全 文 ：文章编号：!#$!%#&（&&）!$’$#
三七叶皂苷抗炎作用机理的实验研究
李淑惠，李晓辉，张海港，唐 渊，周见至，王晓芹，胡 建
（第三军医大学药理教研室，重庆 #’’%）
摘要：目的：研究三七叶皂苷（()*+）对大鼠气囊滑膜炎的抗炎作用机理。方法：皮下注射角叉菜胶
（,-.）&/01231 复制大鼠气囊滑膜炎模型，气囊灌洗液中白细胞数、蛋白含量、45 及 647 含量分别用
试管稀释法、+89.: 法、;<=-)8> 法及酶联免疫吸附分析法进行。采用放免分析法进行气囊灌洗液中性
粒细胞（4?@）内环磷酸腺苷（ABC(）含量的测定。结果：()*+DE!&E
F31$!能剂量依赖性地升高中
性粒细胞（4?@）内 ABC(含量，抑制炎症介质肿瘤坏死因子（647）及一氧化氮（45）水平的升高，显著
降低灌洗液中白细胞数量及蛋白含量。相关分析显示，()*+升高 4?@内 ABC(水平的作用与其降低
647、45含量的能力呈显著负相关。结论：升高 4?@内 ABC(水平及其抑制 45及 647含量升高是
()*+发挥抗炎作用的重要分子机制。
关键词：皂苷；炎症；肿瘤坏死因子；一氧化氮；环磷酸腺苷
中图分类号：;GD/F! 文献标识码：B
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收稿日期：&$!!$%
基金项目：重庆市中医药局资助课题（48FGG’&J
作者简介：李淑惠T!GD#$ J，女，华西医大药理学硕士，第三军医大学在读博士，研究方向：中药药理。
第 !% 卷 第 ! 期 哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 [8>F!%E 48F!
&& 年 ’ 月 \8@.)-> 8Q ]-.K<) ^)<=?.O YA第 ! 期 李淑惠，等：三七叶皂苷抗炎作用机理的实验研究
三七是五加科多年人参属植物，具有止血祛
淤、消肿镇痛等作用。传统中医多以三七根入药。
近研究发现，三七叶叶所含的三七叶皂苷（#$#%
$&’&()$*+($&*),+ &- ’.+ /+#0+*1 $23）具有镇静、镇
痛、清除氧自由基等药理作用 4!，56，其组创建与三七
根皂苷不同但有重叠 476，鉴于三七叶资源十分丰
富、来源更为广泛而价廉，因此深入探讨 $23 药
理活性及其作用机制对于植物药三七的综合利用
具有重要意义。本文在既往观察到具有抗炎作用
的基础上 486，进一步以角叉莱胶（9#::#(++$#$1 9#:）
所致大鼠气囊滑膜炎为模型，观察了 $23对一氧
化氮 （$)’:); &%),+1 <=）、肿瘤坏死因子（’>?&:
$+;:&*)* -#;’&:1 @中性粒细胞（$+>’:&B.)/1 <+>）内第二信使分子环磷
酸腺苷（;C;/); #,+$&*)$+ ?&$&B.&*B.#’+1 ;DE）水
平的影响，旨在初步阐明 $23良好抗炎作用的分
子机量，为充分合理利用中医药资源、发掘新的有
效抗炎药物提供实验依据。
! 材料与方法
!F! 材料
!）药品与试剂：$23（纯度 GGH，中国科学院
昆明植物研究所提供）；地塞米松 （,+%#?+’.#*&$1
I+%，美国 J)(?#）；角叉莱胶（9#::#(++$#$1 9#:1 辽
宁药物研究所）；肿瘤坏死因子（’>?&: $+;:&*)* -#;K
’&:$ @0#$&/（美国 J)(?#）；;DE 放免分析药盒（上海第
二医学院），其它试剂均为国产分析纯级。
5）实验动物
M)*’#: 大鼠（!），体重（!NOP78）(，第三军医大
学实验动物中心提供 （动物合格证号：医动字第
587Q!QOQ号）。
!F5 方法
!）实验动物处理：随机将大鼠分为 R 组：正常
组、致炎组、9#:S$23 RQ、!5Q、58Q?(FT(U!三个组、
9#:SI+% !?(FT(U!组。药物处理组于 9#:致炎前 7Q
分钟及致炎后 R. 分别腹腔注射（)B）相应药物，对
照组给予等容量溶媒，各组大鼠 9#: 致炎后 !5. 脱
颈椎处死，用无钙镁 V#$TW*液灌洗，收集灌洗液进
行有关指标测定。
5）大鼠气囊滑膜炎模型复制：参照文献方法
进行4O6。气囊内注射 9#: 5O?(FT(U!致炎，各组动物
处死后，用无钙镁 V#$TW*液灌洗气囊，收集灌洗
液，少许行白细胞计数及分类计数，其余离心，分
别收集上清液和白细胞（@CB#$ X/>+ 检查白细胞活
力大于 GYH，<+>占约 GOH），供各项指标测定。
7）白细胞计数及分类计数：按常规法进行。
8）灌洗液中 @附分析法进行 4R6。具体操作按药盒使用说明书进
行。将 @三次，加封闭缓冲液进行封闭，各孔加标准 @待测样品 OQ!3 室温反应 !.，用洗涤缓冲液洗三
次，加兔抗 @根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体，室温反应
RQ?)$，洗三次。加底物邻苯二胺（=I）显色，用
8?&/F3U!V5J=8终止反应，酶联读数仪上于 8G5$?
处测 =I值。根据标准曲线计算样品中 @量，结果以 ?(F3U!表示。
O）灌洗液中 <=含量测定：参照文献方法4Y6进
行。（!）样品处理：取样品 QF5O?3，加入 8?&/F3U!过
氯酸 QF!?3，混匀后离心（7QQZ(，7Q?)$），弃沉淀，
UYQ[贮存待测。（5）测定：取样品或不同浓度的亚
硝酸钠标准液加蒸馏水至 5?3，加入 QF!H :)0#$&/
5QQ!3、!5Q?&/F3U!盐酸 NQQ!3，于波长 O5Q$? 处测
定光密度值。根据标准曲一计算样本 <=含量，以
?(F3U!表示。
R）<+> 内 ;DE 含量测定：参照文献方法进
行样品处理及测定 4N6。（!）样品处理：取细胞悬液
（!Z!QG3U!）!?3 于己硅化试管中，于 !QQ[水浴煮
沸 7?)$，立即冰浴冷却，离心 7QQQ:B? !Q?)$，取上
清于另一试管中，真空干燥待测。（5）测定：具体操
作方法按 ;DE 放免药盒说明书进行。结果以
B?&/F!QUR ;+//表示。
Y）数据处理：采用本校数学教研室提供的医
用数理统计程序包中 IDU7 对单纯致炎组及
$23 三个剂量组相应指标进行相关分析，采用
IDU!对实验资料进行 ’检验，所有数据用均数P
标准差（!#）表示，以 $\QFQO 或 $\QFQ! 为显著性
水平。
5 结果
5F! $23 对灌洗液白细胞数量及蛋白含量的影
响
9#:致炎后 !5.，灌洗液中蛋白含量及白细胞
数均明显升高，表示造模成功；$23 三个剂量组
能一定程度地降低灌洗液中蛋白含量及白细胞数，
且呈量效关系，结果见表 !。
7!
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 （自 然 科 学 版） !! 年
!#! $%&’对灌洗液中 ()*、)+含量的影响
由表 ! 可见，,-. 致炎后 /!0，灌洗液中 ()*
及 )+ 含量均明显高于正常组，$%&’ 1，/!，
!234#546/ 能一定程度地抑制灌洗液中 ()* 及
)+ 含量的升高，其对 ()* 的抑制率分别为
/#7/8，99#!:8，2:#2:8，对 )+ 的抑制率分别为
;#?具有类似作用。
!#9 $%&’对 )>@内 ABC$含量的影响
由表 !可见，,-.致炎后 /!0，气囊灌洗液白细
胞内 ABC$ 含量明显降低（!D#/），$%&’ 三个剂
量组能一定程度地升高白细胞内 ABC$ 含量，且
呈量效关系。
!#2 相关分析结果
$%&’ 升高 )>@ 内 ABC$ 水平的作用与其降
低 ()*、)+含量的能力呈显著负相关（!分别为：
6#:<9<和6#:17:，!均D#/）。
9 讨论
三七作为一种名贵中药，历来受到医药学家的
广泛重视。但传统多以三七根入药，这极大地限制
了其资源的充分合理应用。本课题组鉴于三七叶资
源十分丰富而价廉，$%&’ 组分与三七根皂苷不同
但有重叠 E9F，以及三七具有消肿镇痛等药理作用，
提示 $%&’可能存在抗炎活性。本文在我们既往观
察到 $%&’ 具有良好抗炎作用的基础上 E2F，进一步
对其抗炎分子机制进行了探讨。
炎症细胞的游出和渗出是炎症的两大显著特
征，炎性分子的生成则是炎症发生发展的重要分子
基础。本实验再次观察到，$%&’ 能明显降低 ,-.
致炎分子大鼠气囊灌洗液中 )>@ 数量，降低灌洗
液中蛋白含量，表明 $%&’对大鼠气囊滑膜炎确具
有良好的抗炎作用。本实验进一步观察到，,-. 致
炎后 /!0，大鼠气囊灌洗液中 ()* 含量明显升高，
腹腔给予不同剂量的 $%&’B-能明显降低 ()* 含
量，且呈量效关系。结合近年给正常小鼠注射 ()*
可导致小鼠全身性致死性炎症 E:F；()* 抗体或
()* 抑制剂治疗类风湿性关节炎和其他慢性炎症
性疾病有良好效果 E/，//F的报道，表明降低 ()* 含
量是 $%&’发挥抗炎作用的一个重要机制。此外，
本实验还观察到 ,-. 致炎后大鼠气囊灌洗液中
)+含量明显升高，不同剂量的 $%&’ 能一定程度
地阻止 ,-. 致炎大鼠灌洗液中 )+ 含量的升高，
且呈剂量依赖性。结合其它学者大鼠关节炎时 )+
含量明显升高，抑制 )+ 合成可产生抗炎作用的
报道E/!F，表明 $%&’抑制 )+ 水平的升高是其发挥
抗炎的作用的又一重要环节。
ABC$作为一个重要的细胞内第二信使分子，
与炎症有密切关系。本实验观察到，,-. 致炎后大
鼠 )>@ 内 ABC$含量明显降低，且与中性粒细胞
游出呈平行性变化；$%&’ 三个剂量在剂量依赖性
地升高 )>@ 内 ABC$含量的同时，还具有明显的
抑制 )>@ 游走的作用 （表现为减少渗出液中白细
胞数量），提示 $%&’ 对功能亢进的 )>@ 具有抑制
作用。活化的 )>@可表达 )+，是炎症是 )+升高
的重要来源E/9F；因此抑制 )>@ 功能可能是 $%&’降
低 )+ 含量的机制之一。其他学者在浓毒性休克
模型上观察到，升高 ABC$ 水平可抑制 ()* 的生
成E/2F；结合本实验 $%&’升高 )>@内 ABC$水平的
作用与其降低 )+ 及 ()* 含量的结果呈显著负
相关（!均D#/）的相关分析结果，表明升高 ABC$
含量，从而 抑制炎性细胞因子 ()* 及 )+含量的
升高与 $%&’发挥抗炎作用具有密切关系。
E参考文献F
E/F 雷伟亚# 三七叶总皂苷的镇痛及对中枢神经系统的抑制作用EGF#
中药通报，/:<2，:（9）：9<62/#
E!F周金黄#免疫药理学进展—基础与临床ECF#北京：中国科学技术
出版社，/::9，/76/7<#
E9F 魏均娴，唐宝书 # 三七叶皂苷成分的研究 EGF# 华西药学杂志，
/:<1，/（/）：76/#
E2F 李淑惠，楚延# 三七叶皂苷抗炎作用的实验研究EGF# 四川生理科
学杂志，/:::，!/（2）：!!#
E;F ’H IJK ,JL M# B%NO6O%PQ-3-NR.S >PP>ANT RP NRN-Q T-UR%O%T RP U-%-?
表 / $%&’对灌洗液白细胞数量及蛋白含量的影响
（!#$，%&<）
组别
剂量
（34V54）
白细胞数
（/W/:V’）
蛋白含量
（4V’）
%R.3-Q AR%N.RQ 6 !#:;X#;2 #;:X#!
,-. 3RY>Q 6 27#<7X/;#92ZZ 7#21X/#!1ZZ
,-.[$%&’ 1 2#1;X/9#!/ZZ 7#!/X/#,-.[$%&’ /! 9!#91X:#,-.[$%&’ !2 !;#/,-.[=>? / /1#<;X1#::ZZ!! ;#9:X/#!ZZ!!
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表 ! $%&’对灌洗液中 ()*、)+含量及 )>@内
ABC$含量的影响 （!#$，%^<）
组别
剂量
（34V54）
()*
（34V’）
)+
（34V’）
ABC$
（U3RQV/61）
)R.3-Q 4.R@U 6 /#/7X#!2 #:7X#!2 !#/X#2!/
,-. 3RY>Q 6 1#:/X!#9/ 2#$%&’[,-. 1 1#/7X!#29ZZ 2#;2X!#//ZZ #7$%&’[,-. /! 2#1/X/#/2ZZ! 9#;!X#:/ZZ! /#/!$%&’[,-. !2 9#2:X/#!2ZZ!! !#7/X#7!ZZ!! /#;;2X#;;!!!
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9!
第 ! 期 李淑惠，等：三七叶皂苷抗炎作用机理的实验研究
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2(4/$(H .F$#I&(’)*+, * J33C#4 A($1#H’6 !7K76 !!;:!<= !?!L,
)L+罗向东，杨宗城，黎鳌，等, 简捷、灵敏的一氧化氮间接测定法)*+,
中华创伤杂志，!77@，!9（@）：!K>
)K+ 牛惠生，李怀芬，叶文忠, ;9M# ! 射线对肿瘤细胞内 .-A0 含量
和质膜腺苷酸环化酶活力的影响 )*+, 中华放射医学与防护杂
志，!778，!8（>）：N!!,
)7+ D#.1(O&(H P6 -3(4##$ 0 /H Q2#C.I/(2$ 0 ($ /4, R&GG(2($&/4 2(S
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G(.$’ #G O($#Z&GF44&(6 / #?’O(.&G&. O1#’O1#H&(’$(2/’( &1&T&$#26
# $1( O2#HC.$&# #G JB?!96JB?!8 O@9 /H ON> ’CTC&$’ TF 3C2&(
O(2&$#(/4 3/.2#O1/%(’ )*+, J33C#O1/23/.#4#%F6 89996 @7 :N<=
NN>?@N,
故将该化合物鉴定为 !谷甾醇!!#!!$ 葡萄糖
苷。
化合物（%&）黄色固体，3O：NNNcNN;d（熔点仪
未校正）。!DUAY（RA5\?H;）#OO3：#&’(（%)，*，
+,&’-).），/’01（%)，*，+,&’-).），与尿嘧啶 213一致，
同时该化合物与尿嘧啶标准品共薄层，故将其鉴
定为尿嘧啶。
化合物（%4）白色晶体，3O：!>8c!>>d（熔点仪
未校正），WJ?A5给出分子离子峰 3 e [：!@8 （Af），
结合氢谱及碳谱数据确定及分子组成为 M;D;\@，
!DUAY（RA5\?H;）#OO3：#(’5(（%)，678）及 /’(1
（%)，678）为活泼氢信号，#4’50（%)，8），1’0（%)，8）
分别为 )!1 及 )! 的信号；#0’-(（-)，8）为!9)-!
#!的信号峰。其波谱数据与文献 2&3报道的基本一
致，故将其鉴定为 /!羟基!-!羟基!-!羟甲基!0!
吡喃酮。
)参考文献+
)!+ M#4& *, Q/22#X6 D/# D,5C6, 5O&2#gC&/[#4&(6 - U#](4 5CT’$/.(
0 &1&T&$#2 X&$1 - U(X M/2T# 5I(4($#6 J’#4/$&# G2#3 !#
$%&’())* +),-($%)*+, ./*&0,) /+ 1,2*&,) 3&/4*526 !77@6 >L:@<= @!L?
@L;,
)8+ U\Q\Yh 5DJY-UW6 DJ\W_h^J P-^WU-^-6 ^-ah\ hWS
R-6 5$(2#4 -/4F’&’ #G R3&2(’&’$/$ /H 5(’&$&]( 5$2/&’ #G i($C2/S
&/ J/4(gC/4&’)*+, 01F$#.1(3&’$2F6 !77;6 @!6 !N9!,
)N+ U\Q\Yh 5DJY-UW6 -^JY- Q-_-5DJ6 AJM-J\A -5h^\6
WGG(.$ # W2%#’$(2#4 Q&#’F$(’&’ #G - VC%&.&]( ’’G?!976 J Q#$2F$&’
.&(2(/)*+, 01F$#.1(3&’$2F6 !7796 876 8>!N,
)@+ 51/’1& Q, A/1$#6 $2&$(2O(#&H’ ’/O#&’ G2#3 A(H&./%# D&’O&H/)*+6
O1F$#.1(3&’$2F6 !77!6 N7:!9<= NNK7?NN7N,
)>+ 国家医药管理局中草药情报中心主编, 植物有效成分手册)A+,
北京：人民卫生出版社，!7K>，N9L,
);+ 5/H$4(2 5$/H/2H 5O(.$2/)*+6 !DUAY=;!7;,
)L+ WJB?5/FF/H, 5A6 5/F(H, D, A6 A#C’/, 5, -6 QC44 O1/23 ’.& -’’&C
h&])*+6 !7K;6 7:!<= !;@?LN,
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