全 文 ：第 39卷第 9期
2010年 9月
应　用　化　工
AppliedChemicalIndustry
Vol.39 No.9
Sep.2010
分析测试
收稿日期:2010-06-23　　修改稿日期:2010-06-29
基金项目:浙江省分析测试科技计划项目(2008F70008);台州市科技计划项目(071KY07)
作者简介:许海丹(1980-), 女 , 浙江临海人 , 台州学院讲师 , 硕士 , 主要从事天然产物的分离与分析研究工作。电话:
13676655752, E-mail:adaxhd@tzc.edu.cn
乌药叶中总黄酮的含量测定
许海丹 1 ,陈珍 2 ,顾霞敏1
(1.浙江省台州学院 医药化工学院 ,浙江临海　317000;2.浙江省台州学院生命科学学院 ,浙江 临海　317000)
摘　要:建立了 AlCl
3
显色分光光度法测定乌药叶中总黄酮含量的方法。研究表明 ,在弱酸性条件下 , 乌药叶提取
液中总黄酮与 AlCl3形成稳定的黄色配合物 ,在波长 415 nm处测定显色液的吸光度确定总黄酮含量。 以芦丁为标
准品 , 样品总黄酮在 0.002 ～ 0.020 mg/mL范围内 , 线性关系良好 , 其回归方程为 A=30.076C+0.006 5, R2 =
0.999 6,平均加样回收率 =101.0%, RSD=1.27%(n=6)。
关键词:乌药叶;总黄酮;AlCl
3
;分光光度法
中图分类号:O657.32 　　　文献标识码:A　　　文章编号:1671-3206(2010)09-1405-03
DeterminationoftotalflavonoidsinLinderaaggregataleaves
XUHai-dan1 , CHENZhen2 , GUXia-min1
(1.DepartmentofPharmaceuticalandChemicalEngineering, TaizhouUniversity, Linhai317000, China;
2.SchoolofLifeScience, TaizhouUniversity, Linhai317000, China)
Abstract:Aspectrophotometricmethodforthedeterminationoftotalflavonoidsextractedfromtheleaves
ofLinderaaggregate(Sims)Kosterm.wasestablished.Inthesolutionofsubacidity, thetotalflavonoidsin
LinderaaggregateleavesreactswithAlCl3 toformastableyelowcomplex, itsmaximumabsorptionwave-
lengthis415 nm.TheregresionequationisA=30.076C+0.006 5, corelationcoeficientR2 is
0.999 6.Theabsorbancewaslinearwithconcentrationofthetotalflavonoidsintherangeof0.002 ～
0.020 mg/mL.Theaveragerecoveryis101.0% (RSD=1.27%, n=6).Thismethodissimple, rapid
andreproducible.
Keywords:Linderaaggregataleaves;totalflavonoids;AlCl3;spectrophotometry
　　乌药为樟科山胡椒属药用植物 ,性温味辛 ,具有
顺气止痛 、温肾散寒之功效 ,主产于浙江 、江西 、福
建 、安徽 、湖南等省区 ,习惯以浙江天台所产者品质
最佳 ,故称 “天台乌药”或 “台乌药” [ 1-2] 。乌药药材
主要采自其块根 ,而地上部分的药用价值尚未被开
发 。据报道 [ 3-5]乌药叶中黄酮资源丰富 ,为乌药叶中
抗菌 、抗炎的主要成分 。目前总黄酮的测定主要采
用分光光度法 ,利用黄酮类物质在碱性与亚硝酸根
存在的环境下与铝离子形成稳定的红色络合物来测
定含量 。实验发现 ,此法测定乌药叶总黄酮含量时 ,
显色后的样品溶液会产生红色絮状悬浮物 ,影响结
果的准确性和稳定性。本文研究用 AlCl3 -(HAc-
NaAc)显色法测定乌药叶中总黄酮的方法 ,旨在建
立一种简便 、快速 、准确的光度分析法 。
1　实验部分
1.1　试剂与仪器
　　乌药叶于 2009年 9月采自浙江省台州市天台
山;芦丁标准品(批号:100080-200707)购自中国药
品生物制品检定所;无水乙醇 、无水甲醇 、冰醋酸 、石
油醚(沸程 60 ～ 90 ℃)、无水乙酸钠 、AlCl3· 6H2O
均为分析纯;实验用水为蒸馏水。
岛津 UV-2450型紫外可见分光光度计;梅特勒
托利多 DELTA320型 pH计;SB-5200D型超声波清
洗机;DF-101S型集热式恒温加热磁力搅拌器;RE-
52A型旋转蒸发器;SHZ-DⅢ型循环水式真空泵。
1.2　实验方法
1.2.1　样品溶液的制备　将乌药叶用清水洗净 ,自
然风干 , 115℃杀青 20min, 70℃下干燥 7h,粉碎后
过 0.45 mm金属网筛 。然后精密称取乌药叶粉末
1.0 g,加 50%乙醇 50mL, 70℃回流提取 3次 ,每次
1h。抽滤 ,弃去滤渣 ,合并滤液 ,经石油醚萃取后 ,
水层以甲醇定容至 50 mL,备用 。
1.2.2　标准溶液的制备　精密称取经 105 ℃干燥
至恒重的芦丁标准品 50.0 mg,用无水甲醇溶解定
应用化工 第 39卷
容至 50 mL,即得浓度为 1.0 mg/mL的芦丁标准溶
液 。
1.2.3　含量测定方法　准确移取一定量的芦丁标
准溶液或乌药叶黄酮提取液于 25 mL容量瓶中 ,加
入 1.0mL0.5mol/LAlCl3溶液 ,摇匀放置 15 min,
再用 pH6.0的 HAc-NaAc缓冲溶液定容混匀 ,超声
振荡 5min后以空白试剂作参比 ,在 415 nm波长处
测其吸光度 。
2　结果与讨论
2.1　检测波长的选择
　　准确移取 1.0mL的芦丁标准溶液或样品溶液
直接和按实验方法显色 , 再分别用 pH3.6, 4.0,
5.0, 5.6 , 6.0, 6.4的 HAc-NaAc缓冲溶液定容混匀 ,
超声振荡 5min后在 300 ～ 600 nm波长范围内进行
扫描。芦丁标准溶液显色前 、后吸收光谱见图 1、
图 2 ,样品溶液显色前 、后吸收光谱见图 3。
结果表明 , 标准溶液和样品溶液显色后都在
415nm附近有最大吸收 ,且用 pH6.0的 HAc-NaAc
缓冲溶液定容后吸收峰最接近 415 nm,故本实验选
用 pH6.0的 HAc-NaAc缓冲溶液 , 415 nm为检测波
长 。
图 1　标准溶液显色前的吸收光谱
Fig.1　Absorptionspectrabeforerutinstandard
solutioncolouring
图 2　标准溶液显色后的吸收光谱
Fig.2　Absorptionspectraafterrutinstandardsolutioncolouring
1.pH=3.6;2.pH=4.0;3.pH=5.0;
4.pH=5.6;5.pH=6.0;6.pH=6.4
图 3　样品溶液显色前 、后的吸收光谱
Fig.3　Absorptionspectrabeforeandafterextractivesolutions
oftotalflavonoidsinLinderaaggregataleavescolouring
1.显色前;2.pH=3.6;3.pH=4.0;4.pH=5.0;
5.pH=5.6;6.pH=6.0;7.pH=6.4(2 ～ 7为显色后)
2.2　显色剂 AlCl3用量的选择
　　按实验方法取上述芦丁标准溶液 1.0mL,分别
加入 0.5 mol/LAlCl3 溶液 0.4 ～ 1.4 mL(间隔
0.2 mL),测定吸光度 。结果表明 , 0.5 mol/LAlCl3
溶液用量在 0.8 ～ 1.4 mL范围内 ,对标准溶液显色
后的吸光度影响很小。本实验选用 0.5mol/LAlCl3
溶液 1.0mL。
2.3　显色时间的选择
　　取标准溶液 1.0mL,加入 0.5mol/LAlCl3溶液
1.0 mL,摇匀 ,显色不同时间后测其吸光度 。结果
表明 ,显色 0 ～ 10 min内吸光度逐渐上升 ,在 10 ～
70 min范围内较稳定 ,对标准溶液显色后的吸光度
变化 <3%,所以本实验选用显色时间为 15min。
2.4　乌药叶黄酮显色液稳定性
　　取样品溶液 0.5 mL按实验方法每隔 5 min测
1次吸光度 ,结果表明 ,乌药叶黄酮显色 45min内稳
定 ,之后吸光度下降 。本实验选择显色 15 min,超声
振荡 5 min后测定 。
2.5　芦丁标准曲线的绘制
　　分别取芦丁标准溶液 0.2, 0.5, 1.0, 1.5,
2.0 mL于 5只 10mL容量瓶中 ,在上述确定的最佳
实验条件下测定吸光度 。以芦丁浓度为横坐标 ,吸
光度为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,见图 4。经统计回归
处理 ,得到线性方程为:A=30.076C+0.006 5,相关
系数 R2 =0.999 6,浓度在 0.002 ～ 0.020 mg/mL范
围内线性关系良好 。
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第 9期 许海丹等 :乌药叶中总黄酮的含量测定
图 4　芦丁标准曲线
Fig.4　Rutincalibrationcurve
2.6　精密度实验
　　取样品溶液 0.2 mL6份 ,按上述实验确定的参
数进行分析 , RSD=4.33%,表明该法测定乌药叶总
黄酮含量的精密度良好 。
2.7　重复性实验及黄酮含量测定
　　称取同一批次乌药叶粉末 6份 ,按上述实验确
定的参数制备 、显色并分析样品 ,利用回归方程计算
出乌药叶中黄酮的含量 ,结果见表 1。由表 1可知 ,
实验条件下乌药叶总黄酮的平均提取率为 2.58%,
RSD=1.79%,表明本法测定乌药叶总黄酮含量具
有良好的重复性。
表 1　重复性实验测定结果
Table1　Determinationresultsofrepeatability
序号 样品质量 /g 吸光度 浓度 /(mg· L-1) 提取率 /% 平均提取率 /% RSD/%
1 1.001 8 0.129 60 4.090 2.55
2 1.000 1 0.134 73 4.260 2.66
3 1.000 4 0.127 85 4.032 2.52
4 1.000 1 0.132 03 4.170 2.61 2.58 1.79
5 1.001 0 0.130 25 4.111 2.57
6 1.000 1 0.129 56 4.088 2.55
2.8　加样回收率实验
　　取样品溶液 0.2 mL6份于 6只 25 mL容量瓶
中 ,分别加入 1.0 mg/mL芦丁标准溶液 0.05, 0.08,
0.15mL(各 2份),再分别显色后测定其吸光度 ,计
算总黄酮量和回收率 ,结果见表 2。
由表 2可知 , 平均回收率 =101.0%, RSD=
1.27%,加样回收率良好 。
表 2　加样回收实验测定结果
Table2　Determinationresultsofrecovery
序号 样品量 /mg 加标量 /mg 吸光度 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /%
1 0.085 6 0.050 0.173 18 0.136 1 100.4
2 0.085 6 0.050 0.172 65 0.135 7 100.1
3 0.085 6 0.080 0.207 16 0.165 7 100.1
4 0.085 6 0.080 0.207 17 0.165 7 100.1 101.0
5 0.085 6 0.150 0.295 12 0.242 4 102.9
6 0.085 6 0.150 0.294 91 0.242 2 102.8
3　结束语
　　本文建立了乌药叶中总黄酮含量的分析方法 ,
样品提取后 ,加入铝离子试剂 ,在弱酸性条件下 ,黄
酮类物质与铝盐形成稳定的黄色配合物 ,在可见光
区能获得稳定的特征吸收峰 ,借以测定其含量 。实
验结果表明 ,该方法简便可靠 ,为其研究开发及应用
提供参考依据。
参考文献:
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