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RP-HPLC法测定感冒清热颗粒荆芥穗、薄荷中总胡薄荷酮的含量



全 文 :·药品鉴定· 2011 年 7月第 8卷第 20期
中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
感冒清热颗粒由荆芥穗、薄荷、防风、柴胡、葛根、苦地丁
等组成,具有疏风散寒,解表清热的作用,用于风寒感冒,头
痛发热,恶寒身痛,鼻流清涕,咳嗽咽干等。其标准收载在《中
国药典》2010 年版,原来质量标准有葛根中葛根素的含量测
定方法[1]185。 方中君药荆芥穗具有散风湿、利咽喉、解表散风、
透疹的作用[2],用于感冒、头痛、麻疹、风疹,疮疡初起。其有效
成分胡薄荷酮具有抗炎的作用[3]。有报道[4-5]对其中的防风、葛
根进行升麻苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和葛根素的含量测
定,但未见有报道君药荆芥穗的含量测定。 荆芥穗和薄荷均
含有胡薄荷酮成分, 为能有效控制制剂中总胡薄荷酮的含
量,本文现参照《中国药典》2010 年版荆芥穗的含量测定方
法 [1]217,采用高效液相色谱法测定荆芥穗和薄荷中总胡薄荷
酮的含量,并对本实验方法进行方法学的研究,为更有效地
控制该成药的质量提供借鉴方法。
1 仪器与材料
日本岛津 LC-2010 高效液相色谱仪;SB5200DT 型超声
波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司);精密分析天平
(德国 Sartorius)。 甲醇(色谱纯,天津四友),其他试剂均为分
析纯。胡薄荷酮对照品(美国 ALDRICH 公司,供含量测定用,
批号 10529P0)。 感冒清热颗粒由广西华天宝药业有限公司
(批号 20100415、20100822、20100918)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用 Phenomenex Gemini 5u C18 110A 色谱柱(4.6 mm×
250 mm,5 μm),甲醇-水(50∶50)为流动相,检测波长为 252 nm。
柱温为 30℃。 在本条件下,样品其他成分对胡薄荷酮的测定
无干扰。 结果见图 1。
2.2 溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备 精密称取胡薄荷酮对照品 10.12 mg,
置 100 ml 棕色量瓶中,加甲醇使溶解,稀释至刻度,即得浓
度为 0.101 2 mg/ml 的对照品储备液。 精密吸取 1.0 ml 上述
对照品储备液,置 10 ml 棕色量瓶中,加甲醇溶解并稀释至
刻度,摇匀,即得。
2.2.2 供试品的制备 取本品约 1.0 g,研细,精密称定重量,置
具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 25 ml,称定重量,超声处理(功
率 250 W,频率 50 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补
足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
2.3 阴性对照溶液的制备
取处方中缺荆芥穗、薄荷药材制成的双阴性样品适量,
按“2.2.2 供试品的制备”项处理,制成缺荆芥穗、薄荷的双阴
RP-HPLC法测定感冒清热颗粒荆芥穗、薄荷中
总胡薄荷酮的含量
刘兰军 1,宋伟峰 2
1.佛山市禅城区澜石医院,广东佛山 528041;2.中山大学附属第三医院,广东广州 510630
[摘要] 目的:建立以 RP-HPLC法测定感冒清热颗粒荆芥穗、薄荷中总胡薄荷酮含量的方法。 方法:采用 Phenomenex
Gemini 5u C18 110A色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为:甲醇-水(50∶50),检测波长 252 nm,柱温为 30℃,流速
为 1.0 ml/min。 结果:胡薄荷酮进样量在 0.010 12~0.005 060 μg范围内有良好线性关系,平均加样回收率为 99.74%,
RSD 为 0.53%。 3批样品中总胡薄荷酮的含量分别为 0.063 18、0.063 24、0.063 22 mg/g。 结论:本方法灵敏、准确,专
属性强,重现性好,可作为感冒清热颗粒荆芥穗、薄荷中总胡薄荷酮的含量测定方法。
[关键词] 感冒清热颗粒;胡薄荷酮;含量测定
[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2011)07(b)-094-02
Content determination of pulegone of schizonepeta spike and mentha haplo-
calyx in Ganmaoqingre Granule by RP-HPLC
LIU Lanjun1, SONG Weifeng2
1.Lanshi Hospital of Chancheng District, Foshan City, Foshan 528041,China; 2.The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-
sen University, Guangzhou 510630
[Abstract] Objective: To establish the method for determination of pulegone of schizonepeta spike and mentha haplocalyx
in Ganmaoqingre Granule. Methods: The analytical column Phenomenex Gemini 5u C18 110A (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
was used. The mobile phase was composed of methanol-water (50 ∶50) at a flow rate of 1.0 ml/min. The wavelength of
UV detector was 252 nm and column temperature was 30℃. Results: The linear ranges of pulegone was 0.010 12-0.005
060 μg. The average recovery was 99.24% with RSD of 0.53%. The total contents of pulegone in three batches of samples
were 0.063 18, 0.063 24, 0.063 22 mg/g respectively. Conclusion: This method is sensitive, accurate, exclusive. It can be
applied to determine the content of pulegone of schizonepeta spike and mentha haplocalyx in Ganmaoqingre Granule.
[Key words] Ganmaoqingre Granule; Pulegone; Content determination
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2011 年 7月第 8卷第 20期 ·药品鉴定·
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报
20100415
20100822
20100918
0.063 18
0.063 24
0.063 22
0.49
批号 含量(mg/g) RSD(%)
性对照溶液。
2.4 线性关系的考察
精密吸取胡薄荷酮对照品(0.101 2 mg/ml)0.5、1.0、1.5、
2.0、2.5 ml,分别置 10 ml 棕色量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇
匀,即得。 精密吸取 10 μl,注入液相色谱仪,测定峰面积,以
峰面积为纵坐标(Y),进样量为横坐标(X),进行线性回归,
得回归方程:Y=40 198 424X+3 500(r=0.999 9)。 可见胡薄荷
酮进样量在 0.010 12~0.050 60 μg 范围内与峰面积具有良好
的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取胡薄荷酮对照品溶液 10 μl,重复进样 5 次,测
定胡薄荷酮峰面积,面积的 RSD 为 0.7%(n=5)。 可见方法的
精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取供试品溶液(批号 20100415)10 μl,分别于 0、
2、8、12、24 h 进样,测定峰面积。面积的 RSD 为 0.8%,表明供
试品溶液在 24 h 内稳定。
2.7 重现性试验
精密称取同一批样品(批号 20100415),共 5份,按“2.2.2
供试品溶液的制备”处理,依法测定面积,代入线性方程计算
胡薄荷酮的含量。 胡薄荷酮平均含量为 0.063 18 mg/g(RSD=
1.2%,n=5)。 结果表明本法重现性良好。
2.8 回收率试验
精密称取同一批号样品(批号 20100415,胡薄荷酮含量
0.063 18 mg/g)共 9份,分成 3组,每组 3份样品,分别精密加
入胡薄荷酮储备液 (0.010 12 mg/ml)各 1.0、2.0、3.0 ml, 按
“2.2.2 供试品溶液的制备”项处理,依法测定面积,代入线性
方程计算胡薄荷酮的含量。 计算回收率,结果见表 1。
表 1 回收率试验结果
2.9 样品测定
分别取三批感冒清热颗粒(批号为 20100415、20100822、
20100918),按“2.2.2 供试品溶液的制备”项处理,分别精密吸
取对照品溶液和供试品溶液各 10 μl,注入色谱仪,依法测定
面积。 计算样品中总胡薄荷酮的含量,结果见表 2。
表 2 感冒清热颗粒中胡薄荷酮的含量
3 讨论
笔者对样品处理进行研究,比较不同的提取方法(回流
提取、超声处理)、提取时间对胡薄荷酮提取率的影响。 结果
显示,采用 25 倍量的甲醇为溶剂超声处理(功率 250 W,频
率 50 kHz)30 min,可以获得较高的转移率。高效液相色谱法
测定感冒清热颗粒中胡薄荷酮含量准确、稳定、重现性好,可
用于对该药的质量控制。
[参考文献]
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[5] 田菁,李发美.HPLC 测定感冒清热颗粒升麻苷 5-O-甲基维斯阿米醇
苷[J].中成药,2002,24(9):671-673.
(收稿日期:2011-03-28)
图 1 各溶液的 HPLC 色谱图
0.251 7
0.252 0
0.252 2
0.305 6
0.305 4
0.305 3
0.402 0
0.402 3
0.402 6
0.015 90
0.015 92
0.015 93
0.019 31
0.019 30
0.019 29
0.025 40
0.025 42
0.025 44
0.025 98
0.026 02
0.025 97
0.039 50
0.039 49
0.039 52
0.055 78
0.055 76
0.055 79
0.010 12
0.010 12
0.010 12
0.020 24
0.020 24
0.020 24
0.030 36
0.030 36
0.030 36
99.60
99.80
99.21
99.75
99.70
99.85
99.93
99.87
99.97
99.74 0.53
样品量
(g)
样品中含
量(mg)
测得量
(mg)
加入量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
95