全 文 : 收稿日期:2010-06-20;修回日期:2010-08-08
基金项目:内蒙古医学院蒙药现代化研究项目(MX2005ZB020)
作者简介:张爱武(1973-), 女 ,内蒙古医学院附属医院药剂部副主任药师。
通讯作者:刘乐乐 ,教授 , 硕士研究生导师 , E-mail:liulele8821@sina.com内蒙古医学院药学院 , 010059
蒙药狗尾草果实中总糖的提取 、鉴定和含量测定
张爱武1 , 罗素琴 2 , 刘乐乐 2 , 高 超 2
(1.内蒙古医学院附属医院 药剂部 , 内蒙古 呼和浩特 010050; 2.内蒙古医学院 药学院)
摘 要:目的:从狗尾草果实中提取 、鉴定总糖 , 并建立狗尾草果实中总糖的含量测定方法。方法:用蒸馏水
做溶剂从狗尾草果实中回流提取总糖 ,并用剩余碘量法测定其总糖的含量。结果:测得狗尾草果实中总糖的含
量为 1.6783%。结论:本法操作简便 、迅速 , 结果准确可靠 , 可用于狗尾草果实总糖成分的提取 、鉴定和含量测
定。
关键词:狗尾草;总糖;提取;含量测定;剩余碘量法
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1004-2113(2010)05-0472-03
EXTRACTION, IDENTIFICATIONAND
DETERMINATIONOFTOTALSUGARFROM
SETARIAVIRIDIS(L.)BEAUV.RIPEFRUITS
ZHANGAi-wu, LUOSu-qin, LIULe-le, etal.
(DepartmentofPharmacy, AffiliatedHospital, InnerMongoliaMedicalColege, Hohhot010050China)
Abstract:Objective:ToextractandidentifytotalsugarfromSetariaviridis(L.)Beauv.ripefruits
anddeterminationthecontentoftotalsugar.Methods:TorefluxandextracttotalsugarfromSetaria
viridis(L.)Beauv.ripefruitsbythetypeofsolventwater.Indirectiodimetrywasappliedtodetermine
thecontentoftotalsugar.Results:Thecontentoftotalsugarwas1.6783%.Conclusion:Themethodis
simple, reliable, accurateandrapidforextraction, identificationandcontentdeterminationoftotalsugar
fromSetariaviridis(L.)Beauv.ripefruits.
Keywords:Setariaviridis(L.)Beauv;totalsugar;extraction;contentdetermination;indirectio-
dimetry
“狗尾草 ”为禾本科植物狗尾草(Setariaviridis
(L.)Beauv.)的干燥成熟的果实。狗尾草别名毛
莠莠 、光明草 、阿罗汉草 、狗尾半支 、犬尾草 、西日 -
达日。一年生草本 ,高 20 ~ 60cm。秆直立 ,单生或
疏丛生 。叶鞘松弛 ,叶舌具纤毛;叶片扁平 ,条形或
披针形 ,长 10 ~ 30cm,宽 2 ~ 10mm,绿色 ,先端渐
尖 ,基部渐狭 ,两面粗糙。圆锥花序紧密圆柱状 ,直
立或略弯 ,长 2 ~ 8cm,宽 4 ~ 8mm;刚毛长于小穗 2
~ 4倍 ,绿色或黄色或淡紫色 ,宿存;小穗椭圆形 ,
长2 ~ 2.5mm,颖透明 ,第一颖卵形 ,较短 ,第二颖与
小穗近等长;第一外稃与小穗等长 ,内稃狭窄 ,第二
外稃具皱纹 。颖果长圆形 。花果期 7 ~ 9mo。生于
·472· ActaAcadMedNeiMongol Oct.2010 Vol.32 No.5DOI :10.16343/j.cnki.issn.2095-512x.2010.05.003
撂荒地 、田野 、山坡 、沙地 ,分布于我国各地区;世界
温带和热带 。夏 、秋季采收全草 ,秋季谷粒成熟时
采收果实 ,除去杂质 ,晒干备用 。全草入中药 ,果实
入蒙药 ,蒙药名为乌仁素勒。蒙药味甘 、涩 ,性温 、
轻 、燥 。止泻 。可治久泻腹痛 、嗳气 [ 1] 。狗尾草具
有除热 、祛温 、消肿的功效 ,在民间作为药物应用
非常广泛 [ 2] 。蒙药材狗尾草虽然药用历史悠久 ,
但是对其化学成分的研究较少。罗素琴等 [ 3]对
狗尾草的质量检查标准做了实验研究 ,确定了水
分 、总灰分 、酸不溶灰分和浸出物的检查限度 。
巩江等 [ 4]利用 GC-MS色谱联用技术分析确定
了狗尾草地上部分挥发性化学成分。本实验拟
提取狗尾草成熟果实中的总糖 ,并用剩余碘量法
测定其总糖含量 ,为狗尾草资源的开发和研究提
供实验参考 。
1 实验材料
1.1 材料
狗尾草药材采集于内蒙古蛮汉山及大青山地
区(由内蒙古医学院药学院药用植物教研室乔俊
缠教授鉴定为禾本科植物狗尾草 (Setariaviridis
(L.)Beauv.)。
1.2 试剂
石油醚 、乙醇 、α-萘酚 、硫酸 、氢氧化钠等 ,所
有试剂均为分析纯或化学纯;碘滴定液(内蒙古药
品检验所);硫代硫酸钠滴定液(内蒙古药品检验
所);自制蒸馏水 。
1.3 仪器
MA260S电子分析天平 (上海第二天平仪器
厂), SHZ-3型循环水真空泵(河南巩义市英峪电
子仪器厂), AS3120超声波清洗仪(天津奥特塞恩
斯有限公司), 766型远红外烘箱(上海跃进医疗器
械厂), HH-S型电热恒温水浴锅(河南巩义市英
峪予华仪器厂), DHT型磁力搅拌恒温电热套 (山
东鄄城新天地实验仪器设备厂),玻璃仪器 (北
京)。
2 方法与结果
2.1 总糖供试品溶液的制备 [ 5]
将狗尾草干燥成熟果实 ,除去杂质 ,捣碎 ,精密
称定 ,取粗粉 5g置于 100mL锥形瓶中 ,加入 30mL
石油醚 ,封口 ,超声脱脂 30min后 ,抽滤 ,滤液倒入
回收瓶 ,将脱脂的药材晾干后置于 250mL圆底烧
瓶中 ,精密加入蒸馏水 150mL,称定重量 , 90℃ ~
100℃水浴中微沸提取 2h,放冷 ,再称定重量 ,用水
补足减失的重量 ,摇匀 ,抽滤 (需经常更换滤纸),
回收滤液 110mL左右 ,备用 。
2.2 总糖供试品溶液经酸水解
精密量取滤液 100mL置碘量瓶中 ,加入 25mL
0.5mol/L硫酸 ,置水浴中微沸水解 4h,放冷 ,用氢
氧化钠溶液调至中性 。
2.3 样品中糖的定性鉴定 [ 6]
(1)α-萘酚试液(Molish)反应:取总糖供试
品溶液 1mL,加入 10%α-萘酚乙醇溶液 3滴 ,摇
匀 ,沿管壁加硫酸 0.5mL,两液接界处显紫红色环 。
(2)碱性酒石酸铜试验 (Fehling)反应:取
“2.2”项下供试品溶液 2mL,加入新配制的碱性酒
石酸铜试液即斐林试剂 2mL, 置沸水浴中加热
10min,生成棕红色沉淀。
2.4 供试品溶液中还原糖的含量测定[ 7 ~ 10]
精密量取 “2.2”项下经酸处理的溶液25.00mL,
置 250mL碘瓶中 ,精密加入碘滴定液(0.1mol/L)
50.00mL,逐滴加氢氧化钠试液(0.1mol/L)30mL,边
加边剧烈振摇 ,溶液由黑蓝色变成无色 ,密塞 ,在暗
处放置 10min。然后加硫酸(0.5mol/L)6mL,摇匀。
立即用硫代硫酸钠标准溶液(0.1mol/L)滴定 。近终
点时 ,加淀粉指示液 2mL,继续滴定至蓝色消失。记
下读数至近终点时 ,平行测定 3次 ,同时作空白滴定
进行校正。
3 样品中总糖的含量测定[ 11]
狗尾草果实总糖含量%=
CNa2S2O3[ VNa2S2O3(空白)-VNa2S2O3(回滴)] ×
m(C6H12O6·H2O)
2
×175
25
W ×100%=1.6783%(n=3)
式中:W为样品重(mg), CNa2S2O3为硫代硫酸 钠标准溶液的浓度(0.0983mol/L), VNa2S2O3为硫
·473·内蒙古医学院学报 2010年 10月 第 32卷 第 5期
代硫酸钠标准溶液消耗的体积(mL), M(C6H12O6·
H2O)为葡萄糖的摩尔质量。实验结果见附表 。
结果:狗尾草成熟果实中总糖含量为1.6783%。
附表 狗尾草总糖含量测定结果(n=3)
Tab. Determinationresultsof
thecontentoftotalsugar(n=3)
样品 VNa2S2O3(回滴)(mL) 总糖含量(%)
1 0.25 1.6783
2 0.22 1.7202
3 0.28 1.6364
4 讨论
多糖常用的提取方法有:常规水提法 、酸提取
法 、碱提取法 、超临界流体萃取等 。酸提取法易引
起糖苷键断裂。碱提取法虽可提高多糖的收率 ,但
提取液中含有其他杂质如蛋白质 ,粘度过大 ,过滤
困难 ,碱提取过程中易使多糖降解。由于糖类的化
合物分子量较大 、羟基多 、极性大 ,用纯二氧化碳提
取产率低 ,且设备复杂 ,运行成本高 ,所以使得超临
界流体萃取的应用受到限制 [ 12] 。参考其他中草药
多糖的提取方法 ,本实验对总糖的提取采用水提取
法 [ 13] ,总糖是极性大分子化合物 ,遵循相似相溶原
则 ,水是强极性溶剂 ,对植物组织的穿透力强 ,且工
艺成本低 ,使用安全 ,适用于总糖的浸提。
总糖含量测定的常用方法有苯酚 -硫酸
法 [ 13] 、蒽酮 -硫酸法 [ 14] 、DNS法[ 15] 和剩余碘量
法 ,比色法中显色反应与室温 、苯酚和蒽酮浓度及
硫酸加入速度有关 ,为提高精确度 ,保证测定结果
准确 ,均需随样品同时测定葡萄糖的标准曲线 ,利
用标准曲线测定计算总糖含量的校正系数。剩余
碘量法既可测定总糖 ,又可测定还原糖 ,方法简便 、
快速 ,滴定终点明显。不足之处 ,该法只能测定总
糖水解后溶液中还原糖的含量(以葡萄糖计),所
以测定的是总糖的近似值 。
测定还原糖的含量应使用新提取的滤液 ,以防
有效成分因久置而分解。
由于提取液中溶解了大量糖 ,故抽滤较困难 ,
需不断更换滤纸 ,以加快抽滤速度。
注意滴加氢氧化钠溶液的速度不宜快 ,否则测
定结果偏低 。
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(责任编辑:额尔德木图)
·474· ActaAcadMedNeiMongol Oct.2010 Vol.32 No.5