全 文 ：第 20卷 第 8期
Vol.20 No.8
2014年 8月
August.2014Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
* 基金项目：恩施土家族苗族自治州科技局项目-夜交藤提取
物对大鼠完全性脑缺血再灌注损伤保护作用的研究（201309）
夜交藤(Polygoni multiflori Caulis)，又名首乌藤，为蓼科
植物何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)的干燥藤茎 [1]，性
微温、味苦，具有养心安神、祛风湿等功能[2]，用于治疗神经衰
弱、失眠、多梦、全身酸痛、贫血等症[3]。夜交藤主产于我国河
南、湖北、广西、广东、贵州等省，分布范围广，药用资源十分
丰富[4]。其化学成分主要有黄酮、蒽醌、甾醇、鞣质，以及蛋白、
粗脂肪、膳食纤维等[5]。黄酮类成分具有抗炎、抗癌、抗辐射、
提高机体免疫力、解热镇痛以及保肝护肝等作用[6]。目前尚未
见夜交藤总黄酮提取物制备工艺研究，本文结合前期笔者完
成超声提取工艺基础上，利用大孔树脂对其黄酮类成分富集，
为制备夜交藤总黄酮提取物提供参考，对于进一步开发利用
夜交藤资源具有重要意义。
1 仪器、试剂与试药
KM-1030D科盟台式超声波清洗机（广州市科洁盟实验
仪器有限公司），UV1100紫外分光光度计（天美科技有限公
司），BS124S型电子天平（上海美谱达仪器有限公司），RE2000
旋转蒸发仪（成都康宇科技有限公司），循环水式多用真空泵
SHB-III（郑州长城科技工贸有限公司），芦丁标准品（成都植
标化纯生物科技有限公司，批号：PSC0724)，恒温水浴锅
W201B（上海申胜生物技术有限公司）。D101、AB-8、HPD-
600、D-301、S-8型号大孔树脂、95%乙醇、浓盐酸、氢氧化钠
等，以上树脂填料及试药均购自成都科龙试剂厂。
实验用夜交藤药材购自湖北恩施州中药材公司，经湖北
民族学院中药鉴定教研室鉴定为蓼科植物何首乌的干燥藤
茎，其中黄酮粗提物由实验室自制。
2 实验方法与结果
2.1 标准曲线的绘制 取芦丁对照品适量，用甲醇溶解配制
成浓度0.4 mg·mL-1的标准贮备液，分别取芦丁标准贮备液
0.2、0.5、1、1.5和2 mL置于10 mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠
0.5 mL放置10 min，再加10%硝酸铝0.1 mL放置5 min，加4%
NaOH 5 mL后加甲醇至刻度，摇匀。对照品与供试品分别进
行全波长扫描，二者在5-10 nm处均有最大吸收，且相差在2
nm之内。以510 nm处测得的吸收度A对浓度C回归，得回归方
程：A=12.015C+0.0107，r=0.9994，线性范围：8-80（μg·mL-1）
2.2 总黄酮粗提物的制备 称取适量夜交藤粉末100 g，加
入2500 mL 85%的乙醇，在超声功率为400 W时于40℃超声提
取2次，20 min/次。过滤，滤液减压浓缩至无醇味，即得生药
浓度为0.2 g·mL-1的夜交藤总黄酮提取液（黄酮含有量约为
34 mg·mL-1）。
夜交藤总黄酮提取物工艺研究*
黄信全1，雷 微1，段孝红1，蔡 娜1，王生言1，李玉山2（通讯作者）
（1.湖北恩施州民族医院，湖北 恩施 445000；2.湖北民族学院，湖北 恩施 445000）
[摘要] 目的:对夜交藤总黄酮提取物工艺进行研究，以期建立富集总黄酮的工艺方法。方法：利用大孔树脂对夜交藤黄酮类成
分富集纯化。结果HPD-600树脂装柱，上样浓度为17 mg·mL-1，上样容量为34 mg·g-1，先0.1 mol/L NaOH和20%乙醇混合溶液洗脱除
杂，后用0.1mol/L NaOH和85%乙醇混合溶液，洗脱流速1mL·min-1，洗脱4倍柱体积，最后收集洗脱液减压浓缩至干得提取物。此工艺
可使其总黄酮纯度可达68.34%，收率可达48.64%，结论 利用该工艺可以富集纯化夜交藤总黄酮成分，该工艺稳定、具有可重复性。
[关键词] 夜交藤；总黄酮；工艺研究
[中图分类号] R284.2 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X（2014）08-0082-02
Study on Extract Technology of Total Flavone in Polygoni Multiflori Caulis
HUANG Xin-quan1, LEI Wei1, DUAN Xiao-hong1, CAI Na1, WANG Sheng-yan1, LI Yu-shan2(Corresponding Author)
(1. The National Hospital of Enshi, Enshi Hubei 445000;2. Hubei Institute for Nationalities, Enshi Hubei 445000)
[Abstract] Objective: To establish methods of purification process of total flavonoids, according to the study on extract
technology of total Flavone in Polygoni Multiflori Caulis. Methods: Optimization of purification of Caulis Polygoni Multiflori
flavonoids with macroporous. Results: The HPD600 macroporous resin among five types of resins was found with the best purifi－
cate efficiency. The best technical data:sample concentration is 17 mg·mL-1, elution rate 1 mL·min-1, sample capacity 34 mg·g-1;
After eluted with 30 mL 0.1 mol/L NaOH&20% ethanol and 90 mL of 0.1 mol/L NaOH &85% ethanol; The yield of total
flavones was 48.64% and the purity was 68.34%.Conclusion: The HPD600 macroporous resin could be used to purify the total
flavonoids of Polygoni multiflori Caulis. The process is stable and reproducible.
[Key words] Polygoni multiflori Caulis; Total flavone; Technology research
82
DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2014.08.029
Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
第20卷 第8期
Vol.20 No. 8
2014年 8月
August.2014
2.3 大孔树脂优选 准确称取根据文献[7]预处理好的5种大
孔吸附树脂各20 g，装入树脂柱中，分别吸取等量提取液，通
过5种不同型号树脂柱，考察其动态吸附效果。结果显示，
HPD-600大孔树脂对夜交藤总黄酮成分的吸附和解吸能力
较好，是较合适的纯化树脂。（见表1）
表 1 5种大孔树脂对总黄酮和动态吸附率和解吸率
树脂类型 D101 AB-8 HPD-600 S-8 ADS-8
吸附率（%） 85.34 89.67 95.21 68.31 88.69
解吸率（%） 78.21 88.67 93.21 67.38 84.27
2.4 HPD-600吸附和解吸因素的确定
2.4.1 最大上样量考察 称取HPD-600树脂50 g，装柱，加入
夜交藤提取液100 mL进行交换吸附，设置流速为1 mL·min-1
收集流出液，每10 mL收集1次，共收集10份，制成总黄酮制备
液，依次测定。当流出液体积为10~40 mL时，为树脂吸附阶
段。当流出液为50 mL时已有大量药液泄露，在70 mL时树脂
已达饱和吸附，流出液中总黄酮浓度趋于稳定，故选择最大
上样量为50 mL，此时药液泄露较少且树脂吸附充分，此时树
脂的动态吸附容量为34 mg·g-1。（见图1）
图 1 HPD-600型大孔树脂对夜交藤总黄酮成分的
动态吸附曲线
2.4.2 pH对HPD-600树脂静态吸附黄酮提取液的影响 称
取3份HPD-600树脂各50 g，置于100 mL三角瓶中。分别量取
夜交藤提取液3份各20 mL，用0.1 mol/L HCl和0.1 mol/L
NaOH调节pH值分别至5、9、7，分别加入3份树脂中，置于25℃
恒温水浴箱中，间隔30 min振荡1 min，60次/min，2 h后抽滤，
滤液测定吸光度，计算吸附率（%），显示上样液呈中性时HPD-
600树脂对其中黄酮类成分的静态吸附效果较好。（见表2）
表 2 不同pH的HPD-600树脂对总黄酮的静态吸附量和吸附率
pH 9 7 5
吸附率（%） 79.98 94.87 58.36
2.4.3 流速对HPD-600树脂交换吸附容量的影响 称取4份
干燥的HPD-600树脂各50 g，分别加入20 mL中性夜交藤提取
液，考察流速2、4、6、8 mL·min-1对HPD-600树脂交换吸附夜
交藤总黄酮的影响。分别收集流出液，计算吸附率。显示流速
为4 mL·min-1时有利于HPD-600树脂交换吸附。(见表3)
表 3 不同流速的流出液中总黄酮吸附率
流速/mL·min-1 2 4 6 8
吸附率/% 68.67 79.98 58.36 28.35
2.4.4 上样浓度对HPD-600静态交换吸附的影响 称取5份
吸干其表面水分的HPD-600树脂各50 g湿法装柱，将总黄酮
浓度分别为34、17、8.5、4.25、2.13 mg·mL-1的提取液各50 mL
分别以1 mL·min-1通过树脂柱，结果显示，树脂对夜交藤总黄
酮的吸附容量先增加后减少，随着上样量浓度的提高，单位
量树脂可吸附的总黄酮量增加，因而树脂吸附容量提高。但
是，随总黄酮浓度的进一步提高，树脂的目标吸附量反而会
下降，因此选择上样液总黄酮浓度为17 mg·mL-1为宜。
2.4.5 洗脱液配比对HPD-600解吸的影响 称取5份已交换
吸附夜交藤总黄酮的HPD-600树脂各50 g，分别用100 mL的
85％乙醇、0.1 mol/L NaOH的85％乙醇溶液、0.1 mol/L HCl的
85%乙醇溶液洗脱，洗脱2次，每次50 mL溶液。加入洗脱液后
各振荡1 min，60次/min，静置30 min滤过，合并滤液，测定吸光
度、计算洗脱液中总黄酮浓度，比较洗脱率。结果：0.1 mol/L
NaOH和85%乙醇＞0.1 mol/L HCl和85％乙醇＞85％乙醇。因此，
选择0.1 mol/L NaOH和85%乙醇作为洗脱剂。
2.4.6 碱液不同浓度对树脂吸附影响 各取50 g已交换吸附
夜交藤总黄酮的HPD600树脂4份装柱，分别用0.05、0.10、0.20、
0.4 mol/L NaOH溶剂的85%乙醇100 mL作为洗脱剂洗脱。分别
收集洗脱液，制成总黄酮制备液，计算洗脱液中总黄酮解析率。
显示NaOH溶液浓度为0.1 mol/L时，洗脱效果较好。（见表4）
表 4 不同浓度碱液洗脱剂下总黄酮含量测定结果
NaOH（mol/L） 0.05 0.10 0.20 0.40
解析率/% 62.34 78.35 65.32 67.32
2.4.7 洗脱溶媒的确定 取50 g HPD-600树脂装柱，精密吸
取17 mg·mL-1夜交藤提取液20 mL湿法上样于树脂柱上，分别
用0.1 mol/L NaOH的20%、30%，35%，40%，45%、50%、55%、
60%、65%、70%、75%、85%、95%乙醇溶液为洗脱剂，用量均
为100 mL，按1.0 mL·min-1的流速进行洗脱。分别收集洗脱液，
结果显示，0.1 mol/L NaOH和20%乙醇洗脱时总黄酮含量较低，
0.1 mol/L NaOH和65%乙醇不能完全洗脱，0.1 mol/L NaOH和
85%乙醇洗脱，总黄酮含量明显减少，因此洗脱溶媒确定
为：0.1mol/LNaOH和20%乙醇溶液洗脱除杂，后用0.1mol/L NaOH
和85%乙醇溶液洗脱。
2.4.8 洗脱剂用量的确定 取50 g HPD-600树脂装柱。分别
加入含夜交藤总黄酮浓度为17 mg·mL-1提取液20 mL，待吸附
后，用0.1 mol/L NaOH和20%乙醇溶液洗脱除杂，直至洗脱液
颜色变浅、固形物含量不再增加，再用0.1 mol/L NaOH和85%
乙醇溶液冲洗至流出液接近无色，收集洗脱液，每10 mL作为
一个流份，共收集10份，计算总黄酮浓度。结果显示，在收集
到第3份流出液时，黄酮类成分开始被洗脱，在第13份时，总
黄酮几乎洗脱完毕，故认为用0.1 mol/L NaOH和20%乙醇溶
液30 mL洗脱除杂，后用90 mL 0.1 mol/L NaOH和85%乙醇溶
液洗脱即可。（如图2）
图 2 夜交藤总黄酮洗脱曲线图
2.4.9 工艺验证 称取HPD-600树脂100 g湿法装柱，分别加
入总黄酮浓度为17 mg·mL-1的中性提取液100 mL进行动
态交换吸附，至吸附均匀后，先用0.1 mol/L（下转第86页）
83
第 20卷 第 8期
Vol.20 No.8
2014年 8月
August.2014Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
NaOH和20%乙醇溶液30 mL洗脱除杂，后
用90 mL 0.1 mol/L NaOH和85%乙醇溶液以1 mL·min-1洗脱
流速洗脱，收集洗脱液，此操作平行试验3份，计算平均收率
和总黄酮纯度，其平均收率为48.64%，纯度达到68.34%，
RSD%分别为2.34%，2.47%。表明此工艺条件稳定可行。
3 讨 论
本实验分别比较了5种不同极性大孔树脂的吸附率和解吸
率，最后选择HPD-600树脂，同时对影响HPD-600树脂吸附因
素如上样量、pH值、洗脱流速、浓度、洗脱剂的种类等考察，从而
得到纯化工艺参数，HPD600树脂对夜交藤总黄酮具有较大的
吸附量，易吸附、易解吸，试验中确定的总黄酮纯化工艺可使其
总黄酮纯度达到68%，这为夜交藤有效部位开发提供借鉴。
笔者在前期有关夜交藤提取工艺试验中已考察了芦丁
和供试品最大吸收波长，确定了λmax510 nm作为测定波长；
为了确保不同洗脱液对有效成分黄酮是否有影响，笔者对不
同洗脱液做了紫外扫描，发现低浓度洗脱液对黄酮类成分影
响不大，但是浓度较大时发现洗脱液颜色较深，为了不破坏
夜交藤黄酮类成分，笔者在选取洗脱液浓度时设定在0.05至
0.4 mol/L为宜。树脂装柱上样后，用水冲洗仅洗脱掉糖类、水
溶性杂质，无法去除一些脂溶性色素，而用低浓度醇冲洗可
去除这类杂质，但是除杂的同时也会损失部分黄酮成分，考
虑既要尽量除杂又要最大限度富集有效成分，决定在洗脱前
用0.1 mol/L NaOH&20%乙醇30 mL溶液洗脱除杂。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：中国医药科
技出版社，2010：248
[2] 薛咏梅，李智敏，孙赘，等.夜交藤的研究与开发进展［J］.
云南中医学院学报，2008，31（1）：64-65
[3] 李金花，农石生，黄锁义.分光光度法测定夜交藤中多糖
[J].理化检验及化学分册，2012，(48)9：1115
[4] 王付荣，周洪雷.夜交藤的化学成分研究[J].中医药学报，
2008，(36)2：49
[5] 叶春，范家佑，张小明.何首乌嫩茎叶营养成分分析及评价
[J].仪器与发酵工业，2004，30(1)，127-130
[6] 金汝城，谢伟雪，逢艳.大孔吸附树脂对大黄总蒽醌类物质
的吸附纯化[J].兰州大学学报：医学版，2006，31(14)：47-50
（收稿日期：2013-11-08 编辑：李海洋）
规定范围内（通常30-40滴·min-1），因而在未成年人中未发现
因输注速度过快而造成ADRs的报告。（3）与联合用药关系
密切：131例ADRs报告中，因联合用药而出现ADRs占报告总
数的54.20%；在71例联合用药中，中西药合用61例，占联合用
药数的85.92%，与文献报道类似[4，6]。联合用药主要以痰热清
或热毒宁与抗生素组间联合为主，其中与头孢菌素类组间联
用最多，共47例（占66.20%），与大环内酯类及林可类组间联
用各3例，另有12例与氯化钾、氯化钠等电解质同组使用。由
于中药注射剂成分复杂，其中的大分子有机物均以胶态形式
存在于药液中，当与氯化钾、氯化钠等电解质合用时，可能会
因盐析作用产生大量不溶性微粒，从而增加不良反应的发
生率；在与西药配伍使用时，更易产生配伍变化，影响药物疗
效并产生ADRs。有研究表明[5，7]：联合用药组ADRs的构成比为
对照组的13倍；痰热清注射液不宜与头孢吡肟、阿奇霉素等
抗生素配伍使用。（4）与患者过敏体质有关。通常过敏体质者
在使用药物时易出现不良反应，中药注射剂也不例外。本组
131例中，患者既往有ADRs过敏史的8例（占总数的6.11%），
不详者94例（占总数的71.75%），高于相关报道 [4]。（5）溶媒选
择不当也是中药注射剂发生ADRs的一个重要原因。有研究发
现ADRs组溶媒选择不合理的比例接近对照组的4倍，存在明
显差异 [5]。但在本次调查中未发现因溶媒选择不当而导致
ADRs的报告，这与我院“合理用药自动提示系统”[8]的开发应
用及临床药师反复干预有关。
中成药和所有药物一样，是一把双刃剑，在防病治病的
同时会带来许多不良反应。我院作为西医西药居多的二级甲
等综合性医院，更应严格按照《中成药临床应用指导原则》，
将西医辨病与中医辨证相结合，严格掌握适应症正确选药。
医生处方前应详细询问过敏史，对有过敏史及婴幼儿、老年
人、孕妇及肝肾功能不全等特殊人群更要慎重用药，并遵循：
（1）能口服给药的不肌内注射，能肌内注射给药的不静脉注
射或滴注给药，不超剂量使用；（2）能用单方制剂的不选用复
方制剂；能用一种药物的尽量不多药合用，尤其是中药注射
剂，避免与其它药物特别是西药联用。当两组或两组以上输
液治疗时，应现配现用并注意多组输液的给药顺序，最好将含
有中药注射制剂的一组液体先使用，以便发生过敏反应时易
于鉴别致敏药物。当与抗菌药物联用时，在两组液体先后交替
时，以50-100 mL两药均适宜的溶媒冲洗输液器或更换输液
管，避免因两组药液直接接触引发的理化变化而产生ADRs，用
药期间实施全程监测，一旦出现ADRs及时停药对症处理。
总之，只要医药护各部门严格按照《中成药临床应用指
导原则》辨证用药，严格按照药品说明书选择溶媒，并以正确
的剂量和浓度、恰当的给药途径合理使用中成药，那么，由此
引发的ADRs是完全能避免或减少的。
参考文献
[1] 张桂芬，范红春，殷卫清.2006-2008年我院476例药品不良
反应报告分析[J].中国药师，2009，12(12)：1807-1809
[2] 朱志忠，范红春，唐叶秋，等.我院 267例ADRs报告回顾性
分析[J].中国医院用药评价和分析，2010，10(3)：266-269
[3] 严汝庆，刘燕飞.153例中药制剂不良反应报告分析[J].中
医药导报，2013，19(6)：81-83
[4] 张惠霞，陈建玉，宋成.3414例中药注射液不良反应分析[J].
中国药物警戒，2006，3(4)：112-114
[5] 朱立勤，徐彦贵，王屏，等.中药注射剂不良反应发生的原
因分析[J].中国药房，2007，18(3)：215-218
[6] 王令，程华军.我院中医门诊患者中药与西药联用情况调
查[J].中国药房，2010，21(16)：1517-1518
[7] 董敏，宋兆立.痰热清注射液临床应用需注意的几个问题
[J].实用药物与临床，2009，12(4)：270-271
[8] 朱志忠，范红春，殷卫清，等.《合理用药自动提示系统》的
设计和应用[J].药学与临床研究，2010，18(4)：398-402
（收稿日期：2013-11-08 编辑：李海洋）
（上接第83页）
86