全 文 ：收稿日期:2006-04-08作者简介:刘立萍(1966-), 女 , 苗族 , 湖南沅陵县人 , 化工分析高级工程师 ,学士 ,主要从事林产化工产品和
植物天然活性成分研究工作。E-mail:llp3585366@163.com
阔叶十大功劳叶与花总黄酮提取及含量测定
刘立萍a,唐克华a, b, 张　敏a, 陈功锡a, b, 李　菁a, b
(吉首大学 a.林产化工工程湖南省重点实验室;b.城乡资源与规划学院 , 湖南 张家界 427000)
摘　要　目的:研究阔叶十大功劳叶与花总黄酮的提取方法和含量测定。方法:比较以索氏提取法 、超声波提取法
和微波辅助提取法 3种方法提取阔叶十大功劳叶与花中总黄酮 ,用亚硝酸钠 -硝酸铝 -氢氧化钠比色法测定总黄
酮含量。结果:3种提取方法中 ,微波法提取效率最高 , 结果重现性好 , 并测得叶与花中总黄酮含量分别为 2.182%
和 8.155%。结论:阔叶十大功劳总黄酮含量较高 , 总黄酮在花中的含量明显高于叶。
关键词　阔叶十大功劳;总黄酮 ;硝酸钠 -硝酸铝 -氢氧化钠比色法
中图分类号:R284.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-9690(2007)01-0033-03
ExtractingandContentMeasuringofTotalFlavones
fromMahoniabealei(Fort.)Carr.
LiuLipinga, TangKehuaa, b, ZhangMina, ChenGongxia, b, LiJinga, b
(a.KeyLaboratoryofHunanForestProducts＆ChemicalIndustryEngineering;b.ColegeofResources
andPlanningScience, JishouUniversity, Zhangjiajie427000, China)
Abstract　Objective:Theaimistoinvestigatethemethodsofextractionanddeterminationofthetotal
flavonesfromtheleavesandflowersofMahoniabealei(Fort.)Car.Method:Threeextractionmethods,
Soxhletextraction, ultrasonictreatmentandmicrowavepre-treatment, werecomparedwith;thecontentof
thetotalflavoneswasdeterminatedbymeansoftheNaNO2 -Al(NO3)3 -NaOHcolorationsystem.Re-
sults:Bycomparison, withthemethodofmicrowavepre-treatment, theextractingratewashighandthe
repetitionwasgood.Bythemethodofmicrowavepre-treatment, thecontentoftotalflavonesintheex-
tractsfromtheleavesandflowerswas2.180% and8.155%.Conclusion:Theamountoftotalflavonesis
richinMahoniabealei(Fort.)Car.Thecontentintheflowersishigherthanthatintheleaves.
Keywords　Mahoniabealei(Fort.)Car.;totalflavones;NaNO2 -Al(NO3)3 -NaOHcolorationsystem
　　阔叶十大功劳 [ Mahoniabealei(Fort.)Carr.]
属小檗科十大功劳属常绿灌木 。十大功劳始载于清
朝吴其浚《植物名实图考 》, 1995年版 《中国药典 》
收载的功劳木系上述植物的干燥茎。现代医药研究
结果证明该属植物有抗菌 、消炎 、抗病毒 、降压 、抗心
率失常 、降血糖 、抗血小板聚集等作用 [ 1, 2] ,其主要
活性成份小檗碱 ,又称黄连素 ,在临床上被用于治疗
细菌性痢疾 、伤寒 、肺结核 、肺气肿 、急性扁桃体炎 、
口腔炎等症 。
黄酮类化合物(flavones)又称黄碱素 ,广泛存在
于植物的叶和果实中 ,大部分与糖配基结合成甙类 ,
少部分呈游离形式存在 ,是植物光合作用衍生而成
的一大类化合物。黄酮类物质具有广泛的生理活
性 ,在医药方面 ,可作为防治高血压及动脉血管硬化
的辅助治疗剂 ,并可降低血管脆性及异常的通透性。
由于黄酮类物质具有保肝利胆的作用 ,故常用于治
疗急 、慢性肝炎 ,肝硬化及中毒性肝损伤等。有研究
表明 ,黄酮类还具有抗菌消炎 、解痉 、雌性激素样 、抗
病毒等[ 4]作用 ,因此黄酮已成为目前倍受关注的主
要天然活性产物。
阔叶十大功劳含有黄酮类天然活性物质[ 3] ,是
一类大有开发利用前途的药用植物资源 。关于阔叶
十大功劳成分分析的研究 ,目前仅有关于生物碱
(如小檗碱)的有关分析报道 [ 2] ,而关于其中总黄酮
的提取和含量测定的研究一直未见报导 。本文探讨
了阔叶十大功劳中总黄酮的提取和含量测定 ,为开
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第 26卷第 1期
2007年 2月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources　　　　　　　　　　 　Vol.26 No.1Feb.2007
发黄酮类药物和保健品植物资源提供理论依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
鲜阔叶十大功劳叶和花采自张家界天门山 ,在
60 ℃下烘干 、粉碎过 40目筛后作为样品备用 。芦
丁标准品批号为 080 -9705,购于中国药品生物制
品检定所。所用其它试剂均为分析纯 。
1.2　仪器
UV-160A紫外可见分光光度计(日本 , YAMA-
TO);RE540旋转蒸发仪 (日本 , YAMATO);WT-
150小型粉碎机;WD-750S微波炉(Galanz);B8200
超声洗洁器(日本 , YAMATO)
1.3　实验方法
1.3.1　总黄酮的测定
利用硝酸铝 -亚硝酸钠比色法测定试液中的总
黄酮的含量 。
标准曲线制作 [ 5] :准确称取芦丁标准品 20 mg
于 100mL容量瓶中 ,加 60%乙醇溶解并定容至刻
度 ,再准确移取该溶液 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0
mL于 6个 10 mL容量瓶中 ,加入质量分数为 5%的
亚硝酸钠和质量浓度为 10%的硝酸铝各 0.3 mL摇
匀 ,放置 6min;加入质量分数为 4%的氢氧化钠 4.0
mL,然后用体积分数为 60%的乙醇定容 ,静置 12
min,以试剂空白为参比 ,用 1 cm比色杯 ,于 510 nm
处测定吸光度 ,以吸光值 A对浓度 C(mg/mL)制工作
标准曲线 , 并求得回归方程为:C =0.083 19A-
0.002 39, r=0.996 1。
用标准曲线方法测定样品提取试液的吸光度 ,
并按回归方程计算总黄酮的含量。
1.3.2　总黄酮的提取
关于植物体活性成份的提取方法报导很
多 [ 6, 7] ,本文分别采用超声提取法 、微波提取法和索
氏回流提取法提取阔叶十大功劳中的总黄酮。用标
准曲线方法分别测定吸光度。
超声提取法:准确称取 5份样品叶的干燥粉末
5.001 g至锥形瓶中 ,分别加入体积分数为 60%的
乙醇 50 mL,分别超声(50 ～ 60Hz)处理 10、20、30、
40、50 min,过滤 ,洗涤残渣 ,滤液并入容量瓶 ,以体
积分数为 60%的乙醇定容到 100mL。经测定发现 ,
处理 30 min的试液吸光度最高 , A=0.564。
微波提取法:准确称取 5份样品叶的干燥粉末
5.001 g至锥形瓶中 ,分别加入体积分数为 60%的乙
醇 50mL,放入微波炉中 ,中档火力条件分别处理 20、
40、80、100、120 s,冷却 ,过滤 ,洗涤残渣 ,滤液并入容
量瓶 ,以体积分数为 60%的乙醇定容到 100 mL。经
测定发现 ,处理 100 s的试液吸光度最高 , A=0.673。
索氏回流提取法:准确称取 4份样品叶的干燥
粉末 5.001 g,分别置索氏提取器中 ,用石油醚脱脂 ,
挥干 ,再用体积分数为 95%乙醇 100 mL分别抽提
0.5、1.0、1.5、2.0h,提取液浓缩 、干燥 ,然后用体积
分数为 60%乙醇溶解 ,并定容至 100 mL。经测定发
现 ,处理 1.5h的试液吸光度最高 , A=0.547。
经比较发现 ,微波法提取液的最高吸光度是超
声法的 1.19倍 ,是索氏回流法的 1.23倍 。因此 ,选
择微波法提取样品的总黄酮 。
1.3.3　样品测定
用微波法制备样品花和叶的提取液 ,准确吸取
试样液 0.5 mL,于 10 mL容量瓶中 ,加入质量分数
为 5%的亚硝酸钠和质量分数为 10%的硝酸铝各
0.3 mL,摇匀 ,放置 6 min;加入质量分数为 4%的氢
氧化钠 4.0 mL,然后用体积分数为 60%的乙醇定
容 ,静置 12 min,以试剂空白为参比 ,用 1 cm比色
杯 ,于 510 nm处测定吸光度 ,按标准曲线方程计算
总黄酮的含量 。每个样品均做 3个平行实验 。
1.3.4　方法准确性检验
稳定性实验:精密吸取芦丁标准品溶液 2.0
mL,试样液 0.5mL。用 1.3.1节标准曲线法分别在
15、30、45、60min测定吸光度 。
精密度实验:按微波提取法同时制备 5份试样
液 ,按 1.3.1节标准曲线方法对试样液中总黄酮含
量进行平行测定。
重复性实验:按 1.3.3节方法 ,在同一实验室 、不
同时间对样品叶中总黄酮含量进行 5次重复测定 。
回收率实验:准确称取 5份已知总黄酮含量为
2.176%的样品叶干燥粉末 3.252 g,加入定量的芦
丁标准品 ,按微波提取法制备试样液 ,按 1.3.1节标
准曲线方法测定总黄酮含量 。
2　结果与分析
2.1　方法的准确性考证
通过稳定性实验 、精密度实验 、重复性实验和回
收率实验 ,分别测得的吸光度和总黄酮含量结果见
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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 26卷
表 1、表 2、表 3、表 4。
表 1　稳定度试验结果
时间 /min 标准品试液的吸光度 试样液的吸光度
15 0.528 0.671
30 0.533 0.665
45 0.528 0.660
60 0.526 0.661
RSD% 0.521% 0.931%
表 2　精密度试验结果
试样编码 标准品试液吸光度 试样液吸光度
1 0.540 0.681
2 0.528 0.679
3 0.528 0.673
5 0.527 0.670
6 0.529 0.668
RSD% 1.02% 1.14%
表 3　重复性试验结果
试样
编号 样重 /g 单样含量 /%
总黄酮含量 /%
平均含量 RSD
1 1.501 2.168
2 1.503 2.170
3 1.510 2.175 2.176 0.304
4 1.520 2.182
5 1.539 2.185
表 4　回收率实验结果
样品
编号
总黄酮
含量 /mg
加入芦丁
标品 /mg
回收量
/mg
回收
率 /%
平均回
收率 /% RSD/%
1 70.7 0.1 68.27 96.43
2 70.7 0.2 68.57 96.71
3 70.7 0.3 69.27 97.56 97.11 0.76
4 70.7 0.4 68.73 96.67
5 70.7 0.5 69.90 98.17
　　从表 1的结果可知 ,无论是标准试液 ,还是样品
试液 ,显色后在 60 min内的吸光度相对标准偏差均
小于 1%,说明微波法的稳定性好 。表 2结果表明 ,
5平行测定结果的相对标准偏差为 1.14%,说明 1.
3.3精密度好。表 2结果表明 , 5次重复实验结果的
相对标准偏差为 0.304%, 说明微波法重复性好 。
而表 4则表示 , 5个回收率实验结果的平均值为 97.
11%,说明微波法回收率高 。所以 ,微波法和 1.3.2
标准曲线法是提取和测定阔叶十大功劳总黄酮的最
佳方法 。
2.2　花和叶的总黄酮含量
测得的阔叶十大功劳总黄酮含量结果见表 5。
表 5　样品总黄酮含量结果
材料 材料重量 /g
吸光
值 /A
黄酮含
量 /%
平均值
/%
叶 4.328 0.596 2.181
叶 4.340 0.598 2.182 2.182
叶 4.334 0.597 2.182
花 2.409 1.211 8.165
花 2.401 1.206 8.158 8.155
花 2.375 1.191 8.142
　　从表 5的结果可知 , 叶总黄酮的含量为
2.182%,花中总黄酮的含量为 8.155%,说明阔叶
十大功劳花的总黄酮含量明显高于叶。
3　结　论
(1)采用微波法提取阔叶十大功劳叶和花的总
黄酮 ,具有速度快 、收率高 、设备简单等特点 ,提取效
果明显优于传统的索氏回流提取法和超声波提取法。
(2)阔叶十大功劳叶 、花中的总黄酮含量较高 ,
并且总黄酮在花中的含量明显高于叶。阔叶十大功
劳花的总黄酮含量(8.155%)是杜仲叶(1.59%)[ 9]
的 5.1倍 、三七叶(1.42%)[ 10] 的 5.7倍 、仙人掌
(1.90%)[ 11]的 4.3倍 、白芥子(1.85%)[ 12]的 4.4
倍。因此 ,该类植物的叶和花均具有一定的药用价
值 ,是大有开发利用前途的药用植物资源。
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第 1期　　　　　　　　　　　　　 　刘立萍 ,等:阔叶十大功劳叶与花总黄酮提取及含量测定