全 文 ：China Pharmaceuticals
2016年 8月 5日 第 25卷第 15期
Vol． 25, No． 15, August 5, 2016
*蚌埠医学院研究生科研创新计划项目，项目编号：Byycx1554。
高效液相色谱法同时测定不同产地阔叶十大功劳
叶中 3 种生物碱类成分的含量*
赵 丹 1，邓祖磊 2，崔 田 2，葛德洲 2，马 涛 1，来李娟 1
（1． 蚌埠医学院药学系，安徽 蚌埠 233000； 2． 安徽省蚌埠市食品药品检验中心，安徽 蚌埠 233000）
摘要：目的 建立同时测定阔叶十大功劳叶药材中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的高效液相色谱（HPLC）法，并对不同产地阔叶
十大功劳叶药材进行测定与比较。 方法 色谱柱采用 Welch Ultimate LP － C18 柱 ( 150 mm × 4． 6 mm，5 μm ) ，流动相为 0． 05 mol ／ L 磷酸二
氢钾（用磷酸调节 pH至 3． 0） －乙腈（73 ∶ 27），流速 1． 0 mL ／ min，检测波长 346 nm，柱温 30 ℃ 。结果 盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱
色谱峰达到基线分离，质量浓度分别在 5． 328 ～ 266． 4 μg ／ mL（ r ＝ 0． 999 9），3． 68 ～ 184． 0 μg ／ mL（ r ＝ 0． 999 9），2． 412 ～ 120． 6 μg ／ mL
（ r ＝ 0． 999 8）范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率分别 99． 17％ ( RSD ＝ 0． 35％ ， n ＝ 6 )，98． 97％ ( RSD ＝ 0． 65％ ， n ＝ 6 ) ，
99． 36％ ( RSD ＝ 0． 44％ ， n ＝ 6 ) 。 结论 该法操作简单、准确可行、重复性好，可用于阔叶十大功劳叶药材的质量控制。
关键词：阔叶十大功劳叶；盐酸小檗碱；盐酸巴马汀；盐酸药根碱；高效液相色谱法
中图分类号：R284． 1；R282． 71 文献标识码：A 文章编号：1006 － 4931 (2016 )15 － 0033 － 03
Simultaneous Determination of 3 Alkaloids in Mahonia Bealei Leaves from Different
Producing Areas by HPLC
Zhao Dan1, Deng Zulei2, Cui Tian2, Ge Dezhou2, Ma Tao1, Lai Lijuan1
( 1． Department of Pharmacy, Bengbu Medical College, Bengbu, Anhui, China 233000;
2． Bengbu Institute for Food and Drug Control, Bengbu, Anhui, China 233000 )
Abstract: Objective To establish an HPLC method for simultaneous determination of 3 alkaloids ( berberine, palmatine, jatrorrhizine ) in
Mahonia bealei ( Fort． ) leaves from different regions． Methods The analysis was carried out on a Welch Ultimate Lp － C18 column with
a mobile phase consisted of acetonitrile and 0． 05 mol ／ L monopotassium phosphate solution (add phosphoric acid to pH ＝ 3． 0 ) (27 ∶ 73 ) ．
The column temperature was 30 ℃ and the detection wavelength was set at 346 nm and the flow rate was 1． 0 mL ／ min． Results
There was a good linear relationship in the range of 5． 328 － 266． 4 μg ／ mL( r ＝ 0． 999 9 ) , 3． 68 － 184． 0 μg ／ mL( r ＝ 0． 999 9 ) ,
2． 412 － 120． 6 μg ／ mL( r ＝ 0． 999 8 ) , respectively, and the average recovery rates ware 99． 17％ ( RSD ＝ 0． 35％ , n ＝ 6 ) , 98． 97％ ( RSD ＝
0． 65％ , n ＝ 6 ) , 99． 36％ ( RSD ＝ 0． 44％ , n ＝ 6 ) , respectively． C onclusion The method is simple and well reproducible, and can be readily
utilized as a quality control method for Mahonia bealei Leaves．
Key words: Mahonia bealei ( Fort． ) ; berberine; palmatine; jatrorrhizine; HPLC
阔叶十大功劳叶为小檗科植物阔叶十大功劳 Maho-
nia bealei ( Fort． ) Carr的干燥叶，始载于《本草再新》 [ 1 ]，
是我国传统中药材，全国各地均有分布；其味苦、性寒，
主要含生物碱类成分，具有清热补虚、燥湿、解毒等作
用；现代药理学证实其生物碱类成分具有抑制细菌活
性、缓解肠道炎症以及抗氧化的作用 [ 2 － 7 ]。目前关于其
有效成分的含量测定报道较少。为了更好地控制药材质
量，保证阔叶十大功劳叶的临床疗效，笔者结合相关文
献 [8 ]对阔叶十大功劳叶中稳定且药理作用明确的 3 个
生物碱类成分（小檗碱、巴马汀、药根碱）进行含量测定
研究，以期为阔叶十大功劳叶药材及相关成药的质量控
制提供思路及参考。现报道如下。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
Agilent 1260 型高效液相色谱仪（DAD 检测器，美
国安捷伦公司）；CP225D型电子天平，BS210S型电子天
平（德国 Sartorius 公司）；KQ － 500DE 型数控超声清洗
器（昆山市超声仪器有限公司）；GW － UPF 超纯水器（北
京普析通用仪器有限公司）。
1． 2 试药
阔叶十大功劳叶样品于 2015 年 3 月购自亳州药材
市场，经本中心邓祖磊副主任中药师鉴定为阔叶十大功
劳 Mahonia bealei (Fort． ) Carr干燥的叶，产地分别为 K1
为江苏；K2，K3，K4，K5，K7 为贵州；K6，K10 为安徽；
K8，K9 为湖北；K11 为云南。对照品盐酸小檗碱（批号
为 110713 － 201212），盐酸巴马汀 （批号为 110732 －
201110），药根碱（批号为 110733 － 200501），购自中国
食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余
试剂所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱 ：Ultimate LP － C18 柱 ( 150 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ；流动相：0． 05 mol ／ L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调
节 pH 至 3． 0） －乙腈（73 ∶ 27）；柱温：30 ℃ ；检测波长：
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1． 盐酸药根碱 2． 盐酸巴马汀 3． 盐酸小檗碱
A． 空白对照溶液 (溶剂 ) B． 对照品溶液 C． 供试品溶液
图 1 高效液相色谱图
346 nm；流速：1 mL ／ min；进样量：10 μL。在此条件下，
色谱图见图 1。
2． 2 溶液的配制
对照品溶液：精密称取减压干燥至恒重的盐酸小檗
碱、盐酸巴马汀 、盐酸药根碱 13． 32，9． 20，6． 03 mg，置
20 mL 容量瓶，分别加甲醇 －盐酸（100 ∶ 1）溶解并稀释
至刻度，制成盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱质量
浓度分别为 666，460，301． 5 μg ／ mL 的混合对照品贮备
液，精密量取 1 mL，置 25 mL 容量瓶中，加甲醇 －盐酸
（100 ∶ 1）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
供试品溶液：样品阔叶十大功劳叶粉碎过 3 号筛，
取 0． 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 －
盐酸（100 ∶ 1）50 mL，称定质量，超声处理 45 min，用甲
醇 －盐酸（100 ∶ 1）补足减失的质量，摇匀，滤过，放冷，
过 0． 45 μm 的滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。
2． 3 方法学考察
线性关系考察：分别精密量取混合对照品贮备液
0． 2，0． 5，1，2，5，10 mL，置 25 mL 容量瓶中，加甲醇 －
盐酸（100 ∶ 1）至刻度，摇匀，得系列混合对照品溶液
( 含盐酸小檗碱 5． 328，13． 32，26． 44，53． 28，133． 20，
266． 40 μg ／ mL；盐酸巴马汀 3． 68，9． 20，18． 40，36． 80，
92． 00，184． 00 μg ／ mL；盐酸药根碱 2． 41，6． 03，12． 06，
24． 12，60． 30，120． 60 μg ／ mL ) 。精密吸取系列混合对照
品溶液各 10 μL，在拟订色谱条件下进样测定，以峰面
积为纵坐标（ Y）、质量浓度为横坐标（ X，μg ／ mL）绘制标
准曲线，得盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的回
归方程分别为 Y ＝ 10． 513 6 X － 4． 145 9， r ＝ 0． 999 9
( n ＝ 6 )； Y＝ 11． 652 8 X － 3． 140 5， r ＝ 0． 999 9 ( n ＝ 6 )；
Y ＝ 11． 096 1 X ＋ 4． 095 0， r ＝ 0． 999 8 ( n ＝ 6 ) 。结果表
明，盐酸小檗碱质量浓度在 5． 328 ～ 266． 4 μg ／ mL，盐酸
巴马汀在 3． 68 ～ 184． 0 μg ／ mL，盐酸药根碱在 2． 412 ～
120． 6 μg ／ mL 范围内与峰面积积分值具有良好的线性
关系。
精密度试验：取同一对照品溶液，连续进样 5 次，每
次 10 μL，记录峰面积。结果盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、
盐酸药根碱峰面积的 RSD 分别为 0． 34％ ，0． 35％ ，
0． 85％ （ n ＝ 5），表明仪器精密度良好。
重复性试验：精密称取同一批号供试品（编号 K11）
6 份，依法制备供试品溶液并测定峰面积，计算含量。
结果盐酸小檗碱 、盐酸巴马汀 、盐酸药根碱分别为
0． 734％ ，0． 768％ ，1． 032％ ( n ＝ 6 ) ，表明方法重复性
良好。
稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，4，8，
12，16，18，24 h 时进样 10 μL，按拟订色谱条件测定峰
面积 。结果盐酸小檗碱 、盐酸巴马汀 、盐酸药根碱的
RSD 分别为 0． 56％ ，1． 26％ ，1． 26％ （ n ＝ 7），表明 24 h
内供试品溶液稳定。
加样回收试验：精密精密称取已测含量 (编号 K2，盐
酸小檗碱含量为 1． 750 mg ／ g，盐酸巴马汀为 0． 591 mg ／ g，
盐酸药根碱为 0． 360 mg ／ g )的十大功劳叶粉末 6 份，
各 0． 25 g，精密加入对照品溶液 2 mL （盐酸小檗碱为
0． 220 g ／ L，盐酸巴马汀 0． 075 5 g ／ L，盐酸药根碱为
0． 056 g ／ L），常压下挥干溶剂，按供试品测定方法测定
含量，计算加样回收率。结果见表 1。
2． 4 样品含量测定
取各批次样品，依法制备供试品溶液，平行测定 2次，
取平均值，按外标法计算含量。结果见表 2。
3 讨论
3． 1 流动相选择
参照文献 [9 － 11 ] ，大都选择乙腈和磷酸盐作为流
动相，但是样品的分离效果不佳，经比较多种流动相比例，
最终选择乙腈 － 0． 05 mol ／ L 磷酸二氢钾溶液（27 ∶ 73，
用磷酸调节 pH 至 3． 0），可使 3 种成分达到较好的分
离，基线稳定。
3． 2 测定波长选择
参照文献 [9 － 11 ] ，结合 DAD 光谱，发现 3 种化合
物在 346 nm 波长处都有较大吸收，因此选用 346 nm 作
为检测波长。
3． 3 提取条件选择
本试验中曾考察甲醇、乙醇、甲醇 －盐酸（100 ∶ 1）
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Drug Research
250
200
150
100
50
0
mAU
0 5． 0 10． 0 15． 0 20． 0
t ／ min
A
mAU
B
t ／ min
2
3
80
60
40
20
0
1
6． 0 10． 0 14． 0 18． 0
mAU
t ／ min
6． 0 10． 0 14． 0 18． 0
3
2
1
C
150
100
50
0
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表 1 盐酸小檗碱加样回收试验结果（ n ＝ 6）
组分
A
B
C
取样量
( g )
0． 248 5
0． 249 3
0． 248 9
0． 248 4
0． 249 5
0． 250 0
0． 248 5
0． 249 3
0． 248 9
0． 248 4
0． 249 5
0． 250 0
0． 248 5
0． 249 3
0． 248 9
0． 248 4
0． 249 5
0． 250 0
样品含量
(mg )
0． 434 9
0． 436 3
0． 435 6
0． 434 7
0． 436 6
0． 437 5
0． 146 9
0． 147 3
0． 147 1
0． 146 8
0． 147 5
0． 147 8
0． 089 5
0． 089 7
0． 089 6
0． 089 4
0． 089 8
0． 090 0
加入量
(mg )
0． 440 0
0． 440 0
0． 440 0
0． 440 0
0． 440 0
0． 440 0
0． 151 0
0． 151 0
0． 151 0
0． 151 0
0． 151 0
0． 151 0
0． 112 0
0． 112 0
0． 112 0
0． 112 0
0． 112 0
0． 112 0
测得量
(mg )
0． 871 2
0． 874 2
0． 871 1
0． 868 4
0． 873 8
0． 874 9
0． 296 7
0． 295 0
0． 296 5
0． 296 1
0． 298 0
0． 297 8
0． 200 3
0． 201 5
0． 200 3
0． 200 6
0． 201 1
0． 201 9
回收率
(％ )
99． 16
99． 52
98． 98
98． 57
99． 36
99． 41
99． 21
97． 81
98． 94
98． 87
99． 67
99． 34
98． 93
99． 82
98． 84
99． 29
99． 38
99． 91
X
（％ ）
99． 17
98． 97
99． 36
RSD
（％ ）
0． 35
0． 65
0． 44
注：A 为盐酸小檗碱，B 为盐酸巴马汀，C 为盐酸药根碱。
编号
K1
K2
K3
K4
K5
K6
K7
K8
K9
K10
K11
产地
江苏
贵州
贵州
贵州
贵州
安徽
贵州
湖北
湖北
安徽
云南
盐酸小檗碱
0． 126
0． 175
0． 027
0． 074
0． 022
0． 600
0． 015
0． 015
0． 038
0． 887
0． 933
盐酸巴马汀
0． 029
0． 059
0． 010
0． 025
0． 015
0． 270
0． 010
0． 012
0． 017
0． 192
0． 212
盐酸药根碱
0． 032
0． 036
0． 043
0． 056
0． 050
0． 093
0． 038
0． 052
0． 045
0． 063
0． 062
总含量
0． 187
0． 270
0． 080
0． 155
0． 087
0． 963
0． 063
0． 079
0． 100
1． 142
1． 207
表 2 各批样品含量测定结果（％ ， n ＝ 2）
作为提取溶剂，进行回流和超声提取方法进行比较，结
果甲醇 －盐酸（100 ∶ 1）超声提取效果最好。同时，考察
了超声处理 30，45，60 min 对含量的影响。结果表明，随
着超声提取的时间延长，含量也相应增加，但是 45 min
和 60 min 含量差异较小，因此选择超声提取 45 min。
3． 4 生物碱含量分析
本试验中对 11 批不同产地的药材进行了含量测
定，结果发现盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱 3 种
生物碱类为不同产地的阔叶十大功劳叶药材的共有成
分，各个产地之间不同生物碱的含量差异较大。单用一
种生物碱来测定含量，并不能全面反映药材的质量。由
表 4 可知，产地为安徽和云南药材生物碱含量较高，贵
州产的药材含量较低，这可能与原植物的生长环境、采
集时间以及加工过程有关系。由图 1 可知，除目前已测
定的 3 种生物碱外，还有其他的色谱峰，提示可能还有
其他生物碱。
综上所述，2010 年版《中国药典（一部）》暂未收载
阔叶十大功劳叶，且市场上药材质量参差不齐，质量标
准有待建立。本研究中建立了同时测定阔叶十大功劳叶
中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱含量的 HPLC
法，经方法学验证，操作简便，精密度和重复性好，回收
率高，测定结果准确，可为阔叶十大功劳叶药材的质量
控制提供可靠的参考依据。
作者简介：赵丹（1992 － ），女，在读硕士研究生，研
究方向为药物分析， (电子信箱 ) 810502321＠ qq． com；
邓祖磊（1980 － ），男，副主任中药师，主要从事药品检验
和质量标准研究工作，本文通讯作者， (电话 ) 0552 －
3012569。
参考文献：
[ 1 ] 《中华本草》编委 ． 中华本草 [M ] ． 上海 : 上海科学技术出版
社，1999: 320 － 322．
[ 2 ] 欧阳蒲月，黄智璇，莫端峰 ． 华南十大功劳提取物抑菌活性
初步研究 [ J ] ． 亚热带植物科学，2012 ( 3 ) : 1 － 6．
[ 3 ] Cernakova M，Kostalova D． Antimicrobial activity of berberine － a
constituent of Mahonia aquifolium [ J ] ． Folia microbiologica，2002，
47 ( 4 ) : 375 － 378．
[ 4 ] Vollekova A，Kost′alova D，Kettmann V，et al． Antifungal activity
of Mahonia aquifolium extract and its major protoberberine alka-
loids [ J ] ． Phytotherapy research: PTR，2003，17 ( 7 ) : 834 － 837．
[ 5 ] Zhang L，Ravipati AS，Koyyalamudi SR，et al． Antioxidant and an-
ti － inflammatory activities of selected medicinal plants containing
phenolic and flavonoid compounds [ J ] ． Journal of agricultural and
food chemistry，2011，59 ( 23 ) : 12 361 － 12 367．
[ 6 ] Lee IA，Hyun YJ，Kim DH． Berberine ameliorates TNBS － induced
colitis by inhibiting lipid peroxidation，enterobacterial growth and
NF － kappaB activation [ J ] ． European journal of pharmacology，
2010，648 ( 1 － 3 ) : 162 － 170．
[ 7 ] Hu W，Yu L，Wang MH． Antioxidant and antiproliferative proper-
ties of water extract from Mahonia bealei ( Fort． ) Carr． leaves [ J ] ．
Food and chemical toxicology: an international journal published
for the British Industrial Biological Research Association， 2011，
49 ( 4 ) : 799 － 806．
[ 8 ] 樊丽博，张晓会，刘兴金，等 ． 狭叶十大功劳化学成分分析 [ J] ．
中国兽药杂志，2011 ( 10 ) : 34 － 36．
[ 9 ] 国家药典委员会 ． 中华人民共和国药典（一部） [M ] ． 北京 :
中国医药科技出版社，2015：85 － 86．
[ 10 ] 刘偲翔，刘布鸣，何开家，等 ． 两种十大功劳叶中生物碱成
分的分析与比较 [ J ] ． 中国药业，2010，19 ( 5 ) : 4 － 5．
[ 11 ] 吕光华，王立为，陈建民，等 ． 高效液相色谱法测定十大功
劳属植物中的 7 种生物碱成分 [ J] ． 药物分析杂志，1999(4) :
55 － 58．
(收稿日期：2016 － 04 － 01 )
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