全 文 ：2011年第05期
（总第255期）
吉 林 农 业
JILIN AGRICULTURE
NO.05，2011
（CumulativetyNO.255）
140 JILIN AGRICULTURE
月腺大戟内生菌分离纯化及抑菌活性筛选
叶 静，龙 菊，邬贤芳，何映霞
（安顺学院化学与生物农学系，贵州 安顺 561000）
摘要：从月腺大戟的根、茎、叶中分离出内生菌41株，细菌18株、真菌23株。7株供试菌用滤纸片法分别对内生菌发酵液进行了
抗菌活性的研究。结果表明：月腺大戟内生菌对7种供试菌有一定的抑菌活性，内生真菌与内生细菌的抑菌活性存在差异，其中YJX1、
YJX6和YJZ15对供试菌具有普遍抑菌作用。
关键词：月腺大戟；内生菌；抑菌活性
中图分类号：S791.49 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-05-0140-2
内生菌指那些在其生活史中的某一段时期生活在植物组织内
部，但不引起植物组织明显症状改变的菌类[1]。内生菌主要包括
内生细菌、内生放线菌和内生真菌。内生菌普遍存在于植物体内
[2]。月腺大戟为大戟科大戟属植物，以肥大块根入药，有抑菌杀
虫之功效，大戟属植物具有抗肿瘤、抗结核杆菌等作用[3]。依据
内共生理论，分离了月腺大戟内生菌，探讨其内生菌的种类和组
成，并筛选了其具有抑菌活性的菌株。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试植物 月腺大戟采自淮北市相山，采后带土装入保鲜袋
中。
1.1.2 供试菌 细菌：稻瘟病菌、茄子青枯病菌、大肠杆菌、金黄
色葡萄球菌；真菌：小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、棉花黄萎病
菌。
1.1.3 分离及培养内生菌培养基[3,4,5] 牛肉膏蛋白胨固体培
养基（NA）、高氏I号固体培养基、马铃薯葡萄糖固体培养基
（PDA）、MS培养基、查氏培养基和促孢培养基用于真菌的初步鉴
定、牛肉膏蛋白胨液体培养基、PDA液体培养基。
1.2 方法
1.2.1 月腺大戟内生菌的分离和纯化[6,7，8] 蒸馏水反复冲洗新鲜
月腺大戟，并用小试管刷轻轻刷掉根部表面的死皮。将根、茎切
成0.5cm的小长块，叶剪成0.5cm×0.8cm 的小块，在75%乙醇中快
速润洗40s左右，无菌水漂洗3次后用0.1%升汞试剂消毒，根、叶浸
泡消毒3min，块茎5min，再用无菌水冲洗3遍，用灭菌的滤纸片吸
干水分。分别置于加有链霉素NA、PDA、马丁氏、高氏I号固体平板
及MS培养基上，28℃恒温培养，待其边缘长出菌落后，挑取细菌于
NA平板上、真菌于PDA平板上培养，细菌培养温度为28℃，真菌为
37℃。经多次分离纯化后接种到相应培养基的试管斜面中，于4℃
保存。设置对照实验，取最后一次表面消毒冲洗材料后的无菌水
0.1mL涂布于各种分离培养基平板上，28℃培养作为对照，若对照
平板无菌落长出，表明表面消毒彻底，即证明分离到的是内生菌。
1.2.2 内生菌发酵液的制备 摇床发酵法。在250mL三角瓶中装量
50mL液体发酵培养基，将分离出的内生细菌接种至牛肉膏蛋白胨
液体培养基中，温度36℃、摇床转速150r／min，培养1-3d；内生
真菌接种至PDA液体培养基中，28℃，150r／min培养时间4-5d。
提取发酵液，低温离心，取上清液用于抗菌活性测定。
1.2.3 菌悬液的制备 7种供试菌种进行斜面活化，扩大培养，然
后用无菌生理盐水配制成106-107 CFU／mL菌悬液，备用。
1.2.4 内生菌抑菌实验 抑菌初筛采用滤纸片法。分别吸取0.5ml指
示菌菌悬液于冷却至50℃的NA和PDA培养基中，倒平板，冷却凝固
后备用。用无菌滤纸片沾取月腺大戟内生菌菌株的代谢液，贴于混
有供试菌液的平板中，重复3次，将此平板分别置于28℃和37℃恒
温箱中培养3d，测量抑菌圈直径(无菌液体培养基作空白对照)。
2 结果
2.1 内生菌的分离
从月腺大戟根、茎、叶上共分离到细菌18株、真菌23株，不
同组织部位分离得到的内生菌种类和数量存在一定的差异。月腺
大戟根中内生菌数量的分布最多，叶中数量最少；同时，在根、
茎和叶中均是内生细菌数量多于真菌，即内生细菌和真菌呈现依
次递减的趋势(见表1)。
表1 月腺大戟内生菌的组成（株）

2.2 抑菌试验
从月腺大戟中分离出的41株内生菌，通过对7种供试菌进行
滤纸片法初筛试验，发现18株内生细菌对所有供试菌均有不同程
度的抑制作用。其中，YJX1、YJX6对7种供试菌均有很强的抑制作
用，其最大抑菌圈直径可达1.9cm。与内生细菌不同，23株内生真
菌中只有11株对7种供试菌有抗菌活动，占真菌数量的47.83%，
其余菌株无抑菌作用。其中，YJZ15对7种供试菌均有较强的抑菌
活性。YJZ10对小麦赤霉病菌有很强的抑制作用，抑菌圈直径达
2.1cm。（见表2）
表2 内生细菌对7种供试细菌的抑菌试验

内生菌类型 根 茎 叶 合计
细菌 9 4 5 18
真菌 11 8 4 23
合计 20 12 9 41
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3 讨论
有研究表明，内生菌广泛分布于植物体根、茎、叶、花、果
实和种子等器官、组织的细胞或细胞间隙。本试验从月腺大戟植
株根、茎中分离出内生细菌和真菌数量均较多，而从叶中分离出
的内生菌较少。
本研究中抑菌活性实验所用方法为滤纸片法，操作简单，适
合大量菌株的抑菌活性检测。研究中所用的内生菌发酵液为粗提
液， 其成分较为复杂，不能确定具有抑菌活性的物质成分，可通
过提纯分析以及高效液等手段相进一步研究。实验中的供试菌种
来自微生物学实验室，随机选取部分病原菌进行研究，不能测出
对所有病原菌的抑制作用，本实验只是进行了初筛，为进一步复
筛奠定了一定的基础，有待进一步研究。
研究显示，月腺大戟各组织内存在着丰富的内生菌，不同组
织内生菌的数量、种类有一定差异，在具有抑菌活性的菌株中，
细菌占的比例最高。由抑菌实验推测，月腺大戟内生菌能产生丰
富的次级代谢产物，并对多种病原菌均有不同程度的抑制作用，
为筛选具有抑菌活性的物质提供丰富的资源库。
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作者简介：叶静（1983-），女，安顺学院化学与生物农学系
讲师，硕士研究生，研究方向：微生物基因工程。
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作者简介：赵洪彬（1982-），男，农艺师，主要从事作物高
产栽培方面的研究。
通讯作者：庄文锋。
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