) :60.
［8］ 贾智若，李兵，李耀华，等．反相高效液相色谱法测定
杜仲中儿茶素的含量［J］． 中国实验方剂学杂志，
2013，19(5) :117.
［9］ 唐丽琴． IL-1α对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞前列腺
素受体脱敏的影响及木瓜苷和儿茶素的作用［D］．合
肥:安徽医科大学，2007.
［10］ Zhang B，He X L，Ding Y，et al． Gaultherin，a natural
salicylate derivative from Gaultheria yunnanensis:
towards a better non-steroidal anti-inflammatory drug
［J］． Eur J Pharmacol，2006，530(1) :166.
［11］ 王智民，钱忠直，张启伟，等．一测多评法建立的技术
指南［J］．中国中药杂志，2011，36(6) :657.
［12］ 丁黎艳，周露，王丽娜，等．一测多评法测定补骨脂中
不同类型成分的含量［J］． 中国实验方剂学杂志，
2013，19(5) :152.
［责任编辑 顾雪竹
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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第 19 卷第 18 期
2013 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 18
Sep．，2013