全 文 ：[作者简介] 居学海(1981-),男 ,硕士研究生 ,主要从事体内药物代谢及相互作用的研究。[通讯作者] 崔 ,教授。电话:0531-88382554 , E-mail:cuixi@sdu.edu.cn
文章编号:1671-7554(2007)01-0062-03
月腺大戟水提物对小鼠的毒性作用
居学海1 ,崔　 1 ,陈鸣岳1 ,杜　娟2 ,王淑娥1 ,崔兰漪3
(1.山东大学公共卫生学院卫生检验学研究所 , 山东 济南 250012;
2.山东大学齐鲁医院药剂科 , 山东 济南 250012;
3.山东省金泰生物工程公司 , 山东 济南 250100)
　　[摘要] 　目的:探讨月腺大戟水提物的毒性作用 。方法:以实验用一级标准昆明种近交系小鼠为实验
对象 ,随机分为 5组。阴性对照组 ,给予蒸馏水灌胃;阳性对照组 ,腹腔注射环磷酰胺 50 mg·kg-1;低 、中 、高
剂量组 ,分别给予 77 、144 、288 g·kg-1月腺大戟水提物灌胃 ,观察微核率 、精子畸变率以及高剂量组的肝 、脾 、
肾 、心 、脑 、肺病理切片 。结果:高剂量(288 g·kg-1)月腺大戟水提物对脾脏 、肾脏和心脏具有毒性作用;中 、
高剂量组的微核率和精子畸变率与阴性对照组均有统计学差异(P <0.01 , P<0.005),低剂量组与阴性对
照组无统计学差异(P >0.05)。结论:月腺大戟水提物在较高剂量下有致突变和生殖毒性 ,但在低剂量下未
发现明显毒性。
[关键词] 　月腺大戟;突变;毒性;小鼠
[中图分类号] 　R284.2　　[文献标识码] 　A
Toxicity of Euphorbia ebiacteolata Hayata water extract on mice
JU Xue-hai1 , CUI Xi1 , CHEN Ming-yue1 , DU Juan2 , WANG Shu-e1 , CUI Lan-yi3
(1.Department of Chemistry and Bacteria Detection , School of Public Health , Shandong University , Jinan 250012 ,
Shandong , China;2.Department of Pharmaceutical Preparation , Qilu Hospital of Shandong University ,
Jinan 250012 , Shandong , China;3.Jintai Group Co., LTD , Jinan 250100 , Shandong , China)
[ ABSTRACT] 　Objective:To investigate the potential toxicity of Euphorbia ebiacteolata Hayata (EEH)water
extract.Methods:The study was performed on inbredKunming mice , using the traditional toxicological method based on
observing ratios of micronucleus and sperm abnormity(RMS).The mice were randomly divided into 5 groups:a negative
control with distilled water , a positive control with cytoxan(50mg·kg-1), and low dose , medium , and high dose of EEH
extract(77 g·kg-1 , 144 g·kg-1 and 288 g·kg-1 respectively).Results:The results showed that the high and medium
doses significantly increased RMS compared with the negative controls(P <0.01 , P<0.005), but a similar result was
not observed in the low dose group(P>0.05).Conclusion:EEH can induce mutation and sperm abnormity in medium
and high doses , whereas it cannot induce significant toxicity in low doses.
[ KEY WORDS] 　Euphorbia ebiacteolata Hayata;Mutation;Toxicity;Mice
　　月腺大戟(Euphorbia ebracteolata Hayata)为大戟
科植物 ,为中药狼毒的原植物之一 ,以其根入药 ,始
载于《神农本草经》 ,具有散结杀虫的功效 ,民间常用
于治疗结核和肿瘤[ 1] ,但其毒性较大 ,应用受到限
制。近年来从月腺大戟中提取到抗肿瘤 、抗菌和抗
病毒[ 2] 以及抗惊厥[ 3] 等的有效成分 ,对结核 、气管炎
有明显疗效 ,且有抗癫痫和治疗银屑病的作用[ 4] 。
为了安全 、正确地应用月腺大戟 ,我们以昆明种近交
第 45卷第 1期
2007年 1月 　　 　 　
山　东　大　学　学　报　(医　学　版)
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)　 　 　 　Vol.45 No.1Jan.2007
系小鼠为实验对象 ,采用传统的病理学和毒理学
研究方法 , 对月腺大戟水提物的毒性进行初步研
究。
1　材料与方法
1.1　实验动物　一级标准昆明种近交系小鼠 , 18 ～
40 g , 2 ～ 3月龄 ,山东大学实验动物中心提供。
1.2　药物　月腺大戟 ,采集于山东省青州市云门
山 ,经山东大学药学院中草药教研室鉴定。
1.3　实验方法
1.3.1　月腺大戟的提取　取生药约 30 g ,剪碎 ,置
于蒸馏装置内 ,加入 750 ml蒸馏水 ,加热至微沸 ,持
续30 ～ 40 min ,过滤弃药渣 ,收集滤液 ,反复多次 。
将收集的滤液置于低压浓缩装置 ,采用液体石蜡油
浴加热 ,控制温度使滤液保持微沸 ,浓缩滤液 ,直至
呈粘稠状。将其平铺于托盘中 , 40 ℃烘干 ,用刀片
刮取提取物(1 g 月腺大戟提取物相当于 18 g 月腺大
戟生药),置于密闭容器内 ,4 ℃保存备用。
1.3.2 　最大耐受剂量(maximally tolerated dose ,
MTD)与病理实验 　取 18 ～ 25 g 一级昆明小鼠 20
只 ,雌雄各半 ,随机取雌雄各 7只 , 按小鼠的最大灌
胃容量 40ml·kg-1 ,给予 7.2 kg·L-1(月腺大戟水提
物最大可溶浓度)月腺大戟水提物[ 5] ;剩余雌雄各 3
只 ,给予生理盐水作平行对照 。分笼饲养 , 观察 1
周 ,记录小鼠死亡情况 ,并制作小鼠肝 、脾 、肾 、心 、
脑 、肺病理石蜡切片 ,HE染色 ,光学显微镜观察。
1.3.3　微核试验　取 18 ～ 25 g 一级昆明小鼠 50
只 ,雌雄各半 ,随机分为 5组 ,每组 10只 。阴性对照
组 ,给予蒸馏水灌胃;阳性对照组 ,腹腔注射环磷酰
胺50mg·kg-1;低 、中 、高剂量组 ,分别给予 77 、144 、
288 g·kg-1月腺大戟水提物灌胃 ,连续给药 2次 ,初
次给药前禁食 4 ～ 6 h ,两次给药间隔 24 h ,于第 2次
给药后 6 h处死小鼠 ,取双侧股骨 ,用 2ml注射器吸
取小牛血清1 ml ,将针头插入一端吸取骨髓少许 ,冲
洗入离心管内。然后用滴管吹打骨髓团块 ,使其成
为细胞混悬液后 ,以 1 000 r min离心 6min ,弃去上
清液 ,留少许血清和沉淀 ,用滴管吹打混匀 。涂片 ,
晾干 ,甲醇固定 15min ,Giemsa 染色 10 ～ 15min ,冲洗
干净后晾干 ,置油镜下观察 ,每只小鼠计数 1 000个
嗜多染红细胞的微核数。
1.3.4　精子畸变实验　取 50只雄性昆明小鼠 ,3月
龄 ,30 ～ 40 g ,随机分为 5组 , 每组 10只。阴性对照
组 ,给予蒸馏水灌胃;阳性对照组 ,腹腔注射环磷酰
胺50mg·kg-1;低 、中 、高剂量组 ,分别给予 77 、144 、
288 g·kg-1月腺大戟水提物灌胃 ,1 d 1次 ,连续 5 d ,
灌胃前禁食 4 ～ 6 h ,灌胃后禁食2 ～ 3 h ,4周后处死 ,
取小鼠双侧附睾放入盛有磷酸盐缓冲液的表面皿
中 ,剪碎 ,擦镜纸单层过滤 ,1 500 r min 离心5min ,吸
取多余上清液至剩余 0.5 ml ,用吸管吹打剩余液体
直至混合均匀 ,涂片 ,乙醇固定 10 min ,去除多余液
体 ,晾干 ,每只小鼠计数 1 000个精子 ,观察形态并
计算精子畸变率。
1.3.5　统计学处理　微核实验采用两样本率比较
的 u 检验 ,精子畸变实验采用 χ2检验。
2　结　果
2.1　MTD实验和病理实验　实验结束时小鼠全部
存活 。病理切片见小鼠脾脏出现大量巨噬细胞 ,可
能与药物毒性反应有关;肾脏肾小管肾小球出现局
灶性坏死 ,部分区域肾脏结构消失 ,并伴有脂肪变性
(图1 ,图 2);心脏心肌间小血管出现淀粉样变;肝
脏 、肺脏和脑未见明显病理改变(图 3)。
图 1　实验小鼠肾脏病理切片(HE×100)
Fig.1　The pathological section of the kidney of a tested mouse
in a maximally tolerated dose(HE×100)
图 2　实验小鼠肾脏病理切片(HE×400)
Fig.2　The pathological section of the kidney of a tested mouse
in a maximally tolerated dose(HE×400)
居学海 ,等.月腺大戟水提物对小鼠的毒性作用 63　 　
图 3　实验小鼠心脏病理切片(HE×100)
Fig.3　The pathological section of the heart of a tested mouse
in a maximally tolerated dose(HE×400)
2.2　微核实验　144 、288 g·kg-1月腺大戟水提物具
有明显的致突变作用 ,表现为微核率升高 ,与阴性对
照组间有统计学差异(P <0.01),且随着剂量的增
加 ,微核率有增高的趋势 。低剂量(77 g·kg-1)致突
变作用较弱 ,与阴性对照组间无统计学差异 。阳性
对照组环磷酰胺的微核率高达 45.5%,与阴性对照
组相比有统计学差异(P <0.001),显示环磷酰胺有
较强的致突变作用。所有剂量组与阳性对照组间均
有统计学差异(P <0.01),提示月腺大戟的毒性作
用远远低于环磷酰胺 ,是一种毒性较低的药物 。结
果见表1 。
表 1　各组小鼠微核发生情况
组别 剂量(g·kg-1) 微核数(n) 微核率(‰)
阴性对照组 - 30 3.0
阳性对照组 0.05 455 　45.5 ＊＊
低剂量组 77 46 4.6 ＊
中剂量组 144 92 9.2 ＊
高剂量组 288 106 10.6＊
　　＊P<0.01 vs 阳性对照组;＊＊P<0.001 vs 阴性对照组
2.3　精子畸变实验　50只小鼠在实验结束时存活
34只。精子畸变多为香蕉形 、无钩 、胖头和无定形 ,
未见双头双尾。阳性对照组与阴性对照组的精子畸
变率有统计学差异(P <0.001);中 、高剂量组与阴
性对照组比较有统计学差异(P <0.005),低剂量组
与阴性对照组比较无统计学差异 ,所有剂量组与阳
性对照组比较均有统计学差异(P <0.01), 表明
144 g·kg-1和288 g·kg-1月腺大戟水提物对精子有致
畸作用 ,但致畸率远低于环磷酰胺 , 低剂量(77 g·
kg
-1)相对安全 。结果见表 2。
3　讨　论
狼毒是国家医疗用毒性药品管理品种之一 ,在
表 2　各组小鼠精子畸变情况
组别 剂量(g·kg -1)
观察精子
总数(n)
畸变数
(n)
畸变率
(‰)
阴性对照组 - 10 000 132 13.2
阳性对照组 0.05 5 000 365 72.1＊
低剂量组 77 8 000 120 15.0＊＊
中剂量组 144 6 000 369 41.5＊＊
高剂量组 288 5 000 261 52.2＊＊
　　＊P <0.005 vs 阴性对照组;＊＊P< 0.01 vs 阳性对照组
江苏 、安徽 、浙江 、广东和山东等省均有分布 ,属于一
种毒性较强的中药 ,其毒性因产地不同而有明显差
异。近年来 ,因投毒和应用不当引起的中毒常有发
生。如每天服食蘸以狼毒汁的黑枣(相当于生药狼
毒50 g)5个月后 ,引起再生障碍性贫血 ,经抢救无效
死亡[ 6] ;用狼毒煎过的汤液及药渣反复擦洗头部 ,
1 h后出现中毒症状[ 6] 。但是申屠谨等[ 7] 用狼毒水 、
醇提取物所作的急性毒性实验表明 ,小鼠的半数致
死量 (腹 腔用 药)分别 为 275.9 g · kg-1 和
171.96 g·kg-1 ,水提物比醇提取物毒性低;腹腔注射
狼毒的水 、醇提取物各 40 g·kg-1和 20 g·kg-1 ,1 d 1
次 ,持续 10 d ,均未见明显副作用和小鼠死亡 ,说明
狼毒的副作用和毒性不大。申庆亮[ 8] 用月腺大戟注
射液作动物急性毒性试验 ,发现用药后小鼠的毒性
反应开始于给药后 0.5 h ,主要表现为活动减少和异
常步态 。多数小鼠死于给药第 1 d ,解剖死亡动物 ,
主要脏器未见明显变化 ,病理组织学检查也未见明
显改变。
本实验给予 288 g·kg-1月腺大戟水提物灌胃 ,
持续 1周 ,未见小鼠死亡 ,说明小鼠对月腺大戟水提
物的最大耐受剂量大于 288 g·kg-1 ,而未能得到确
切的 LD50 。结果与文献[ 7]不一致 ,可能是由于药物
的产地 、采集时间 、提取方法以及给药方式不同 。病
理切片结果表明 ,给予 288 g·kg-1月腺大戟水提物 ,
小鼠脾脏 、肾脏 、心脏有明显改变 ,与文献[ 8] 不符 ,
肝脏 、肺脏和脑未见明显改变。给予144 、288 g·kg-1
灌胃 ,月腺大戟水提物对小鼠具有明显的致突变和
生殖毒性 ,且随剂量的增加毒性有增大的趋势。在
精子畸变实验中 ,144 、288 g·kg-1剂量组逐渐死亡 ,4
周后各存活 6只和 5只 ,死亡只数随剂量的增加而
增加 ,说明月腺大戟可能有蓄积毒性。
[参考文献]
[ 1] 　王文祥 , 丁杏苞.月腺大戟的化学成分研究[ J] .中草
药 , 1999 , 30(1):1-3.
[ 2] 　张涵庆 ,丁云梅 ,陈桂英 , 等.月腺大戟根中有效成分的
研究[ J] .植物学报 , 1987 , 29(4):429.(下转第 67页)
　64　 山　东　大　学　学　报　(医　学　版) 45卷 1期
到双重的免疫作用 。一方面 CCL28 通过某种机制
扩散移行至毛细血管后引导 IgA分泌细胞归巢至涎
腺实质组织 , 促进了局部 sIgA 的产生;另一方面
CCL28可进入唾液发挥直接的抗微生物作用[ 5] 。
本研究通过多次预试验发现 ,唾液中的 CCL28
蛋白很不稳定 ,对温度敏感 ,若在室温环境下放置较
长时间(大于 1 h)或反复冻融 ,其活性会大幅降低 。
故建议收集新鲜的唾液标本后置冰盒内立即检测或
置-20 ℃后尽早检测 , 并避免反复冻融标本;在
-20 ℃环境下冷冻时间过长亦会影响试验结果 。
本研究建立了人唾液中 CCL28 夹心 ELISA 测定方
法 ,检测结果表明 ,健康人唾液中 CCL28的浓度平
均值为(70.70±40.91)ng ml ,此结果为进一步对口
腔感染患者唾液中 CCL28的研究提供了实验依据 。
最近 ,CCL28蛋白表达水平与支气管哮喘 、结肠癌等
疾病的关系已有研究报道[ 6 ,7] , 唾液中趋化因子
CCL28的生物功能以及与口腔疾病发生发展的关系
有待进一步研究 。
[参考文献]
[ 1] 　Marcotte H , Lavoie MC.Oral microbial ecology and the role
of salivary immunoglobulinA[ J] .Microbiol Mol Biol Rev ,
1998 , 62(1):71-109.
[ 2] 　Pan J , Kunkel EJ , Gosslar U, et al.A novel chemokine li-
gand for CCR10 and CCR3 expressed by epithelial cells in
mucosal tissues[ J] .J Immunol , 2000 , 165(6):2 943-2 949.
[ 3] 　Lazarus NH , Kunkel EJ , Johnston B , et al.A common mu-
cosal chemokine (mucosae-associated epithelial chemokine
CCL28)selectively attracts IgA plasmablasts[ J] .J Immunol ,
2003 , 170(7):3 799-3 805.
[ 4] 　Wilson E , Butcher EC.CCL28 controls immunoglobulin(Ig)
A plasma cell accumulation in the lactating mammary gland
and IgA antibody transfer to the neonate[ J] .J Exp Med ,
2004 , 200(6):805-809.
[ 5] 　Hieshima K , Ohtani H , Shibano M , et al.CCL28 has dual
roles in mucosal immunity as a chemokine with broad-spec-
trum antimicrobial activity[ J] .J Immunol , 2003 , 170(3):
1 452-1 461.
[ 6] 　English K , Brady C , Corcoran P , et al.Inflammation of the
respiratory tract is associated with CCL28 and CCR10 expres-
sion in a murine model of allergic asthma[ J] .Immunol Lett ,
2006 , 103(2):92-100.
[ 7] 　Dimberg J , Hugander A , Wagsater D.Protein expression of
the chemokine , CCL28 , in human colorectal cancer[ J] .Int
J Oncol , 2006 , 28(2):315-319.
[ 收稿日期 2006-06-08]
(编辑:刘霞)
(上接第 64页)
[ 3] 　孙晓飞 , 王淑萍 , 郑泽荣.月腺大戟化学成分研究[ J] .
1999 , 24(4):226-227.
[ 4] 　宋学立 ,杨维高.正交设计法研究月腺大戟注射液最佳
生产工艺[ J] .中国实验方剂学杂志 , 2000 , 6(5):14-15.
[ 5] 　王治乔 , 袁伯俊.新药临床前安全性评价与实践[ M] .
北京:军事医学出版社 , 1997.
[ 6] 　林　馨 ,朱君华.狼毒的药理研究和临床应用概况[ J] .
浙江中医杂志 , 1992 , 27(7):331-333.
[ 7] 　申屠谨 ,魏晶康 ,韦洁芬 , 等.狼毒对小鼠移植肿瘤的影
响[ J] .中西医结合杂志 , 1984 , 4(1):13-14.
[ 8] 　申庆亮.狼毒注射液动物急性毒性试验[ J] .前卫医药
杂志 , 1998 , 15(2):108-109.
[ 收稿日期 2005-12-08]
(编辑:周英智)
李　潇 ,等.人唾液 CCL28与 sIgA抗体分泌的相关性研究 67