全 文 ：高效液相色谱法测定水红花子中芦丁与棚皮昔的含量
郑一敏 ,青秀英 ,傅善权 ,杨艳红 (重庆工学院生物工程学院 , 重庆 绷拟巧0)
摘要 : 目的 用高效液相色谱法测 定水红花子 中芦丁 与栅皮等 的含量 。 方法 芦丁的含量采用 阶 i m以h u CI :柱 ( 4 . 6 ~ x l父
~
,
5四 ) , 流动相为甲醇一0 . 05 % 姚代、 溶液 (4 2 : 58) , 流速 1 . o mL · m i n 一 ’ ,检侧波长 254 nm ,柱温 25 ℃ , 用外标 法定量 ; 采用 hS 卜
m a枷 1C 8柱 ( 4 . 6 ~ x 150 ~ , 5 卿 ) , 流动相为甲醇一 2 % H3R )4 溶液 ( 45 : 55) , 流速 l . o mL · 而n 一 l ,检测 波长 350 nr , 柱温室温 ,
用外标法定量 , 测定褂皮昔的含量 。 结果 芦丁的线性范围 0 . 05 3 一 0 . 53 滩 , r = o 进粥洲〕 9 ;拼皮普的线性范围 0 . 40 一 2 . 0 滩 , 厂 =
0
. 望珍 6 。 结论 该方法简便 , 快速 , 线性关 系良好 。
关键词 : 水红花子 ; 芦丁 ;栅皮普 ; 高效液相色谱法
中图分类号 : 2R 84 . 1 文献标识码 : A 文章编号 : 10 卜 加 9 4 (2 (X巧 )21 一 16宝〕一 03
D旧比n 刘恤a t i o n of ur t i n a n d q娜 rC i itr n in oP lyg o n um o n沁n 匆翻 by II P L C
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一而 n , X U X i u 一 y i n g , FU S han 一明an , YNA G Y an ~ 11 0 n g ( olC gle of B云尧刀娇ner , hoC 卿 i叮 nstI 。 : , of eT d己on lo g ,
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5 脚 ) . hT e om ibl e 两~ , 曲 MeO H一 05 % 比 R ) ( 42 二58 ) w iht a
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6 m
x 15 0
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,
5 四 ) . hT e n 10 I〕i le p h叹三was
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.
30 %
,
RS D w as 1
.
2 %
. 叨 l e hne ar arn ge of qt le 。而 n w as 0 . 40 一 2 . 0 滩 iw ht a 9 .双 1 e o r 此liat on (r ) of o 产抑〕 6 .
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n le 溉 o ve ry aws 97 . 80 % , RS D aws 1
.
4 3 %
.
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o 成n人zle L . : nj t in ; 明 e二 i山 n ; HP 砚
水红花子 ( oP 今即 n um 。 r屺耐 a le L . )为寥科植物红
寥的干燥成熟果实 , 别名为寥实子 , 为一年生草本 ,
主产于黑龙江 、吉林 、 辽宁 、 内蒙古等地 , 味咸 、 性微
寒 ,有化痞散结 、清热止痛功能 ,用于痞块腹胀 、 肝脾
肿大 、 颈淋结核 、 消渴等 [’ 〕。 金传山等 [“丁报道了水红
花子中的水溶性成分的含量 , 文献犯3〕报道红寥中含
有懈皮昔等有效成分 。 目前笔者未见有关水红花子
中芦丁与懈皮昔等黄酮类有效成分含量的报道 , 笔
者采用高效液相色谱法 , 测定了水红花子中芦丁与
懈皮昔的含量 ,方法稳定 、 快速 、重现性好 。
1 仪器与试药
岛津 CL 一 IOA 高效液相色谱仪 ( cL 一 or AVT P
泵 , S C L 一 or AV P 控制器 , SDP 一 or AV P 紫外检测器 ,
COT
一 10 AV P 柱温箱 ) 。
芦丁与懈皮昔对照品 (中国药品生物制品检定
所 ) 。 水红花子药材 (重庆市中药材市场 , 由重庆市
中药研究院李泉森副主任技 师 鉴定为水红 花 子
oP lyg
。
~
o
ier 瓜al o L . ) 。
2 方法和结果
2
.
1 色谱条件的选择
参考文献 [ 4〕选择芦 丁的色谱条件为 : hs i IT l a d z u
C : 8 ( 4
.
6 m
x 15 o m
,
5 脚 ) ;流动相 : 甲醇 一0 .仍%
H 3 (P 从( 4 2 : 58 ) :流速 : 1 . o fnL
· 而 n 一 ’ : 检测 波长 2 54
nI
;柱温 : 室温 ;理论塔板数按芦丁峰计算应不低于
2 ( x刃 ,与邻近峰的分离度大于 1 . 5 。 参考文献囚并
经适当调整 , 选择榭皮昔 的色谱条件为 : 色谱柱 :
弘111犯 ( luz e ; : ( 4 . 6 m x 15 o mrn
,
5 脚 ) ;流动相 : 甲醇 -
0
.
2% 玩 1刃绍 溶液 ( 45 : 5 5) ;流速 : 1 . 0 m .L 而 n 一 ’ ; 检
测波长 350 unT ;柱温 :室温 ,理论塔板数按搬皮昔峰
计算应不低于 1 50 ,与邻近峰 的分离度大于 1 . 5 。
.2 2 对照品溶液的制备
.2 2
.
1 芦丁对照品溶液的制备 精密称取芦丁对
作者简介 : 郑一敏 , 男 , 研究员 及 I/ F a X : ( 02 3 ) 68 6 23 35 E 一 n 一a i l : 乃叨 1@ 叫 i l . ed u . e n
6 6 0
·
hC 认 声刁刁口n ] . 2众万 加阴 竹尹淤r , Vo l . 勿 从〕 . 21 中国药学杂志 2侧 )5 年 1 月第 4O 卷第 21 期
照品适量 , 用 甲醇溶解制成芦 丁质量浓度 (夕芦 )为
0
.
53 9
·
L
一 ’ ,作为对照品储备液 ,再分别取该储备液
适量 ,用 甲醇稀释制成 户芦分别为 0 . 0 5 3 , 0 . 0 10 6 ,
0
.
02 1 2
,
0
.以 2 4 , 0 . 05 3 0 g’ L 一 ’ 的溶液 , 0 . 45 拜m 滤膜
过滤 ,备用 。
2
.
.2 2 棚皮昔对照品溶液 的制备 精密称取懈皮
昔对照品适量 , 用 甲醇溶解制成棚皮昔质 量浓度
伽棚 )为 0 . 20 9 · L 一 ’ 的溶液 , 作为对照品储备液 ,再
分别取 一该储备液适量 , 用甲醇稀释制成 p懈分别为
0
. 。取〕, 0 . 0 50 , 0 . 220 , 0 . 1印 , 0 . 2 0 9 · L 一 ’ 的溶液 , 0 . 朽
拌m 滤膜过滤 ,备用 。
.2 3 供试 品溶液的制备
称取经干燥粉碎的不同产地的水红花子 2 . 5 9 ,
加人 20 m L 甲醇液 , 超声提取 30 而 n , 过滤得提取
液 ,滤渣再各加 巧 m L 甲醇液 ,超声提取 20 m in ,过
滤得提取液 , 合并两次提取液 。 将提取液减压干燥
得水红花子提取物 , 各称取该提取物适量 , 用 60 %
甲醇溶解制成提取物质量浓 度 ( 夕提 ) 5 9 · L 一 ’ 的溶
液 , 0 . 45 脚 滤膜过滤 ,备用 。
.2 4 线性关系考察实验
分别精密量取 “ 2 . 2 . 1” 项下芦丁不同浓度的对
照品溶液 10 拼L 进样 ,以色谱峰面积 ( )Y 对质量浓度
( x )进行回归统计 ,芦丁的回归方程 为 Y = 2 . 5 24 x
1护X + 23 9 28 . 2 , : = 0 . 9 9 9 9 , 线性范围为 0 . 05 3 -
0
.
53 拌g 。 分别精密量取 “ 2 . 2 . 2 ” 项下榭皮昔各浓度
对照品溶液 10 拼L 进样 , 以色谱峰面积 ( )Y 对质量浓
度 ( X )进行 回归 , 懈皮 昔的线性回归方程为 y =
l
.
8 4 3 x l06 X + 8 2 103
, r 二 0
.
99 9 6
, 线性范 围为
0
.
40
一 2
.
0 胖g 。
2
.
5 最低检测限的测定
在 “ 2 . 1” 色谱条件下 ,按信噪比大于 3 时测定最
低检测限 ,芦丁最低检测限为 Z gn ,棚皮昔最低检测
限为 s n g 。
.2 6 精密度实验
取 “ 2 . 2 . 1” 和 “ 2 . 2 . 2 ”对照品溶液 (尸芦 二 0 . 0 5 3 9 ·
L
一 ’和 p懈 = 0 . 2 0 9 · L 一 ’ ) , 分别在 “ 2 . 1” 各色谱条件
下连续进样 10 拜L 6 次 ,测得芦丁与懈皮昔的峰面积
SR D 分别为 1 . 49 % 和 1 . 92 % ,表明仪器进样精密度
良好 。
2
.
7 稳定性实验
取 “ 2 . 2 . 1” 和 “ 2 . 3 ” 溶液 , 分别在 O , 2 , 4 , 8 , 16 h
进样 or 匹 , 测定芦丁与榭皮昔的峰面积 sR D 分别
为 2 . 3 0% 和 2 71 % ,表明溶液在 16 h 内稳定 。
2
.
8 重现性实验
币画药覃泰忑饭丽浑丽 万贾丽豁蔽 i丽
取同一批水红花子药材 ,按 “ 2 . 2 . 2 ” 方法配制 6
份 ,分别进样 or 拼L , 测定芦丁与懈皮昔 的 R s D 分别
为 2 . 84 % 和 2 . 79 % ,表明该方法的重现性较好 。
.2 9 加样 回收率实验
取同一批水红花子药材 10 份 ,分别加入芦丁与
榔皮昔对照品 ,按 “ 2 . 3” 方法各配制 5 份 , 在 “ 2 . 1” 各
色谱条件下进样 10 拼L , 计算得芦 丁平均 回收率为
%
.
30 %
,
sR D 为 1 . 2 % ; 懈 皮 昔 平 均 回 收 率
9 7
.
8 0%
,
RS D 为 1 . 4 3% 。
2
.
10 样 品含量测定
取 3 批样品按 “ 2 . 3” 供试品制备方法制成样品
溶液 ,在 “ 2 . 1”各色谱条件下进样 10 “ L (3 次平行 ) ,
测定峰面积 , 由线性方程计算得芦丁和懈皮昔的含
量见表 1 ,对照品及供试品色谱图见图 1 , 2 。
表 1 水红花子 中芦丁和懈皮普含量测定结果 . n = 3
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芦丁 /%
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0
.
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0
.田 1 1
懈皮背 / %
0
.
02 3
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,
O孙
0
.
03 9
图 1 芦丁对照 品与样品色谱 图
A 一 对照品 ; B 一 样品 ; 1 一芦丁
n g 一 HP LC c 卜or n l a t o gr a n l s of ur t in l℃fe er n e e a n 〔I 以” T l p le
A 一 t℃屁er 、 e ; B 一脚即 {e : l 一 。 *i n
止图 2 懈皮普对照品与样品色谱图
A 一 对照品 ; B 一 样品 ; , 一 榭皮营
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A一 祀 fe m化 ;e B一 ~ p扮 ; l一 印吧
及 , i山 n
3 讨 论
3
.
1 在本实验中 , 曾对流动相的比例进行了比较 ,
结果调整不同的比例对芦丁与榭皮昔的分离度影响
较大 , 由于样品中芦丁的含量较低 ,如降低流动相中
甲醇的比例 ,虽能增加分离度 ,但会导致芦丁对应的
峰形变差 ,色谱峰扩散 。
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,
2伏万 八肠℃阴八丫 , 认砚. 40 肠 . 2 ] · 16 6 1 ·
LC / M S n鉴定丁香酚布洛芬醋在大鼠尿 中的主要代谢产物
赵 秀丽 , 陈大为 ` ,孙璐 , 李可欣 , 王丹蕾 (沈阳药科大学药学院 , 辽宁 沈阳 , 10 10)
摘要 : 目的 研究鉴定丁香酚布洛芬醋在大鼠体 内的代谢行为 。 方法 选择健康 iW s atr 大鼠 3 只单剂量 20 gm · 吨一 ’尾静脉给
药丁香酚布洛芬醋后 , 收集 0 一 12 h 尿样 。 将尿样经 SpE 1C 8固相萃取柱纯化后 , 采用 LC /溅 n 方法对尿中的待测的代谢产物进
行选择离子监测 ( S[ M )和 多级全扫描质谱分析 ( M nS ) 。 结果 在尿中首 次检测到丁香酚布洛芬醋的 7 种代谢产物 , 其中包括 1
种 l 相代谢产物和 6 种 n相代谢产物 。 结论 丁香酚布洛芬醋在大鼠体内主要先水解成丁香酚和布洛芬 , 经进一步代谢与 葡
萄糖醛酸结合
关键词 : 丁香酚布洛芬醋 ; 丁香酚 ;布洛芬 ;代谢 ; U {: / MnS 法
中图分类号 : gR l7 文献标识码 : A 文章编号 : 10 1一 2 4 94 ( 2以 )5 )21 一 16 2 一 04
】d e nt 苗ca it on of n l找io r me at bo li如 of E训罗 n 0 I es et r in 段 st by nq 川 d c hr . 田以城卿州叮 i/ on t口 P n ”班诱 s p 晖tomr e t叮
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Io lh w即 t) f E: ,邵 n( , l一 e s ro r in ar zs 15 ht a l ,h e e u罗 n ` )l i b u orP fe n e s et r 15 h yd or 】ide to of n n e u罗onl an d ib u p n )fe n , fol o we d 场 e o nj u邵 it o n 硒ht
g lu e : 一or n ie a ( i(I
, 此、 `姗t iv e l y .
K E Y WO R工居 : e u罗 on l ib , J Por fe n e s 一e r ; e u罗 n o l : ihu p or l卜n ; me l a l洲〕 li t e s ; [无 / M S n
药物代谢研究对于指导药物设计及临床安全合
理用药等方面均具有重要意 义 ,是新药研制过程中
一个必不可少的环节 。 近年来随着 优 / M nS 接 口技
术的 突破 , 特别是 电喷雾电离 ( E SI ) 与 多级质谱
( M S n) 技术的成功结合 , 使得那些低挥发性或热不
稳定的代谢物的直接分析成为现实卜 2」。
丁香酚布洛芬酷由沈阳药科大学研制 , 其化学
名为丙酸 , 2一 〔4 一 ( 2一甲基丙 基 )苯」, 2一甲氧基 一 4 一 ( 2 -
烯丙基 )苯酷 , 结构见图 l , 是由中药挥发油丁香酚
和布洛芬结合生成的一种新化合物 ,是一种处于临
床前研究阶段的新型抗炎镇痛剂 ,其稳定性好 , 经
初步药理实验已证明具有较好的抗炎镇痛活性 。
为研究该药在生物体内的代谢过程 , 了解机体对药
物的转化规律 , 本实验首次采用 CL / MnS 联用技术
对该化合物在大 鼠体内的代谢产物进行了直接定
性分析 。
1 实验部分
1
.
1 仪器与材料
美国 Agh en t公司 H o 系列 L c / M s n 仪 , 包括四
元梯度泵 , 自动进样器 , 柱温箱 , DA D 检测器和 M SD
3
.
2 检测波长按参考文献卜 5 }选定 2 54 和 350 nl
分别为芦丁与懈皮营的检测波长 。
3
.
3 本实验曾研究了不同型号 的 1C 8色谱柱对色
谱行为的影响 ,结果比较一致 ,表明该方法的重复性
较好 。
参考文献
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2《X) 2 : 17 5 .
金传山 ,魏和平 ,庞国兴 ,等 . 水红花子初步质量研究【IJ . 基
层中药杂志 , 19 7 , 1 1( 4) : 38 .
国家中医药管理局中华本草编委会 . 中华本草〔M」. 第二卷 .
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丁的含量〔J〕. 食品科学 , 2侧神 , 25 ( 4) : 147 .
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〔J」. 中国中药杂志 ,刀刀 , 18 (8 ) :花 1 . (收稿日期 : 2仪阵 l一 18 )
刘别引司
作者简介 : 赵 秀丽 , 女 , 博士研究件 ’ 通讯作者 : 陈大为 , 男 ,教授 , 博士生导师
6 6 2
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中国药学杂志 2仪)5 年 1 月第 40 卷第 21 期