全 文 ：书高效液相色谱法测定肋柱花四味汤散中
盐酸小檗碱含量
陈　婧１，王　键１，刘振强２，包　蕾２
（１．广东公安边防总队医院，广东 深圳５１８０２３；２．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨１５００４０）
摘　要：目的：建立高效液相色谱法测定肋柱花四味汤散中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法：色谱柱
选择Ｃ１８柱（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｑｕｅｎｔ，５μｍ，２５０ｍｍ×４０６ｍｍ），流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ；流动相选择磷酸二氢钾（乙
腈），浓度为０．０５ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ值通过磷酸控制在３，以３０∶７０配比；温度设置为２５℃，控制检测液的长度
保持在３４５ｎｍ。结果：小檗碱在０．０３９　１４～０．３９１　４μｇ范围内有着良好的线性关系（ｒ＝０．９９９），ＲＳＤ为
２．６％，加样回收率为９９．８％。结论：该方法简便易操作，可重复，测定结果准确。
关键词：肋柱花；四味汤散；盐酸小檗碱；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４．２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１３）０７－００５２－０１
收稿日期：２０１３－０３－２０
作者简介：陈婧，女，硕士，广东公安边防总队医院药师，研究方向为药剂学。
　　肋柱花四味汤散为肋柱花２５０ｇ、黄连２５０ｇ、栀子
２５０ｇ、瞿麦２５０ｇ四味，通过粉碎成中粉、过筛、混匀制作而
成的方剂。其最为常见的功效就是凉血、调糟归精、清“协
日”，可用于口渴烦闷、咽喉疼痛、血热相搏、肝胆虚热等症
的临床治疗［１］。本研究采用高效液相色谱法对肋柱花四味
汤散中的特性药物盐酸小檗碱进行含量测定。
１　仪器与试药
１．１　仪器
日立高效液相色谱仪型号Ｌ－２０００；奥特赛恩斯超声液
清洗仪型号ＡＳ３１２０；梅特勒－托利多电子天平型号ＦＡ２００４。
１．２　试药
盐酸小檗碱对照品；肋柱花四味汤散；农夫山泉纯净
水；色谱纯乙腈；分析纯试剂等。
２　方法与结果
２．１　色谱条件
流动相选择磷酸二氢钾（乙腈），浓度为０．０５ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ
值通过磷酸控制在３，以３０∶７０配比；色谱柱选择为Ｃ１８柱
（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｑｕｅｎｔ，５μｍ，２５０ｍｍ×４０６ｍｍ），过程速度控制为
１．０ｍＬ／ｍｉｎ；温度设置为２５℃，控制检测液的长度保持在
３４５ｎｍ。
２．２　对照组溶液制备
称量盐酸小檗碱３．９１４ｍｇ作为对照品，要求干燥准确，
在１００ｍＬ试剂瓶中采用标准甲醇溶液进行溶解，加入适量
纯净水到达标准操作刻度，进行摇匀操作，对照组３９．１４μｇ／
ｍＬ的盐酸小檗碱溶液制备完成。
２．３　供试品溶液制备
准确称量肋柱花四味汤散０．５ｇ，在１００ｍＬ的试剂瓶中
按照１∶１００配制好盐酸－甲醇溶液９５ｍＬ，功率调定为
１２０Ｗ，频为２５ｋＨｚ，进行超声处理３０ｍｉｎ，之后将其置于常
温下，冷却后加入１∶１００的盐酸－甲醇溶液定容，将溶液摇
匀，过滤。吸取１ｍＬ溶液在１０ｍＬ的容量瓶中进行定容摇
匀。取对照组溶液１０μＬ吸入液相色谱仪，之后再吸入
１０μＬ供试品溶液。实验显示，两组溶液在特定的时间段上
均表达出吸收峰。
２．４　阴性溶液制备
参考供试品制作流程进行操作，得到的阴性试剂无黄
连成分。然后将１０μＬ供试品溶液和１０μＬ阴性对照溶液同
时吸入液相色谱仪。经高效液相色谱仪测定得到，在供试
品溶液出现吸收峰的时间段内，阴性对照组溶液无吸收峰
表现。
２．５　线性关系考察
精确吸取对照品溶液１．０，２．０，４．０，８．０，１０．０μＬ进行３
次操作，对峰面积进行回归计算，得到Ｙ＝１５　３８６　１２１．５Ｘ－
１　６５８．９，ｒ＝０．９９９。
２．６　重现性操作
根据实验规定，采用５份来自同一个批号的样品，参照
供试品制备过程进行操作，按照色谱条件测定其含量，及时
处理所得数据，其结果ＲＳＤ为１．５２％。
２．７　稳定性试验
取同一供试品溶液分别在０、１、２、４、８、１２、２０、２４ｈ进行
测定，计算其峰面积，分析得ＲＳＤ值为０．９８％，说明在２４ｈ
内供试品溶液能够保持稳定状态。
２．８　加样回收率试验
取６份０．３ｇ含量测定过的四味汤散，加入对照品溶液
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书降压类中成药非法添加氢氯噻嗪的快速筛查方法研究
杨光英
（东莞市食品药品检验所，广东 东莞５２３１０９）
摘　要：目的：建立降压类中成药非法添加氢氯噻嗪的快速筛查方法。方法：采用化学反应法快速筛查，
高效液相色谱法验证。结果：收集样品３８个，检出７个阳性样品，漏检率为０，误检率为０，正确率为
１００％。结论：该方法操作简单、快速、灵敏高。
关键词：降压类中成药；氢氯噻嗪；药物筛查
中图分类号：Ｒ２８４．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１３）０７－００５３－０２
收稿日期：２０１３－０３－２０
基金项目：东莞市高等院校科研机构科技计划项目（２０１０１０８１０１０６）
作者简介：杨光英（１９７４－），女，广东省东莞市食品药品检验所主管药师，研究方向为药品检验。
　　氢氯噻嗪是常用的降压药，具有降压温和，不易产生耐
受性的特点。但长期应用可引起代谢紊乱，导致低血钾、低
血钠、高尿酸血症、促进动脉粥样硬化等副作用。由于高血
压易复发、并发症多且难以根治，很多患者选择副作用较低
的中成药来进行治疗。然而由于此类药品起效比较慢，不
法分子利用人们急于见效的心理，非法添加处方以外的氢
氯噻嗪等化学药物，给人民群众的身体健康造成极大威胁。
本实验旨在建立一种操作简便、快速，试剂廉价、环保的方
法，用以快速筛查此类产品中是否添加了氢氯噻嗪。
１　仪器与试药
岛津ＬＣ－２０ＡＴ高效液相色谱仪，氢氯噻嗪对照品 （中
国药品生物制品检定所，批号１００３０９－２０１１０３）；乙腈（色
谱纯

）。
盐酸小檗碱２０ｍＬ。处理过程可参照供试品的操作方法，待
测定后进行回收率试验。结果见表１。
表１　加样回收率试验结果
分组
样品
（ｍｇ）
加入量
（ｍｇ）
测得量
（ｍｇ）
回收值
（％）
平均回
收率（％）
ＲＳＤ
（％）
１　 ０．１１４９　 ０．１０５３　 ０．２２５３　 １０４．８
２　 ０．１１４９　 ０．１０５３　 ０．２１７８　 ９７．７
３　 ０．１１４８　 ０．１０５３　 ０．２１８７　 ９８．７
９９．８　 ２．６
４　 ０．１１４８　 ０．１０５３　 ０．２１８８　 ９８．８
５　 ０．１１４８　 ０．１０５３　 ０．２２０２　 １００．１
６　 ０．１１４９　 ０．１０５３　 ０．２１８７　 ９８．６
２．９　样品含量测定
参照供试品操作进行样品溶液制备，取三种肋柱花四
味汤散进行含量评估，统计峰面积。结果见表２。
表２　样品中盐酸小檗碱含量测定结果
批号 盐酸小檗碱（ｍｇ／ｇ） ＲＳＤ（％）
０５０６２２　 １．１５２２　 ０．４６
０６０３１５　 １．２１４５　 １．５８
０６０４２０　 １．６１８４　 ０．０２
３　讨论
在实验之前，我们对回流提取和超声提取两种方法进
行了对比考察，最后进行超声操作，因为通过超声操作效果
相比回流操作要好很多。对此，笔者也进一步观察了超声
操作的时间对结果的影响，最后得到，在提取的３０ｍｉｎ后盐
酸小檗碱含量不再出现变化，因此，超声提取操作时间选定
为３０ｍｉｎ。
有学者研究得到，通过对比三种乙腈溶液系统：磷酸二
氢钾浓度为０．０５ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ值通过磷酸控制在３，以３０∶７０
配比［２］、磷酸二氢钾浓度为０．０３ｍｏｌ／Ｌ，以５５∶４５配比［３］、
磷酸浓度为０．１％，以４０∶６０进行配比，每１００ｍＬ溶液中
加入０．１ｇ十二烷基磺酸钠［４］，其操作效果最好的系统是磷
酸二氢钾浓度为０．０５ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ值通过磷酸控制在３，以３０
∶７０配比。在色谱条件的研究中，笔者通过对流速差异、比
例差异、流动差异的实验，得到最佳流动相的确定要根据样
品的保留时间和分离度。本实验建立的含量测定法比较简
单、准确、结果可靠。
参考文献：
［１］　国家药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准（蒙药分
册）［Ｓ］．中国药典，１９９８：９１．
［２］　杨钊，张春辉，单秀明．高效液相色谱法测定消幽胶囊中盐酸
小檗碱的含量［Ｊ］．中药新药与临床药理，２００７，１８（１）：６３．
［３］　梅群，程静，何继祥，等．ＨＰＬＣ测定结肠炎散中盐酸小檗碱
含量［Ｊ］．中国药师，２００７，１０（１２）：１２６７．
［４］　薛洁，张海英．ＨＰＬＣ测定糖脂益片中盐酸小檗碱含量［Ｊ］．中
医药学报，２００６，３４（６）：１７．
（责任编辑：宋勇刚）
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