全 文 ：收稿日期:2001-05-23　　通讯作者:李发美 , Tel:(024)23843711-3336 , E-mail:fameili@ihw.com.cn。
文章编号:1006-2858(2001)06-0419-03
RP-HPLC法测定苦地丁及其复方制剂中紫堇灵的含量
黄　阁 , 赵怀清 , 李发美
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳　110016)
摘要:采用反相高效液相色谱法测定苦地丁及其中药制剂感冒清热颗粒中紫堇灵的含量。色谱柱
为APEX-ODS 柱;流动相为甲醇-15 mmol/ L磷酸盐缓冲液 pH 6.70(70∶30);流速为0.8 mL/ min;
检测波长为289 nm;采用外标两点法进行定量。在紫堇灵为 6.9 ～ 110.4μg/m L范围内线性关系
良好 ,相关系数 r=0.999 9。方法精密度 RSD 分别为 1.5%和 0.8%, 回收率为 97.3%和 97.5%。
方法适用于不同产地苦地丁及 3 种不同剂型感冒清热颗粒中的紫堇灵含量。
关键词:反相高效液相色谱法;苦地丁;感冒清热颗粒;紫堇灵
中图分类号:R 927　　　文献标识码:A
　　苦地丁又名地丁 、苦丁 、小鸡菜 , 系罂粟科
(Papaveraceae)植物紫堇(Corydal is bungeana
Turcz)的带根全草 ,亦为藏药“格周丝哇”的原植
物之一。中医用于清热解毒 ,活血消肿 , 治疗感
冒 、咳嗽 、肝炎 、水肿 、泄泻及多种炎症 ,尤其对风
湿病 、心肌炎有较好疗效[ 1] 。感冒清热颗粒为药
典收载复方中药品种 ,由荆芥穗 、防风 、柴胡 、苦地
丁等十一味中药组成[ 2] ,用于风寒感冒 ,头痛发
热 ,恶寒身痛等 。2000 年版《中华人民共和国药
典》在蔗糖型及无糖型的基础上又新增了乳糖型 ,
其中苦地丁作为“使”药使用。紫堇灵(co ryno-
line)是苦地丁的主要成分之一 ,据报道具有镇静 、
抗钩端螺旋体及肝损伤保护作用[ 3 , 4] ,有文献报
道薄层光密度扫描法[ 5] 、反相离子对高效液相色
谱法[ 6]测定单味药中的紫堇灵含量 ,但有关成方
制剂中其含量测定尚未见报道 。
1　材料与仪器
1.1　药材与试剂
苦地丁不同产地药材购自各地药材公司 ,由
沈阳药科大学生药教研室孙启时教授鉴定(拉丁
名为 Corydalis bungeana Turcz);感冒清热颗粒
购于沈阳同仁堂药店(有糖型 、无糖型为北京同仁
堂制药二厂生产 ,批号分别为 0110145 、0110282;
乳糖型为天津长城保健品厂生产);紫堇灵对照品
由本室自制 ,经 NMR确定结构 ,HPLC 归一化法
测定纯度为 99.5%;甲醇为色谱纯(山东禹王化
学试剂有限责任公司);其余试剂均为分析纯(沈
阳化学试剂厂)。
1.2　仪器
Jasco PU-980高效液相色谱仪(日本分光公
司);Jasco UV -975 紫外可见分光光度检测器
(日本分光公司);CKChrom 色谱工作站(Scientif-
ic Sy stem Inc.);ZFQ-85A 旋转蒸发仪(上海医
械专机厂);pHS -25 型酸度计(上海分析仪器
厂)。
2　方法与结果
色谱条件:色谱柱:APEX-ODS(25 cm ×
0.46 cm ,5 μm , Jones Chromatography);流动相:
甲醇-15mmol/L 磷酸盐缓冲液 pH 6.70(体积比
70∶30);流速:0.8 mL/min;检测波长:289 nm;柱
温:28℃。
2.1　样品溶液制备
单味药:将苦地丁药材粉碎并过 40目筛 ,备
用。精密称取药材干燥粉末0.5 g ,加入10 mL甲
醇 ,浸泡1 h ,超声30 min ,滤过 ,甲醇洗涤残渣 ,将
滤液浓缩至25 mL容量瓶 ,并稀释至刻度。微孔
滤膜(0.45μm)滤过 ,得供试品溶液。
感冒清热颗粒:精密称取研磨后的样品粉末
2 g ,加入20 mL甲醇 ,浸泡1 h ,超声30 min ,滤过 ,
洗涤不溶物 , 将滤液浓缩定容于10 mL容量瓶。
微孔滤膜(0.45μm)滤过 ,得供试品溶液。
2.2　标准曲线制备
精密称取紫堇灵对照品约 10 mg 于50 mL量
瓶中 ,用甲醇溶解并定容 ,作为对照品储备液 。精
第 18 卷 第 6 期
2 0 0 1 年 1 1 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.18 　No.6
Nov.2001 p.419
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2001.06.010
密吸取对照品储备液 0.25 、0.5 、1.0 、2.0 、4.0 mL
于10 mL量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,微孔
滤膜滤过 。取续滤液20 μL ,按上述色谱条件进行
分析。以对照品浓度为横坐标(X),对照品峰面
积为纵坐标(Y),得回归方程 Y =1.45×104X -
4.62×102 , 相关系数 r=0.999 9 ,线性为6.9 ～
110.4μg/mL。
2.3　精密度测定
按样品制备方法各制备供试液 5份 ,在上述
色谱条件下取20μL进样分析 ,测得结果见表 1 。
Tab.1　Precision of the HPLC method for determining corynoline(n=5)
Corynoline content(μg·g-1)
1 2 3 4 5
Average content
(μg·g -1)
RSD
(%)
Corydalis bungeana Turcz 870.5 867.7 870.4 895.1 878.8 875.9 1.5
Ganmao Qing re G ranules 53.39 55.80 56.14 55.10 56.02 55.69 0.80
2.4　回收率测定
精密称取苦地丁干燥粉末0.5 g及感冒清热
颗粒2 g各 6份 ,分别精密加入一定量的对照品储
备溶液 ,挥干甲醇 ,按样品制备方法制备供试品溶
液 ,在上述色谱条件下取20μL进样分析 ,样品的
回收率和相对标准偏差见表 2。
Tab.2　Recovery of corynoline(n=9)
Added(μg) Found(μg) Recovery(%) Average(%) RSD(%)
Corydalis 138 137.3 97.6 97.3 1.9
bungeana 138 134.8 96.5
Turcz 138 135.2 98.0
276 277.8 101.4
276 265.5 96.2
276 272.8 98.8
414 391.5 94.6
414 396.8 95.9
414 400.5 96.7
Ganmao 55.2 53.6 97.1 97.5 1.3
Qing re G ranules 55.2 52.6 95.3
55.2 53.8 97.5
82.8 81.2 98.0
82.8 81.1 97.9
82.8 78.9 95.3
138 137.3 99.3
138 135.3 97.9
138 133.2 96.5
2.5　样品测定
精密吸取供试品溶液 ,进样 20μL 按上述色
谱条件测定 3 次 ,按外标两点法计算出紫堇灵的
含量 ,取平均值 ,其色谱图见图 1。5种苦地丁中
及 3种剂型的感冒清热颗粒中紫堇灵的含量见
表 3。
　
Fig.1　Chromatogram of two samples and standard
A —Corydalis bungeana Turcz;B—Ganmao Q ingre Granules;C—Standard;①—Corynoline
—420— 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 18卷
Tab.3　Content of corynoline
Corydalis bungeana Turcz
Tianjin Hebei Shandong Shenyang Beijing
Ganmao Qingre G ranules
Sucrose No sugar Lacto se
Content(μg·g-1) 1359 1146 1169 875.9 1677 55.69 104.9 178.0
RSD(%) 1.5 2.9 2.0 1.5 1.7 0.80 1.8 2.9
3　讨论
　　紫堇灵为一异喹啉类生物碱 ,其结构式如图
2 ,易溶于氯仿 、丙酮等有机溶剂 。在样品溶液制
备过程中 ,同时考察了分别以甲醇 、丙酮 、氯仿为
溶剂的提取效率 ,其中甲醇提取最为完全;还考察
了热回流 、冷浸 、超声提取等方法 ,发现冷浸法提
取量较少 ,而热回流提取的杂质较多 ,干扰紫堇灵
的测定 。溶剂甲醇量的多少对结果影响较小 ,
10 mL即能提取完全。《中华人民共和国药典》中
感冒清热颗粒的鉴别项中有苦地丁的薄层鉴别 ,
但没有含量测定方法 。本文采用高效液相色谱
　
Fig.2　The structure of corynoline
法 ,测定苦地丁和感冒清热颗粒中的紫堇灵含量 ,
样品处理简单 ,方法快速准确 ,对单味药材苦地丁
及其成方制剂的质量控制具有一定的参考价值。
参考文献:
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1994 , 29(10):785-789.
Determination of the content of corynoline in Cory-
dalis bungeana Turcz and its compound Chinese
medicinal preparations by RP-HPLC
HUANG Ge , ZHAO Huai-qing , LI Fa-mei
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang　110016 , China)
Abstract:A reversed-phase HPLC method w as described for determination of the content of co rynoline in
Corydalis bungeana Turcz and Ganmao Qing re Granules.The samples were separated on an ODS column
w ith the mobile phase of methanol-15 mmol/L pH 6.70 phosphate buffer (70∶30).The flow rate was
0.8 mL/min , and the detect ion w as set at 289 nm .The calibration curve w as linear in the range of 6.9 ～
110.4μg/mL corynoline (r=0.999 9).The RSD was 1.4% and 0.80%, and the average recovery was
97.3% and 97.5% for Corydalis bungeana Turcz and Ganmao Qingre Granules respectively.The method
is suitable for the determination of the content of co rynoline in compound preparations containing Corydalis
bungeana Turcz.
Key words:RP-HPLC;Corydalis bungeana Turcz;Ganmao Qing re Granules;Corynoline
—421—第 6 期 黄　阁等:RP-HPLC 法测定苦地丁及其复方制剂中紫堇灵的含量