全 文 ：［收稿日期］ 20150113(016)
［基金项目］ 国家重大新药创制“科技重大专项”(2013ZX09103-002-014) ;国家自然科学基金面上项目(81473337) ;国家药典委员会
2015 年版《中国药典》提高项目(Q024131113010030)
［第一作者］ 乔媛媛，在读硕士，从事药物分析与药品质量研究，Tel:15208112573，E-mail:qiaoyuangzxy@ 163． com
［通讯作者］ * 魏屹，副教授，从事生药分析与药品质量研究，Tel:15928920660，E-mail:weiyiyxy@ 126. com;
* 谭睿，博士，教授，从事中药质量标准规范化和新制剂研发工作，Tel:028-87600993，E-mail:tanrui@ swjtu． ed． cn
一测多评法测定藏族药肉果草中 4 种成分的含量
乔媛媛1，黄琦雅2，余婷婷1，郑彩霞1，魏屹1* ，谭睿1*
(1． 西南交通大学 生命科学与工程学院，成都 610031;2． 浙江大学竺可桢学院，杭州 310058)
［摘要］ 目的:建立藏族药肉果草中 4 种成分的一测多评定量测定方法，考察不同类型化合物之间采用相对校正因子
(relative correction factors，ＲCF)进行含量测定的准确性和可行性。方法:以藏族药肉果草为研究对象，建立内参物毛蕊花糖苷
与其他 3 个指标成分间的 ＲCF因子，并利用 ＲCF计算含量，实现一测多评。同时采用外标法测定这 4 个成分的含量，比较二
者间的差异。结果:在一定的线性范围内，毛蕊花糖苷与梓醇、连翘苷、连翘脂素间的 ＲCF 分别为 7. 044 9，2. 135 0，0. 964 7;
在不同试验条件下重复性良好(ＲSD分别为 2. 7%，1. 2%，1. 2%) ;且不同来源的肉果草中 4 个成分含量的一测多评法计算值
与外标法测定结果间无明显差异。结论:肉果草中 4 个成分的一测多评法准确可行，适用于肉果草中成分的含量测定，为藏族
药的多指标质量评价提供了新的参考。
［关键词］ 一测多评;藏族药;肉果草;相对校正因子
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)22-0099-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015220099
Simultaneous Determination of 4 Constituents in Tibetan Herb-medicine Lancea tibetica by HPLC-QAMS
QIAO Yuan-yuan1，HUANG Ya-qi1，YU Ting-ting1，ZHENG Cai-xia1，WEI Yi1* ，TAN Ｒui1* (1． School of
Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，China;2． Chukochen Honors
College Zhejiang University，Hangzhou 310058，China)
［Abstract］ Objective:To establish a quantitative assay of multi-components by single marker (QAMS)
for determination of four bioactive components in Lancea tibetica，and examine the accuracy and feasibility of the
relative correction factors (ＲCFs)between different types of compounds． Method:L． tibetica was chosen as the
research object，and ＲCFs were determined between acteoside and catalpol，phillyrin and phillygenol． The contents
of the four constituents were also calculated according to the ＲCFs to carry out QAMS． Difference of QAMS and
external standard method was investigated to validate the accuracy and feasibility of the QAMS method． Ｒesult:
ＲCFs between acteoside and catalpol，phillyrin and phillygenol were 7. 044 9，2. 135 0 and 0. 964 7 respectively
within a certain linear range;repeatability was good in different experimental conditions (ＲSDs were 2. 7%，
1. 2% and 1. 2% respectively) ;there was no significant differences between the quantitative results of QAMS
method and external standard method for 4 constituents． Conclusion:It is accurate and feasible to evaluate 4
constituents of L． tibetica by QAMS． Therefore，this method is suitable to determine different types of components，
and can provide a new reference for the quality assessment of Tibetan herb-medicine．
［Key words］ quantitative analysis of multi-components by single marker;Tibetan Herb-medicine;Lancea
tibetica;relative correction factors
肉果草是藏族医常用药材，有愈合脉管，涩脉止
血，生脂，消散外部肌肿之效;其根养肺，托引肺脓;
叶治诸疮;种子还可治心脏病、血瘤、舒肠绞结等。
属藏族药中的上品。近年来，国内对肉果草的研究
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有所增加，包括其化学成分研究、化学成分含量测定
等，但采用一测多评法测定肉果草中多种成分的含
量还未见报道［1］。目前一测多评方法已成功应用
于木通、黄连、人参等 20 种常用中药的质量评价研
究，还被 2010 年版《中国药典》收载。本研究应用
“一测多评”法，对肉果草的药效成分梓醇、毛蕊花
糖苷、连翘苷及连翘脂素［2-5］进行多指标质量控制
研究。选择毛蕊花糖苷为内参物，建立其与梓醇、连
翘苷及连翘脂素的相对校正因子，进行含量计算，降
低了检测成本和时间，验证了一测多评法在不同类
型成分测定中的实用性，为肉果草药材的质量控制
研究提供参考。
1 材料
2695-2998 型高效液相色谱仪(美国 Waters) ，
LC-6AD 型高效液相色谱仪 (日本岛津)。X
BridgeTM C18(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，Kromasil C18
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，Shim-pack VP-ODS(4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ，Phenomenex C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)色谱柱。梓醇 (批号 110808-
201210)购于中国食品药品检定研究院;毛蕊花糖
苷(批号 PS12121103) ，连翘苷(批号 PS13030801)
及连翘脂素(批号 PS13052003)均购于成都普思生
物科技有限公司。9 批肉果草药材样品分别来自青
海久美藏族药药业有限公司(2 号) ，青海金诃藏药
药业股份有限公司(3 号) ，青海八一路药材市场(3
号) ，青海省药检所(4 号) ，西藏(5 号) ，甘肃(6
号) ，四川若尔盖县求吉乡(8 号) ，巴西乡(7 号)及
扎达寺镇(9 号) ，经西南交通大学宋良科副教授鉴
定为玄参科植物肉果草 Lancea tibetica 的全草。甲
醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 方法学考察
2. 1. 1 色谱条件 Water C18色谱柱(4. 6 mm × 250
mm，5 μm) ;流动相乙腈(A)-0. 1%磷酸水溶液(B)
(0 ～ 13 min，0. 5%A;13 ～ 25 min，0. 5% ～ 14. 5% A;
25 ～ 55 min，14. 5%A;55 ～ 60 min，14. 5% ～ 17% A;
60 ～ 75 min，17% ～ 35% A;75 ～ 80 min，35%A;80 ～
90 min，35% ～40%A)，流速1 mL·min －1，梓醇、毛蕊花
糖苷、连翘苷、连翘脂素的检测波长分别为 210，
330，278，280 nm，柱温 40 ℃，理论塔板数按毛蕊花
糖苷峰计算不低于 5 000。对照品混合溶液及样品
溶液色谱图。见图 1，2。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 精密称取梓醇对照品
适量，置量瓶中，加乙腈-0. 1%磷酸水溶液(2∶ 98)溶
A． 210 nm;B． 278 nm;C． 280 nm;D． 330 nm;1. 梓醇;2. 毛蕊花糖苷;
3. 连翘苷;4. 连翘脂素(图 2 同)
图 1 对照品混合溶液 HPLC
Fig． 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances
图 2 肉果草样品溶液 HPLC色谱
Fig． 2 HPLC chromatograms of sample solution
解，并定容至刻度，制得梓醇(1. 50 g·L －1)对照品储
备液。分别精密称取连翘苷、连翘脂素对照品适量，
置量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，分别制成连
翘苷 7. 60 g·L －1，连翘脂素 1. 02 g·L －1的对照品储
备液。精密称取毛蕊花糖苷对照品适量，再分别精
密吸取上述对照品储备液适量，置量瓶中，加乙腈-
0. 1%磷酸水溶液(2 ∶ 98)溶解，并定容至刻度。制
得含梓醇、毛蕊花糖苷、连翘苷、连翘脂素质量浓度
分别为 0. 229 5，0. 920 0，0. 190 0，0. 0337 g·L －1的
混合对照品溶液。
2. 1. 3 供试品溶液的制备 取肉果草药材粉末
(过二号筛)约 0. 8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，
加入甲醇 40 mL，称定质量，浸泡 30 min后超声处理
60 min，取出，放冷，用甲醇补足减失的质量，摇匀，
滤过;精密量取续滤液 10 mL，浓缩溶剂至近干，残
渣加乙腈-0. 1%磷酸水溶液(2 ∶ 98)溶解并定容至
10 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2. 1. 4 线性关系考察 取 2. 1. 2 项下混合对照品
溶液 2，5，7，10，13，15，20 μL，按 2. 1. 1 项下色谱条
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件进样，记录色谱图。以色谱峰面积为纵坐标，进样
量为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归。结果
见表 1。
表 1 4 个成分的线性关系
Table 1 Linear equations of four constituents
成分 回归方程 r 线性范围 /μg
梓醇 Y =194 434. 05X +398. 53 0. 999 9 0. 459 ～4. 59
毛蕊花糖苷 Y =1 373 890. 03X －15 594. 33 1. 000 0 1. 84 ～18. 4
连翘苷 Y =645 659. 57X －5 360. 56 0. 999 9 0. 38 ～3. 8
连翘脂素 Y =1 424 477. 84X －1 340. 29 0. 999 9 0. 067 4 ～0. 674
2. 1. 5 精密度试验 取 2. 1. 2 项下混合对照品溶
液 10 μL，连续进样 6 次测定。结果梓醇、毛蕊花糖
苷、连翘苷和连翘脂素峰面积的 ＲSD分别为 1. 5%，
0. 1%，0. 1%，0. 9%。表明仪器精密度良好。
2. 1. 6 稳定性试验 取 2 号样品，照 2. 1. 3 项下方
法制备供试品溶液，分别于 0，4，8，12，24 h按 2. 1. 1
项下色谱条件进样测定。结果梓醇、毛蕊花糖苷、连
翘苷和连翘脂素的 ＲSD 分别为 1. 0%，0. 1%，
0. 4%，0. 9%。表明供试品溶液 24 h内稳定。
2. 1. 7 重复性试验 取 2 号样品，按照 2. 1. 3 项下
方法制备 6 份供试品溶液，按 2. 1. 1 项下色谱条件
进样 10 μL，计算得梓醇、毛蕊花糖苷、连翘苷、连翘
脂素平均质量分数分别为 10. 15，57. 64，9. 45，1. 04
mg·g －1。ＲSD 分别为 0. 9%，0. 2%，0. 3%，1. 6%。
表明本法重复性良好。
2. 1. 8 加样回收率试验 称取 6 份供试品(2 号)
粉末 0. 4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加
入对照品梓醇 5. 0 mg，毛蕊花糖苷 25. 0 mg，2. 1. 2 项
下连翘苷对照品储备液(7. 60 g·L －1)0. 48 mL，连翘
脂素对照品储备液(1. 02 g·L －1)0. 33 mL，按2. 1. 3项
下方法制备供试品溶液。按 2. 1. 1 项下色谱条件进
样 10 μL，测定。结果梓醇、毛蕊花糖苷、连翘苷及连
翘脂素 平 均 回 收 率 分 别 为 98. 53%，98. 39%，
99. 32%，98. 16%。 ＲSD 分 别 为 1. 0%，0. 8%，
1. 7%，1. 3%。
2. 2 ＲCF的确定 精密吸取 2. 1. 2 项下混合对照品
溶液1，2，5，7，10，13，15，17，20 μL，按2. 1. 1项下色谱
条件进样，记录色谱图。以毛蕊花糖苷为内参物，按
下式［6］fsi =
fs
fi
=
As × Ci
Ai × Cs
(As，内参物对照品 s 峰面积;
Cs，内参物对照品 s 浓度;Ai，某待测成分对照品 i 峰
面积;Ci，某待测成分对照品 i 质量浓度)计算梓醇、
连翘苷、连翘脂素的 ＲCF(fsi)。结果见表 2。
2. 3 ＲCF的耐用性考察 考察流动相各梯度点比例
表 2 肉果草中 3个指标成分的相对校正因子
Table 2 Ｒelative correting factors(ＲCF)of three components in
Lancea tibetica Hook． f． et Thoms
进样体积
/μL
其他成分相对于毛蕊花糖苷的 fsi
梓醇 连翘苷 连翘脂素
1 6. 999 2 2. 135 4 0. 964 7
2 7. 056 5 2. 142 1 0. 958 9
5 7. 139 4 2. 138 4 0. 986 3
7 6. 969 4 2. 130 6 0. 956 1
10 7. 070 7 2. 138 9 0. 967 7
13 7. 031 7 2. 141 7 0. 964 0
15 7. 038 3 2. 136 8 0. 966 1
17 7. 022 3 2. 125 9 0. 953 2
20 7. 076 2 2. 125 3 0. 965 4
变化 ±5%，流速变化 ± 20%，柱温变化 ± 5 ℃，各指
标成分检测波长变化 ± 5，± 2，±1，± 0. 5 nm 时对
ＲCF的影响。结果表明流动相各梯度点比例变
化 ±5%，流速变化 ±20%，柱温变化 ± 5 ℃对各指标
成分的 ＲCF 影响较小(ＲSD 均 ＜ 5%) ;检测波长变
化 ±5 nm对连翘苷与连翘脂素的 ＲCF影响较小(ＲSD
均 ＜5%)，检测波长变化 ±0. 5 nm对梓醇的 ＲCF影响
较小(ＲSD ＜5%)。还考察了不同色谱系统及不同品
牌色谱柱对 ＲCF的影响，结果表明 ＲCF在不同色谱系
统和不同色谱柱下具有良好的重复性。见表 3。
表 3 不同仪器及色谱柱对相对校正因子的影响(n = 2)
Table 3 ＲCF determind by different instructions and columns
(n = 2)
色谱仪 色谱柱
其他成分相对于毛蕊花糖苷的 fsi
梓醇 连翘苷 连翘脂素
Waters2695 Water 7. 057 1 2. 136 7 0. 958 4
Kromasil 7. 006 6 2. 078 9 0. 936 1
LC-6AD Water 7. 376 7 2. 112 8 0. 947 7
Kromasil 7. 346 2 2. 120 9 0. 932 8
2. 4 待测组分色谱峰的定位 取 2. 1. 2 项下混合对
照品溶液各 10 μL，按 2. 1. 1项下色谱条件进样，记录
色谱图。考察相对保留值和保留时间差在不同品牌
仪器和不同规格色谱柱中的重复性。结果表明，梓醇
色谱峰采用保留时间差法定位重复性良好(ＲSD ＜
5%) ，连翘苷和连翘脂素色谱峰定位采用相对保留时
间值法定位重复性良好(ＲSD ＜5%)。见表 4，5。
2. 5 QAMS法与外标法测定结果的比较 用外标
法对 4 种成分的含量进行测定将结果与 QAMS 法
计算值进行比较，验证 QAMS 法用于肉果草多指
标质量评价的准确性。结果表明 2 种方法测得的
各指标成分的含量没有明显差异(ＲSD 均 ＜ 5%) ，
见表 6。
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表 4 QAMS法待测成分色谱峰的定位———保留时间差法(n = 2)
Table 4 Ｒetention time difference determined by different
instruments and columns (n = 2)
仪器 色谱柱
tＲ梓醇 －
tＲ毛蕊花糖苷
tＲ连翘苷 －
tＲ毛蕊花糖苷
tＲ连翘脂素 －
tＲ毛蕊花糖苷
Waters 2695 X Bridge － 44. 217 18. 960 29. 394
Shim-pack － 44. 343 17. 213 31. 886
Kromasil － 46. 825 13. 534 29. 834
Phenomenex － 42. 936 18. 868 32. 905
LC-6AD Waters － 46. 902 17. 129 28. 069
Shim-pack － 46. 856 16. 164 31. 130
Kromasil － 47. 475 12. 238 29. 527
Phenomenex － 45. 451 16. 886 31. 487
表 5 QAMS法待测成分色谱峰的定位———相对保留时间法(n =2)
Table 5 Ｒelative retention time determined by different instruments
and columns (n = 2)
仪器 色谱柱
tＲ梓醇
/ tＲ毛蕊花糖苷
tＲ连翘苷
/ tＲ毛蕊花糖苷
tＲ连翘脂素
/ tＲ毛蕊花糖苷
Waters 2695 Waters 0. 175 1. 354 1. 548
Shim-pack 0. 228 1. 230 1. 555
Kromasil 0. 237 1. 221 1. 486
Phenomenex 0. 220 1. 343 1. 598
LC-6AD Waters 0. 198 1. 293 1. 480
Shim-pack 0. 245 1. 261 1. 502
Kromasil 0. 278 1. 186 1. 449
Phenomenex 0. 241 1. 282 1. 526
表 6 2 种不同方法定量测定肉果草 4 种成分的含量(n = 2)
Table 6 contents of components by external standard method and
QAMS (n = 2)
样品号 定量方法
各成分质量分数 /mg·g － 1
梓醇 毛蕊花糖苷 连翘苷 连翘脂素
1 外标 13. 626 5 59. 466 4 8. 419 4 1. 372 6
QAMS 13. 612 6 59. 466 4 8. 413 7 1. 369 5
2 外标 10. 125 1 54. 830 6 7. 970 6 1. 209 6
QAMS 10. 113 4 54. 830 6 7. 963 7 1. 206 4
3 外标 10. 081 1 57. 533 3 9. 420 8 1. 041 3
QAMS 10. 071 3 57. 533 3 9. 420 2 1. 037 8
4 外标 2. 530 5 71. 092 2 9. 338 2 0. 465 8
QAMS 2. 535 0 71. 092 2 9. 334 9 0. 461 5
5 外标 5. 615 4 61. 612 0 7. 529 2 0. 621 8
QAMS 5. 613 8 61. 612 0 7. 519 4 0. 617 8
6 外标 3. 380 5 38. 736 9 6. 120 2 1. 962 8
QAMS 3. 385 4 38. 736 9 6. 107 7 1. 960 7
7 外标 12. 266 6 54. 139 2 11. 949 4 0. 536 7
QAMS 12. 253 0 54. 139 2 11. 960 4 0. 532 6
8 外标 18. 144 9 37. 283 1 10. 447 4 0. 884 1
QAMS 18. 129 2 37. 283 1 10. 457 1 0. 882 0
9 外标 20. 028 1 67. 995 1 12. 159 6 0. 867 6
QAMS 19. 994 9 67. 995 1 12. 168 7 0. 864 4
3 讨论
进样发现 4 种成分在 210 nm下虽然都能出峰，
但检测波长变化对梓醇、连翘苷、连翘脂素的 ＲCF
影响均较大，且 210 nm下连翘苷色谱峰与邻近色谱
峰分离情况不好，故分别以毛蕊花糖苷、连翘苷和连
翘脂素的最大吸收波长作为其检测波长;梓醇为末
端吸收，参照《中国药典》(2010 年版)中梓醇的检
测波长，选定 210 nm为梓醇的检测波长。其中毛蕊
花糖苷在 200 ～ 400 nm 均有紫外吸收，可以满足后
期待测成分色谱峰的定位要求，且容易获得，故选定
其为内参物。
分别考察了甲醇-水、甲醇-0. 1% 磷酸、乙腈-
0. 1%磷酸和乙腈-水不同梯度洗脱系统。结果乙
腈-0. 1%磷酸梯度洗脱作为流动相时达到基线分离
度，峰形较好，故以此作为流动相。考察了超声和回
流两种供试品提取方法，结果超声提取效果更好;根
据 4 种成分的溶解性分别以 80%甲醇、50%甲醇、
甲醇、乙醇为提取溶剂进行试验，结果表明以甲醇为
提取溶剂时各成分的含量均较高;又考察了甲醇体
积 30，40，50，60 mL对提取率的影响，结果甲醇体积
40 mL时即可将各成分基本提取完全;最后考察了
超声提取 30，60，90，120 min 对提取率的影响，结果
表明超声提取 60 min时各成分已基本被提取完全。
测定结果显示肉果草样品中 4 种不同类型化合
物的含量相差很大，其中苯乙醇苷类化合物毛蕊花
糖苷的含量最多。不同来源肉果草样品中同一指标
成分的含量也具有较大差异。试验建立的相对校正
因子具有较好的耐用性，一测多评含量测定结果与
传统方法含量测定结果间无显著差别，表明在对照
品缺乏的情况下采用一测多评法同步测定藏药肉果
草中不同类型成分的含量是可行的，为藏药的多指
标质量评价提供了新的思路。
［参考文献］
［1］ 王智民，高慧敏，付雪涛，等．“一测多评”法中药质量
评价模式方法学研究［J］． 中国中药杂志，2006，31
(23) :1925-1928.
［2］ 董炤，陈长勋．梓醇药理作用的研究进展［J］．中成药，
2013，35(5) :1047-1049.
［3］ 黄才国，李医明，贺祥，等．玄参中苯丙素苷 XS-8 对兔
血小板 cAMP和兔血浆中 PGI 2 /TXA2 的影响［J］． 第
二军医大学学报，2004，25(8) :920.
［4］ 李双，王东强，李志军．连翘主要有效成分的提取与药
理作用［J］．黑龙江中医药，2011(2) :46-48
［5］ 赵晨阳，邱嵘，郑荣梁．呋喃骈呋喃木脂素的体外抗肿
瘤活性［J］． 兰州大学学报:自然科学版，2000，36
(4) :66-68.
［6］ 王智民，钱忠直，张启伟，等． 一测多评法建立的技术
指南［J］．中国中药杂志，2011，36(6) :657-658.
［责任编辑 顾雪竹］
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第 21 卷第 22 期
2015 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 21，No． 22
Nov．，2015