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新疆一枝蒿的质量标准研究



全 文 :新疆一枝蒿的质量标准研究*
热依木古丽·阿布都拉,仲婕,佐艾热·艾孜江,阿吉艾克拜尔·艾萨
(中国科学院新疆理化技术研究所植物资源化学重点实验室,乌鲁木齐 830011)
[摘 要] 目的 对新疆一枝蒿药材的水分、总灰分、药材鉴别和酮酸含量测定等方面进行研究,建立新疆一枝蒿
药材的质量标准。方法 采用《中华人民共和国药典》2005 年版一部附录 Ⅸ H 水分测定法中的烘干法和附录 Ⅸ K 灰
分测定法中总灰分测定方法检查药材的水分和总灰分;采用附录Ⅵ B 薄层色谱法建立定性鉴别一枝蒿药材的方法;采
用高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定新疆一枝蒿药材活性成分酮酸的含量。结果 新疆一枝蒿药材的含水量不得超过
8. 0%,总灰分不得超过 16. 0%;薄层色谱斑点清晰、专属性强;酮酸在 5. 60 ~ 56. 00 μg 范围内线性关系良好,回归方程
Y=8. 522 3X-6. 150 7,r= 0. 997 2,平均加样回收率为 99. 7%,RSD=0. 25%。结论 该方法操作简便、准确快速、重复性
好,有助于新疆一枝蒿药材的质量控制,可为药用植物资源的开发利用提供科学依据。
[关键词] 新疆一枝蒿;酮酸;色谱法,薄层;色谱法,高效液相
[中图分类号] R29. 08;R282. 71;R284 [文献标识码] A [文章编号] 1004-0781(2011)09-1200-03
Quality Control of Artemisia rupestris L. from Xinjiang Province
Rahima ABDULLA,ZHONG Jie,Zulheyre EZIZ,Haji Ekber AISA(Xinjiang Key Laboratory of Plant
Resources and Natural Products Chemistry,Xinjiang Technical Institute of Physicis and Chemistry,Chinese
Academy of Sciences,Urumqi 830011,China)
ABSTRACT Objective To establish the quality standards for Artemisia rupestris L. from Xinjiang province by
determining water content,total ash,crude material identification and rupestonic acid quantification. Methods Moisture and
total ash were determined based on the procedures recorded in the Appendix Ⅸ H,Ⅸ K of pharmacopoeia,published in 2005.
And the Artemisia rupestris L. was identified by using a thin layer chromatography (TLC)method (the Appendix Ⅵ B). and the
bioactive component rupestonic acid was determined by HPLC (the Appendix Ⅵ D) ,respectively. Results The water
contained in Artemisia rupestris L. was less than 8. 0%,and the total ash was lower than 16. 0% . The TLC spots were clear and
specific;the rupestonic acid showed a good linear relationship at a range of 5. 60-56. 00 μg,with the regression equation as Y=
8. 522 3X-6. 1507,r = 0. 997 2 respectively. And the average recovery was 99. 7% (RSD = 0. 25%). Conclusion The
method is easy,accurate,quick and reproducible,which is benefit for the quality control of Artemisia rupestris L.,and providing
scientific basis for development of Artemisia rupestris L.
KEY WORDS Artemisia rupestris L.;Rupestonic acid;TLC;HPLC
新疆一枝蒿(Artemisia rupestris L.)系菊科蒿属植
物,主产于新疆维吾尔自治区,维吾尔语称“一孜乎艾
曼尼”,是维吾尔医常用药材,民间用药历史悠久[1],
具有抗炎、解毒、抗癌、抗变态反应、健胃消食、活血化
淤等作用;临床上常用于感冒、荨麻疹、咽炎、扁桃体
炎、肝炎等疾病的治疗,对感冒和肝炎的疗效尤为显
著[2-3]。近年来,一枝蒿一直是新药开发研究的热点。
[收稿日期] 2010-11-12 [修回日期] 2011-04-29
[基金项目] “中国科学院、国家外国专家局创新团队国
际合作伙伴计划”资助;新疆维吾尔自治区科技计划项目(基金
编号:200910105) ;“国家药品标准提高行动计划”专项资金(基
金编号:773)
[作者简介] 热依木古丽·阿布都拉(1976-) ,女,维吾
尔族,新疆人,助理研究员,硕士,研究方向:民族药学。电话:
0991-3838635,E-mail:rahima@ ms. xjb. ac. cn。
[通讯作者] 阿吉艾克拜尔·艾萨,维吾尔族,研究员,教
授,博士生导师,研究方向:民族药学。电话:0991-3835679,
E-mail:haji@ ms. xjb. ac. cn。
随着对一枝蒿药材需求的不断增大,导致市场上野生一
枝蒿供不应求,随之开始大面积栽培一枝蒿。目前,对
新疆一枝蒿药材的化学成分、药理作用等方面研究较
多。而药材质量标准方面,除了在《维吾尔药志》有性状
和显微描述外,尚无比较全面的报道。因此,笔者对新
疆一枝蒿药材进行了水分、总灰分及含量测定,规定其
限度,并建立了新疆一枝蒿药材的薄层色谱鉴别方法,
同时以新疆一枝蒿活性成分酮酸为对照品,采用高效
液相色谱法(HPLC)对 16 批不同产地的药材进行含量
测定,建立了一种稳定、可靠的药材质量标准。
1 仪器和试药
1. 1 仪器 Dionex Ultimate 3000 型高效液相色谱仪
(美国) ;TCC-3000 自动进样器;UVD-3100 紫外检测
器;Chromeleon 色谱工作站,四元溶剂系统、在线脱气
机、柱温箱;Phenomenex Synergi Fusion-RP (4. 6 mm×
250 mm,4 μm)色谱柱;岛津 UV-2550 型紫外可见分
光光度仪(日本) ;Buchi R-210 型旋转蒸发仪(瑞士) ;
ESJ180-4 型万分之一电子天平(沈阳龙腾电子有限公
·0021· Herald of Medicine Vol. 30 No. 9 September 2011
司) ;SZ-93 自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器
厂) ;SK2200LH 型超声波清洗机;HSGF254型薄层层析
硅胶板(青岛海洋化工厂)。
1. 2 试剂 甲醇、乙腈(色谱纯,Fisher 公司) ;其他试
剂均为分析纯;水为二次重蒸水;酮酸标准样品为本实
验室从新疆一枝蒿中制备的标准样品 (批号:
20081022) ,HPLC法检测纯度为 99. 66%;新疆一枝蒿
药材 16 批次,收集于不同产地,由新疆西域药业有限
公司提供,经中国科学院新疆生态地理研究所克里木
教授鉴定为 Artemisia rupestris L.,符合卫生部药品标
准中药材第 1 册(1991 年)有关各项规定。
2 方法与结果
2. 1 水分测定 分别取 3 批供试品适量,按 2005 年
版《中华人民共和国药典》附录Ⅸ H 第一法规定测
定[4],水分含量结果为 5. 87% ~ 7. 11%,平均值为
6. 59% (n=3)。暂定水分应不得超过 8. 0%。结果见
表 1。
2. 2 总灰分测定 分别取 3 批供试品适量,按《中华
人民共和国药典》附录Ⅸ K 规定测定总灰分含量[4],
结果为 7. 65% ~13. 33%,平均值为 10. 50% (n = 3)。
因药材总灰分各地差异比较大,暂定总灰分不得超过
16%。结果见表 1。
表 1 新疆一枝蒿水分、总灰分测定结果
Tab. 1 Determination of moisture and total ash in
Artemisia rupestris L. %,n=3
编号 水分 总灰分
1 6. 80 13. 33
2 5. 87 7. 65
3 7. 11 10. 53
平均值 6. 59 10. 50
2. 3 定性鉴别 取本品粉末 2. 5 g,加甲醇 100 mL,
超声处理 10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇 2 mL溶
解,作为供试品溶液。另取酮酸对照品,加甲醇制成每
毫升含 2 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法
(《中华人民共和国药典》附录Ⅵ B )实验,吸取上述
两种溶液 5 μL,分别点于同一硅胶 GF254薄层板上,以
石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶1)为展开剂,展
开,取出,晾干,置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品
色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显示相同颜色
的荧光斑点。结果见图 1。
2. 4 含量测定
2. 4. 1 对照品溶液的制备 精密称取酮酸对照品
0. 005 6 g,置于 10 mL 量瓶中,加甲醇溶解并定容至
刻度,摇匀,再精密量取此溶液 1 mL,置于 10 mL量瓶
中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(每毫升含酮酸 56 μg)。
2. 4. 2 供试品溶液的制备 取新疆一枝蒿药材粉末
(过孔径 0. 85 mm 药筛)约 1 g,精密称定,置具塞锥
形瓶中,精密加入甲醇 100 mL,超声处理(功率
250 W,频率为 40 kHz)10 min,放冷,过滤,置于
100 mL量瓶中,甲醇定容,摇匀,即得。
2. 4. 3 测定波长的选择 经紫外扫描,化合物一枝
蒿酮酸在 245 nm 处有最大吸收,所以选定 245 nm 作
为检测波长。
图 1 不同采集地的新疆一枝蒿薄层色谱图
1.昌吉;2.新湖农场;3.南山板房沟;4.对照品
Fig. 1 TLC chromatogram of Artemisia rupestris L. from
different habitats
1. Changji;2. Xinhu farm ;3. Nanshan Banfanggou;4.
reference
2. 4. 4 色谱条件 Phenomenex Synergi C18(4. 6 mm×
250 mm,4 μm)色谱柱;流动相为甲醇-0. 2%甲酸水溶
液(67∶33) ;柱温 35 ℃;流速为 1 mL·min-1;检测波
长 245 nm;进样量 10 μL;检测时间 20 min。理论板数
按酮酸峰计算应不低于 2 000。在此条件下,分别吸
取对照品、供试品溶液各 10 μL,注入色谱仪,结果色
谱图保留时间适中,分离度较好,见图 2。
2. 4. 5 线性关系考察 精密吸取“2. 4. 1”配制的酮
酸对照品溶液 1. 0,2. 0,4. 0,6. 0,8. 0,10. 0 mL,分别
置于 10 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,分别取
稀释液 10 μL,进样,按上述色谱条件测定,以峰面积
对酮酸进样量做线性回归,回归方程为: Y =
8. 522 3X-6. 150 7,r = 0. 997 2。结果表明酮酸在
5. 60 ~ 56. 00 μg范围内与峰面积有良好的线性关系。
2. 4. 6 精密度实验 精密吸取按“2. 4. 2”项配制的
供试品溶液,重复进样 6 次,每次 10 μL,按上述色谱
·1021·医药导报 2011 年 9 月第 30 卷第 9 期
条件,测峰面积,以峰面积计算 RSD 为 1. 02%(n =
6) ,结果表明方法精密度良好。
图 2 新疆一枝蒿对照品与药材的 HPLC色谱图
A.对照品;B.一枝蒿药材;1.酮酸
Fig. 2 HPLC chromatograms of reference and Artemisia
rupestris L.
A reference;B. Artemisia rupestris L.;1. rupestonic acid
2. 4. 7 稳定性实验 取供试品溶液,放置室温,分别
在 0,2,4,6,8,10,12 h 进样测定酮酸峰面积,以峰面
积计算,RSD为 0. 72%(n = 7) ,结果表明供试品溶液
在 12 h 内稳定性良好。
2. 4. 8 重复性实验 取一枝蒿药材粉末 6 份,每份
约 1g,按“2. 4. 2”项配制,测定酮酸含量,结果酮酸
平均含量为 5. 234 mg·g-1,RSD为 0. 57%,结果表明
方法重复性良好。
2. 4. 9 加样回收率实验 精密称取药材粉末 9 份,每
份 0. 5 g,置于 25 mL 量瓶中,分 3 组,每组分别加入
1. 4,1. 7,2. 0 mL 酮酸对照品溶液(每毫升含酮酸
560 μg) ,照“2. 4. 2”项制备供试品溶液,测定含量并
计算回收率,酮酸的加样回收率 99. 8%,RSD 为
0. 25%,结果见表 2。
表 2 酮酸加样回收率测定结果
Tab. 2 Determination results of recovery of rupestonic
acid
编号
取样量 /
g
样品含量 加入量 实测量
μg
回收率 /
%
平均回收
率 /%
1 0. 518 7 1 001 784 1 782 99. 6
2 0. 533 9 1 030 784 1 816 100. 2 100. 0
3 0. 501 6 968 784 1 752 99. 9
4 0. 529 4 1 022 952 1 965 99. 1
5 0. 516 8 997 952 1 956 100. 6 99. 3
6 0. 514 1 992 952 1 942 99. 7
7 0. 519 6 1 003 1 120 2 110 98. 8
8 0. 509 4 983 1 120 2 098 99. 6 99. 4
9 0. 514 3 993 1 120 2 111 99. 8
2. 4. 10 含量测定 取 16 批药材,按“2. 4. 2”项制备
供试品溶液,按上述色谱条件测定,以外标法计算含
量,取其平均值,结果酮酸平均含量 3. 41 mg·g-1。见
表 3。
表 3 样品来源与含量测定结果
Tab. 3 Sources and content determination of samples
编号 产地
取样量 /
g
峰面积
酮酸含量 /
(mg·g-1)
1 昌吉 1. 000 2 15. 847 0 1. 97
2 新湖农场 1. 000 8 6. 360 6 0. 79
3 南山板房沟 1. 001 0 50. 029 6 6. 24
4 昌吉 1. 000 2 27. 861 9 3. 48
5 昌吉 1. 001 1 35. 387 6 4. 55
6 昌吉 1. 002 0 43. 137 6 5. 55
7 昌吉 1. 000 8 29. 482 5 3. 68
8 昌吉 1. 000 2 29. 818 8 3. 72
9 新湖 1. 001 3 27. 902 8 3. 48
10 新湖 1. 001 1 27. 277 4 3. 40
11 新湖 1. 001 1 32. 303 8 4. 03
12 新湖 1. 001 2 22. 078 6 2. 75
13 富蕴 1. 002 2 42. 342 7 5. 28
14 板房沟 1. 001 5 21. 139 7 2. 65
15 富蕴(野生) 1. 000 7 15. 601 4 1. 95
16 木垒(野生) 1. 003 4 8. 390 9 1. 11
根据 16 批不同采购地的新疆一枝蒿药材测定结
果,新疆一枝蒿药材中酮酸的含量为 0. 079% ~
0. 624%。通过实验发现,药材采收地不同,酮酸含量
差别也比较大,因此暂定药材含酮酸应不得少于
0. 06%。
3 讨论
药材中所含水分和总灰分的高低,直接影响药材
在储存过程中的质量,故笔者对新疆一枝蒿的水分作
了限度检查。为了控制药材的纯度,因而对其进行了
总灰分限度的检查。
酮酸是新疆一枝蒿中活性最强的一种倍半萜类成
分,因此,建立了新疆一枝蒿中酮酸的 HPLC 法含量测
定方法和薄层色谱鉴别方法。并对 16 种不同采购地
的新疆一枝蒿进行了检测,结果含量差异比较大。该
方法专属性强、操作简便,结果可靠,重复性好,可有
效控制新疆一枝蒿药材及其成药的质量。
[DOI] 10. 3870 /yydb. 2011. 09. 030
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