全 文 ：China Pharmaceuticals
2017年 2月 5日 第 26卷第 3期
Vol． 26, No． 3, Feburary 5, 2017
*基金项目：军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题 [ 14ZJZ03 － 3 ] 。
第一作者：吕本强（1978 － ），男 ，副主任药师，研究方向为中药新制剂新技术与医院药学，（电话 ）020 － 61636468（电子信箱 ）
Lbq421＠ 163． com。
△通讯作者：张贞良（1964 － ），男，主任药师，研究方向为医院药事管理，（电子信箱）changefor＠ vip． sina． com。
·检验检测· doi：10． 3969 ／ j． issn． 1006 － 4931． 2017． 03． 005
高效液相色谱法测定复方石栗喷雾剂中盐酸小檗碱含量*
吕本强，范积平，张贞良△，林东贤
（中国人民解放军第 421医院药剂科，广东 广州 510318）
摘要：目的 建立测定复方石栗喷雾剂中盐酸小檗碱含量的高效液相色谱 (HPLC )法。方法 色谱柱采用 Zorbax300 SB － C18 柱（250 mm ×
4． 6 mm，5 μm），流动相为乙腈 － 0． 1％磷酸溶液（50 ∶ 50，每 100 mL 加十二烷基磺酸钠 0． 1 g），检测波长为 265 nm，流速为 1． 0 mL ／ min，
柱温为 30 ℃ 。结果 盐酸小檗碱质量浓度在 6． 4 ～ 64． 0 μg ／ mL 范围内与峰面积线性关系良好（ r ＝ 0． 999 8），平均回收率为 98． 01％ ，
RSD 为 1． 63％ （ n ＝ 9）。结论 该方法测定结果准确、稳定，重复性好，简便易行，可用于该制剂中盐酸小檗碱的含量测定。
关键词：高效液相色谱法；盐酸小檗碱；含量测定；复方石栗喷雾剂
中图分类号：R284． 1；R286． 0 文献标识码：A 文章编号：1006 － 4931 (2017 )03 － 0015 － 03
Content Determination of Ber ber ine Hydrochlor ide in Compound Shili Spr ay by HPLC
Lü Benqiang, Fan Jiping, Zhang Zhenliang, Lin Dongxian
( Pharmacy Department, PLA No． 421 Hospital, Guangzhou, Guangdong, China 510318 )
Abstr act: Objective To establish an HPLC method to determine the content of berberine hydrochliride in Compound Shili Spray．
Methods The determination was performed by HPLC using ZORBAX300SB － C18 column ( 250 mm × 4． 6 mm, 5 μm) ; the column tem-
perature was 30 ℃ , the mobile phase consisted of acelonitrile － 0． 1％ phosphoric acid solution ( 50 ∶ 50 ) ( 0． 1 g sodium dodecylsulphate
per 100 mL) , the UV detection wavelength was 265 nm and the flow rate was 1． 0 mL ／ min． Results The berberine hydrochloride was
in good linearity in the range of 6． 4 － 64． 0 μg ／ mL( r ＝ 0． 999 8 ) ． The average recovery rate was 98． 01％ , RSD ＝ 1． 63％ ( n ＝ 9 ) ．
Conclusion The method is sensitive, accurate and reproducible, which can be used to control the content of berberine hydrochloride in
Compound Shili Spray．
Key words: HPLC; berberine hydrochloride; content determination; Compound Shili Spray
图 1 流动相溶液波长扫描图（200 ～ 400 nm）
复方石栗喷雾剂是我院临床应用多年的医院制剂，
由石栗、黄柏、冰片等中药材提取精制而成，主要用于治
疗Ⅰ°和Ⅱ°烧烫伤、表皮擦伤、伤筋（急性软组织损伤）
所导致的瘀肿疼痛等症，临床效果满意 [ 1 ]。为进一步提
高该制剂质量的可控性、稳定性，保证临床用药安全、有
效，根据 2010 年版《中国药典 (一部 ) 》 [ 2 ]及文献 [ 3 － 8 ] ，
本研究中考察了测定该制剂中盐酸小檗碱含量的高效
液相色谱 (HPLC)法，现报道如下。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
LC － 20AT 型高效液相色谱仪（日本岛津公司，包
括 SPD － 20A 检测器）；HT － 220A 型柱温箱（天津市恒
奥科技发展有限公司）；UV － 1800 型紫外分光光度仪
（日本岛津公司）。
1． 2 试药
盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批
号为 110713 － 201212，供含量测定用）；复方石栗喷雾
剂（医院制剂，批号为 20141127，20141201，20141208）；
乙腈、甲醇均为色谱纯；重蒸水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 测定波长选择
取盐酸小檗碱对照品溶液，在 200 ～ 400 nm波长范
围内进行扫描，结果显示在 348，265，229 nm波长处均
有较大吸收峰，在 265 nm波长处吸收度较强且不易受
溶剂峰干扰，故选择 265 nm作为测定波长，见图 1。
2． 2 溶液制备
对照品溶液：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，
加流动相制成每 1 mL含 0． 05 mg 的溶液，即得。
供试品溶液：精密量取该制剂 10 mL，置 100 mL
·研究·
Drug Research
200 250 300 350 400
1． 8
1． 6
1． 4
1． 2
1． 0
0． 8
0． 6
0． 4
0． 2
0 λ ／ nm
A
15
China Pharmaceuticals
2017年 2月 5日 第 26卷第 3 期
Vol． 26, No． 3, February 5, 2017
1． 盐酸小檗碱
A． 对照品溶液 B． 供试品溶液 C． 阴性对照品溶液
图 2 高效液相色谱图
表 1 稳定性试验结果 ( n ＝ 5 )
表 2 精密度试验结果 ( n ＝ 5 )
表 3 重复性试验结果 ( n ＝ 5 )
序号
1
2
3
4
5
峰面积积分值
878 269
896 845
889 564
915 748
896 458
RSD（％ ）
1． 52
序号
1
2
3
4
5
峰面积积分值
835 056
836 288
837 435
835 829
835 042
RSD（％ ）
0． 12
试验时间
0 h
0． 5 h
1． 0 h
3． 0 h
5． 0 h
峰面积积分值
875 238
899 935
901 899
914 855
885 434
RSD（％ ）
1． 72
容量瓶中 ，加流动相稀释至刻度 ，摇匀 ，用微孔滤膜
（0． 45 μm）滤过，取续滤液，即得。
阴性对照品溶液：据处方配比（缺黄柏药材）同法制
成阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制备，即得。
2． 3 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Zorbax300 SB － C18 柱（250 mm × 4． 6 mm，
5 μm）；流动相：乙腈 － 0． 1％磷酸溶液（50 ∶ 50，每 100 mL
加十二烷基磺酸钠 0． 1 g）；检测波长：265 nm；流速：
1． 0 mL ／ min；柱温：30 ℃ ；进样量：10 μL。理论板数按盐
酸小檗碱峰计算应不低于 4 000。取以上 3 种溶液按拟
订色谱条件进样测定。可知盐酸小檗碱的保留时间为
9． 2 min，理论板数不低于 4 000，且阴性对照在盐酸小
檗碱相应保留时间处无干扰，见图 2。
2． 4 方法学考察
线性关系考察：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称
定，置 250 mL 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，
制成质量浓度为 0． 08 g ／ L 的对照品贮备液。取适量，加
流动相定容至 50 mL 容量瓶中 ，配制成 6． 4， 16． 0，
25． 6，32． 0，48． 0，64． 0 μg ／ mL 不同质量浓度的系列对
照品溶液。以对照品质量浓度（ X，μg ／ mL）为横坐标、峰
面积积分值（ Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程
Y＝ 33 103 X ＋ 8 415． 4， r ＝ 0． 999 8。盐酸小檗碱质量浓
度在 6． 4 ～ 64． 0 μg ／ mL 范围内与峰面积积分值线性关
系良好。
稳定性试验：取 2． 2 项下供试品溶液适量，在室温
下贮存，按拟订色谱条件，分别于 0，0． 5，1． 0，3． 0，5． 0 h
时进样测定供试品溶液中盐酸小檗碱峰面积积分值。结
果的 RSD 为 1． 72％ ( n ＝ 5 ) ，表明供试品溶液在 5 h 内
稳定性良好，见表 1。
精密度试验：精密吸取上述对照品溶液 10 μL，按
拟订色谱条件重复进样 5 次，测定盐酸小檗碱峰面积积
分值。结果的 RSD 为 0． 12％ ( n ＝ 5 ) ，表明仪器精密度
良好，见表 2。
重复性试验：精密量取同一批（批号为 20141127）
供试品 5 份，各 10 mL，依法制备供试品溶液，按拟订色
谱条件进样测定盐酸小檗碱峰面积积分值 。结果的
RSD 为 1． 52％ ( n ＝ 5 ) ，表明方法重复性良好，见表 3。
加样回收试验：精密量取已知含量（批号为 20141127，
盐酸小檗碱含量 0． 219 g ／ L）的供试品 9 份，各 10 mL，
各加入一定量的对照品，依法进样测定含量，计算平均
回收率，结果见表 4。
2． 5 样品含量测定
分别精密量取 3 批供试品（批号分别为 20141127，
t ／ min
300
200
100
0
U ／ mV
A
0 10 20 30
1
9． 197
t ／ min
0 5． 0 10． 0 15． 0 20． 0
U ／ mV
40
30
20
10
0
1
B
9． 211
t ／ min
U ／ mV
C
10
5
0
－ 5
0 5． 0 10． 0 15． 0 20． 0
11． 615
·研究·
Drug Research
16
China Pharmaceuticals
2017年 2月 5日 第 26卷第 3期
Vol． 26, No． 3, Feburary 5, 2017
20141201，20141208）各 10 mL，按 2． 2 项下方法制备供
试品溶液，按拟订色谱条件进样测定盐酸小檗碱含量，
结果批号为 20141127，20141201，20141208 的样品含量
分别为 0． 219，0． 224，0． 228 g ／ L。
3 讨论
3． 1 检测指标成分选择
复方石栗喷雾剂是我院临床应用多年的医院制剂，
由石栗、黄柏、冰片等组方。方中黄柏苦寒燥湿、泻火解
毒，既能燥湿以敛疮，又能清解烧烫伤火热之毒；冰片清
香宣散、清热止痛，用于疮疡肿痛、溃后不敛；石栗活血
散瘀，以清瘀热。诸药相伍，共奏清热燥湿，泻火解毒，活
血散瘀，敛疮生肌，消肿止痛之功效。生物碱类化合物为
黄柏中主要有效成分，如小檗碱、药根碱、巴马汀、黄柏
碱等，其中小檗碱、巴马汀已被证明具有抗菌抗炎、清热
解毒等药理作用 [ 9 － 10 ]，与该制剂功能主治相对应。在制
备过程中以 75％乙醇浸渍提取黄柏有效成分，小檗碱
类成分得到充分提取，故本制剂选择黄柏中盐酸小檗碱
作为含量测定的指标成分。
3． 2 测定波长选择
分别以甲醇、流动相为空白对照，取盐酸小檗碱对
照品溶液在 200 ～ 400 nm 波长范围内进行扫描，结果在
229，265，348 nm 波长处均有较大吸收峰，但以甲醇为
空白，流动相于 220 ～ 235 nm 波长处有微吸收。为避免
流动相对测量结果的影响，且盐酸小檗碱在 265 nm 波
长处吸收较强，峰形较好，故选择 265 nm作为检测波长。
3． 3 流动相选择
考察盐酸小檗碱在不添加离子对试剂的乙腈 －磷
酸流动相体系中的分离效果，发现色谱峰分离效果明
显，但其系统适应性差，理论板数偏低，影响测量的准确
性 [ 11 － 16 ]。通过对比多种不同的流动相，试验结果显示，
以乙腈 － 0． 1％磷酸溶液（50 ∶ 50，每 100 mL 加十二烷
基磺酸钠 0． 1 g）为流动相，盐酸小檗碱峰形尖锐、对称，
无伸展、拖尾现象，色谱图基线稳定；通过系统适用性试
验，盐酸小檗碱在该制剂中能得到理想的分离，阴性对
照无干扰，故选用乙腈 － 0． 1％磷酸溶液作为流动相。
3． 4 样品处理方法选择
本制剂为石栗、黄柏等药材经 75％乙醇浸渍、渗漉
而成，处方简单，待测成分明确，盐酸小檗碱在流动相中
能完全溶解，样品处理也相对简单，直接量取样品溶液，
用流动相稀释定容即可。
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(收稿日期：2016 － 10 － 09；修回日期：2016 － 11 － 28 )
表 4 盐酸小檗碱加样回收试验结果 ( n ＝ 9 )
样品含量
（mg）
2． 19
2． 19
2． 19
2． 19
2． 19
2． 19
2． 19
2． 19
2． 19
取样量
（mg）
1． 40
1． 40
1． 50
1． 90
1． 80
1． 70
2． 20
2． 30
2． 40
测得量
（mg）
3． 57
3． 58
3． 67
4． 08
3． 98
3． 87
4． 31
4． 40
4． 48
回收率
（％ ）
98． 57
99． 29
98． 67
99． 47
99． 44
98． 82
96． 36
96． 09
95． 42
X
(％ )
98． 01
RSD
(％ )
1． 63
·研究·
Drug Research
17