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超声波辅助提取雪莲果中低聚果糖及其纯化的初步研究



全 文 :广西轻工业
GUANGXI JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY
2010年 1月
第 1期(总第 134期) 食品与生物
【作者简介】赵迎春(1981-),女,河北衡水人,硕士研究生,研究方向:糖类物质的分离与纯化。
雪莲果原产于南美洲的安第斯山一带,它的低聚果糖含量
是所有植物中含量最高的,属于果寡低热量保健食品;在食品,
保健品等方面具有广泛的用途[1,2]。目前,在食品行业中已被制
作成果脯、蜜饯、罐头、干片、果粉等多种食品[3 - 5],而有关其低
聚果糖的提取研究尚未见报道。
本研究采用超声波[6,7]辅助提取法对雪莲果中低聚果糖进
行了提取,通过单因素和正交试验分析确定了雪莲果中低聚果
糖超声波提取法的较佳工艺条件。并且,采用活性炭脱色和膜
过滤纯化提取的多糖。
1 材料和方法
1.1 材料和试剂
雪莲果购于南宁市水果批发市场;乙腈(色谱纯,FISHER
公司),考马斯亮蓝(生化试剂,国药集团化学试剂有限公司),
硫酸、苯酚和活性炭等均为分析纯试剂。
1.2 仪器与设备
Waters600高效液相色谱仪(美国),中空纤维膜(美国通
用电气公司),B3500S- MT超声波清洗仪(必能信超声有限公
司),UV- 2051PC紫外可见分光光度计(日本岛津公司),电子
天平(梅特勒 - 托利多仪器(上海)有限公司),501A型超级恒
温器(上海实验仪器厂有限公司)及 pH计(上海精密科学仪器
有限公司)。
1.3 实验方法
1.3.1 实验流程
超声波辅助提取流程:新鲜的雪莲果去皮→打汁→称重→
超声辅助提取→保温提取→离心分离→收集上清液→脱色→
过滤→收集滤液→中空纤维膜→高效液相色谱仪。
1.3.2 低聚果糖的提取
应用超声波辅助水提的方法,采用单因素和正交试验,考
察提取时间、料液比、超声时间、提取温度对提取多糖的影响。
用苯酚 - 硫酸比色法[8]测定提取液中糖含量,计算多糖提取率
作为选取最优提取条件的依据。
1.3.3 低聚果糖的纯化
选用活性炭作为脱色剂,采用单因素和正交试验,考察活
性炭用量、脱色时间、脱色温度、pH值对脱色效果的影响。用紫
外分光光度计测透光率作为选取最优脱色条件的依据。
脱色后的提取液通过分子量为 5000的中空纤维膜,考察
膜通量和膜两端的压力。
1.3.4 高效液相色谱分析[9]
色谱柱:Hypersil NH2分析柱( 4.6 mm×250 mm, 5μm);
流动相:乙腈:水 =75:25;流速:1μL/min;柱温:室温;进样量:
10μl;ELSD 的漂移管温度:100℃,氮气作载气,流速
2.5L/min。检测器:蒸发光散射检测器(Elsd2000,美国 Alltech
公司)。
2 结果与讨论
2.1 低聚果糖提取试验结果与分析
2.1.1 提取的单因素实验结果与分析
提取时间增加,提取率呈现增加的趋势。2h~3h之间提取
率增加趋势减缓,3h后增加趋势不明显,从经济方面考虑选取
提取时间为 3h。
料液比增大,提取率呈增加趋势。料液比 1:12后增加幅度
减小,这是因为料液比 1:12时大部分的糖已能溶出。故从提取
效果,减少溶剂用量和降低浓缩负荷等方面综合考虑,选取料
液比为 1:12较合适。
超声时间在 5- 10min之间,随着时间的增加,提取率是增
大的,这是由于随着时间的增加,对细胞壁的破碎作用逐渐增
强,因而有利于多糖的溶出。10min后,随着时间的增加,多糖
提取率逐渐减少,主要是由于杂质的大量溶出,阻碍了多糖分
子向溶剂中的扩散。因此选 10min作为提取时间为宜。
在 80℃之前随着温度的提高提取率是逐渐增大的,温度
超过 80℃以后,提取率是下降的,这主要是因为温度太高而引
起多糖分解,同时,温度过高增加能耗。提取温度以 80℃左右
为宜。
2.1.2 提取的正交试验结果与分析
在实际操作中,由于各因素之间相互交叉影响,因此为全
面考察超声波辅助水提的工艺参数,以超声时间、料液比、提取
时间和提取温度,四种因素进行正交试验设计如。
从正交试验结果得到的最优提取条件为:A1B1C1D1(提取时
间 2.5h,提取温度 75℃,超声时间 5min,料液比 1:10)提取率
超声波辅助提取雪莲果中低聚果糖及其纯化的初步研究
赵迎春,卢家炯
(广西大学糖业工程技术研究中心,广西 南宁 530004)
【摘 要】 以雪莲果为原料,用超声辅助提取低聚果糖,由单因素试验和正交试验确定的最佳提取工艺参数为提取时间
3h、提取温度 85℃、超声时间 5min、料液比 1:10(g/ g)。在此条件下,多糖的提取率为 4.257%。由单因素试验和正交试验确定的最
佳脱色工艺参数为活性炭添加量 2%,脱色温度 80℃,脱色时间 50min,脱色 pH3.5。在此条件下所得脱色液的透光率为 97.86%。
【关键词】 雪莲果;低聚果糖;超声;提取;脱色;高效液相色谱
【中图分类号】 TQ914 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003- 2673(2010)01-03-02
3
(下转第 8页)
为 4.187%。通过极差最优化分析得到的最优提取条件为
A2B3C1D1(提取时间 3h,提取温度 85℃,超声时间 5min,料液
比 1:10)。由正交试验结果可知,各个单因素对提取影响的大
小排列为:料液比 >超声时间 >提取时间 >提取温度。在两个
最优条件下做提取实验,经实验验证最优提取条件为:提取时
间 3h,提取温度 85℃,超声时间 5min,料液比 1:10;提取率为
4.257%。
表 1 提取的正交试验因素水平编码表
2.2 提取液纯化试验结果与分析
2.2.1 提取液脱色的单因素试验结果与分析
随着活性炭用量的增加,脱色效果增强。当活性炭用量达
到 3%时,再增加活性炭用量对脱色效果的影响已经不太明显。
这主要是由于活性炭用量 3%时大多数色素物质已经被吸附,
再增加用量对色素的影响已经不显著,只会增加对多糖的吸附
和活性炭的浪费。
随着脱色时间的增加,脱色效果增强。脱色时间 50min时
脱色效果最好。
随着脱色温度的升高脱色效果增强,这是由于温度的升高
可以增加色素分子的能量,促进色素分子与活性炭间的吸附。
脱色温度达到 70℃时,再增加脱色温度对脱色效果的影响已
经没有前面那么显著,考虑到低聚果糖的高温分解,选取 70℃
作为正交试验的因素。
随着 pH值的升高,脱色效果减弱;这主要是由于活性炭
在酸性条件下对色素分子起吸附作用,在碱性条件下对色素分
子具有解吸作用[9]。又因为当 pH值为 3,温度为 70℃时低聚果
糖易分解,所以选取 pH值大于 3。
2.2.2 脱色的正交试验与分析
表 2 脱色的正交试验因素水平编码表
从脱色的正交试验结果得到的最优脱色条件是:
A1B2C2D2 (活性炭添加量 2%,脱色温度 70℃,脱色时间
50min,脱色 pH3.3),透光率为 96.98%。通过极差最优化分析所
得到的最优脱色条件为:A1B3C2D3(活性炭添加量 2%,脱色
温度 80℃,脱色时间 50min,脱色 pH3.5)。各个单因素对脱色
效果影响的大小排列为:脱色温度 >活性炭用量 >脱色时间
>pH值。在两个最优条件下做脱色实验,经实验验证最佳脱色
工艺参数为活性炭添加量 2%,脱色温度 80℃,脱色时间
50min,脱色 pH3.5。在此条件下所得脱色液的透光率为
97.86%。
2.2.3 提取液的膜处理实验结果与分析
从表 3可以看出,过超滤膜对增加提取液的透光率具有一
定作用。且在膜两端压力为 5psi时,透光率的值最大。同时用
考马斯亮蓝显色测蛋白质,结果显示膜过滤能除去部分蛋白
质。因提取液中蛋白质含量很少只有 0.029%,故本试验没有考
虑除蛋白质,而直接用膜过滤的处理液进行高效液相色谱检
测。
表 3 过截留分子量为 5000的中空膜试验数据表
其中:1号实验为过膜前的样液,5号为截留液
2.3 处理液的高效液相色谱仪实验结果与分析[10]
由图 2和图 3可知,样品色谱图中出峰时间分别为 7.7、
9.2和 10.8min的峰与低聚果糖标准色谱图中蔗果三糖、蔗果
四糖和蔗果五糖出峰时间一致,据此,初步鉴定样品中含有蔗
果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖。
由图 3可知,样品色谱图杂峰少,样品比较纯。色谱图中单
糖含量比较高,这是由于雪莲果收获后在不同的储藏条件下,
低聚果糖的含量会出现明显的变化,低聚果糖会分解成蔗糖,
甚至还原成葡萄糖和果糖[11];同时在脱色过程中,低聚果糖也
会部分分解。
3 结论
以雪莲果为原料,用超声波辅助提取低聚果糖,根据单因
素和正交试验得出最佳工艺条件:提取时间 3h、提取温度
85℃、超声时间 5min、料液比 1:10,在此条件下,多糖的提取
率为 4.257%。由单因素试验和正交试验确定的最佳脱色工艺
参数:活性炭添加量 2%,脱色温度 80℃,脱色时间 50min,脱
色 pH3.5,在此条件下所得脱色液的透光率为 97.86%。超滤膜
可以提高脱色液的透光率还可以除掉部分蛋白质。处理液过高
效液相色谱仪,图谱显示所得提取液中含有蔗果三糖、蔗果四
糖、蔗果五糖,这正是低聚果糖的成分。
参考文献
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图 3 样品色谱图图 2 低聚果糖标准色谱图
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(上接第 4页)
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表 2 各地与紫菀相关的文献量
2.3 紫菀文献的主要期刊
刊载有关紫菀的期刊大约 87种,从表 3可见,紫菀主要与
药学有密切的关系,与其他学科渗透较少,这从一定程度上说
明紫菀药用价值受到极大重视,但数据也揭露紫菀研究的广
度、深度、高度不足。同时,文献所涉及的刊物种类很多,若只研
究几种核心刊物上的紫菀研究现象,难以对其进行详尽调查。
表 3 紫菀文献主要集中刊物
2.4 紫菀文献在不同分支学科中的分布:
表 4 紫菀文献主题类型分布表
由表 4可见,研究的学科领域主要集中在医学、生物学、化
学成分研究等方面,也一定程度涉及到栽培技术和行情分析等
方面。在化学成分的研究方面又以 2003年、2006年和 2007
年出现高峰,而之后出现下滑趋势,原因是 2005年紫菀的价格
上扬、市场的需求引起毫州、安国两地种植面积开始迅速恢复,
人们迅速关注其药用价值、药理方面,秦文杰等人先后发表了
几篇用薄层扫描法测定某制剂中紫菀酮的含量,给制药商提供
了大大的方便。紫菀在药理、药效方面的应用主要集中在制造
制剂,例如蝉蜕止咳颗粒、桑菊饮、复方桔梗颗粒、止咳清肺口
服液等,同时也可做治疗慢性支气管炎、肺心病、小儿咳嗽等汤
药的成分。
此外,紫菀在园林应用上的推广前景也很大,是点缀山水
园的极好花卉,在上海地区紫菀已是布置花境、花坛的重要角
色[1],故对其种植技术也有一定研究。
3 小结与建议
3.1 我国紫菀研究的特点
通过对刊载紫菀研究的计量分析,可知我国紫菀研究呈现
以下特点:
(1)对紫菀的研究起步晚,近十年发展增快
虽然紫菀的药用价值在唐代早被孙思邈在著作《少小婴孺
篇》用来治疗小儿咳嗽,但这并没有迅猛促进紫菀在各方面的
应用。2000年以后,人们逐渐认识到紫菀的作用,研究上也得
到了发展。
(2)对紫菀的研究部位分布不均匀
日前,我国对紫菀的研究主要集中在紫菀酮、槲皮素含量
测定,而很少涉及其具体部分如根茎叶或者其他化学成分,药
用价值的研究更少,笔者认为这可以成为今后对紫菀的研究方
向,综合研究和开发紫菀的各部分各方面的价值。
(3)紫菀的价值较高,应充分开发前景
紫菀可用作药物也可用作园林绿化之用,但紫菀的价值未
能充分应用。由表 4可看到紫菀的药理药用价值占 30%,化学
成分的测定也有很大比例的测定,但在其栽培、提取病虫和而
其他的应用尚未开发利用,说明紫菀仍有相当广阔的应用前
景。
参考文献
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