全 文 ：水线草中三萜酸成分的提取与分离
胡　松
(武汉市第一医院药剂科 , 430022)
[摘　要 ] 　目的　对水线草的三萜酸成分进行提取分离 , 并精制得到较纯的单体。方法　采用醇提碱洗法 , 对影
响提取的 4个因素 [醇浓度 、醇的用量 、提取次数 、氢氧化钠(NaOH)溶液浓度 ]进行正交实验设计 , 优化提取工艺;用高
效液相色谱系统测定所提取的白桦脂酸的含量;纯化采用重结晶法。结果　最佳提取条件是 6倍量 97%乙醇超声提取
3次 , 1%NaOH溶液洗涤浸膏至洗液接近无色。结论　该提取方法适合于工业化 ,重结晶可精制得到高纯度的三萜酸。
[关键词 ] 　水线草;三萜酸;提取法;分离和提纯
[中图分类号 ] 　 R282.71;R284.2　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2007)03-0281-02
StudiesontheAbstractionofTriterpenoidAcidsinHedyotisCorymbosa
HUSong(DepartmentofPharmacy, theFirstHospitalofWuhanCity, Wuhan430022, China)
ABSTRACT　Objective　ToextractthetriterpenoidacidinHedyotisCorymbosaandrefinethepuremonomerwithapurity
ofmorethan95%.　Methods　EthanolwasusedtoextractandNaOHforwashing.Thefourfactorsforextractionwere
investigatedbytheorthogonaldesigntooptimizethetechnology.HPLCwasusedtodeterminethecontentoftriterpenoidacid.　
Results　Theoptimumextractingconditionsweresixtimesquantityof97% ethanol, threetimesofextraction, 1% NaOHto
wash.　Conclusion　Thismethodissuitableforindustrialization.Highpurityoftriterpenoidacidwasproducingafterrefining.
KEYWORDS　HedyotisCorymbosa;Triterpenoidacids;Extraction;Isolationandpurfication
　　水线草 [ Hedyotiscorymbosa(L.)Lamk] ,又名伞
房花耳草 ,为茜草科植物水线草的全草 ,其性平 ,味甘 ,
有清热解毒 ,活血祛癖 ,截疟功能 ,用于阑尾炎 、疮疥肿
毒 、烫伤 、毒蛇咬伤 、疮积 、扁桃体炎 、咽喉炎 、泌尿系感
染 ,疟疾 、跌打癖痛 、刀伤 ,民间亦用于治疗癌症 。据报
道 ,水线草含有三萜酸成分[ 1] ,具有抗癌作用 [ 2] 。此
外 ,水线草还含有甾醇 、内酯 、酚性成分以及黄酮类 、脂
肪酸等成分 。本实验对水线草的三萜酸成分进行提取
分离 ,并精制得较纯的单体 ,为充分利用水线草的抗癌
作用奠定了基础 。
1　实验材料　
1.1　药材与试剂　水线草购自武汉市医药公司 ,产地
江西 ,经华中科技大学同济医学院药学院生药教研室
鉴定为茜草科植物水线草的全草;95%乙醇(分析纯 ,
武汉宏大化学试剂厂 ,符合 CB679-94标准);甲醇(色
谱纯 ,天津市科密欧化学试剂开发中心 );石油醚
(60 ～ 90 ℃,天津市科密欧化学试剂开发中心);白桦
脂酸对照品(德国 , ALDRICH公司)。
1.2　仪器　高效液相色谱仪(液相色谱仪 HPagilent
1100,紫外可见检测器 ,色谱 3000工作站);Shimadzu
UV-VISIBLERECORDINGSpectrophotometerUV-260;
超声波振荡仪(ahanghaibranson);旋转蒸发 RE-52(上
[收稿日期 ] 　2006-05-17　　　[修回日期 ] 　2006-10-23
[作者简介 ] 　胡　松(1976 -), 男 , 湖北武汉人 , 主管药
师 , 学士 , 从事医院药学工作。电话:027 -61871268, E-mail:
huyaoshi@sina.com。
海亚荣生化仪器厂);台式离心机:TG16-Ⅱ (长沙平凡
仪器仪表有限公司);ES-C600天平(湘仪天平厂)。
1.3　高效液相色谱条件 　色谱柱:ReliasilC18柱
(250mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇-水-三乙胺
(90：10：0.03),冰醋酸调节 pH值至 7.0;检测波长:
210nm[ 3] ;流速:0.8 mL· min-1;理论塔板数按白桦脂
酸色谱峰计算不得低于 3 000。
2　方法与结果　
2.1　正交实验设计　根据预实验 ,水线草先用水煮 ,
趁热过滤 ,去除水溶性和部分油脂类杂质 ,残渣以醇提
取 、碱液洗涤至无色 ,可在将其中主要成分提出的同时
除去其他大量杂质。考虑到醇提取工艺与醇浓度 、醇
的用量 、提取次数等因素有关 ,因此 ,为了进行提取工
艺的优化选择 ,针对水线草中主要化学成分的性质 ,采
用 4因素三水平 L9(34)进行正交设计 ,其因素水平见
表 1。
表 1　正交实验因素水平表　
编号 乙醇浓度(A)/%
乙醇用量
(B)/倍
提取次数
(C)
NaOH浓度
(D)/%
1 95 4 1 0.5
2 80 6 2 1.0
3 65 8 3 2.0
2.2　样品液的制备　精密称取水线草 50.0 g按 1 ～ 9
进行编号 ,按表 1因素水平及表 2搭配方法的不同条
件进行提取后 ,回收乙醇。浸膏依次用石油醚 、不同浓
度 NaOH溶液及水洗至洗液无色 ,挥干。残渣用甲醇
浓解 ,定容至 25mL。
·281·医药导报 2007年 3月第 26卷第 3期
2.3　样品的测定及结果 　分别取样品液离心
(12 000r·min-1)10 min,取上清液 ,用孔径 0.45 μm
微孔滤膜过滤 ,滤液进样量 20 μL。用上述高效液相
色谱系统测定白桦脂酸含量。实验结果见表 2。
表 2　L9(34)正交实验设计结果及数据统计表　
编号 因素A B C D
含量 /
%
1 1 1 1 1 0.132 9
2 1 2 2 2 0.647 1
3 1 3 3 3 0.705 1
4 2 1 2 3 0.797 0
5 2 2 3 1 0.455 5
6 2 3 1 2 0.227 6
7 3 1 3 2 0.005 6
8 3 2 1 3 0.006 7
9 3 3 2 1 0.025 0
Ⅰ j 1.485 1% 0.115 9% 0.367 2% 0.613 4%
Ⅱj 0.780 1% 1.109 3% 0.769 1% 0.880 3%
Ⅲj 0.037 3% 0.957 7% 1.166 2% 0.808 8%
Ⅰ j平 0.495 0% 0.038 6% 0.122 4% 0.204 4%
Ⅱj平 0.260 0% 0.369 8% 0.256 3% 0.293 4%
Ⅲj平 0.012 4% 0.319 2% 0.388 7% 0.269 6%
Rj 0.482 6% 0.331 2% 0.266 3% 0.089 0%
　　正交实验结果及统计数字表明 , 4个因素对指标
影响大小的顺序为 A>B>C>D,其中 A是影响指标
的主要因素。最佳提取条件是:A1 B2C3D2 ,即 6倍量
97%乙醇超声提取 3次 , 1%NaOH洗涤浸膏至洗液近
无色。实验结果见表 3。方差分析结果表明乙醇浓度
对结果的影响最为显著。
表 3　方差分析表　
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值
A 34.943 2 27.449 19.000
B 14.534 2 11.417 19.000
C 10.640 2 8.358 19.000
D 1.273 2 1.000 19.000
误差 1.27 2
2.4　结晶单体的制备　
2.4.1　提取　取水线草 ,置 1 000 mL烧杯中 ,先煮沸
30 min,趁热过滤 ,残渣用 6倍量 95%乙醇超声提取 3
次 ,每次 30 ～ 40min。合并提取液 ,过滤去除残渣 ,减
压回收乙醇 ,得浸膏。
2.4.2　纯化　将浸膏依次加入石油醚 , 1%NaOH溶
液及水洗至洗出液无色 ,烘干。无水乙醇加热溶解 ,活
性炭回流脱色 15min,滤过 。热乙醇反复洗涤残渣 ,合
并滤液及洗液 ,放泠 ,静置 ,重结晶得白色针状结晶 Ⅰ 。
3　白桦脂酸的结构确证　
3.1　理化鉴定　纯化后的白色针状结晶样品及白桦
脂酸对照品均为白色针状粉末 ,在水中及石油醚中不
溶 ,溶于甲醇 、乙醇 、丁醇等。测定熔点:316 ～ 318 ℃,
样品与对照品熔点一致 ,且混合熔点不下降。
3.2　光谱鉴定　质谱测定本样品的 M+峰的质荷比
为 456.4,即本品的相对分子量为 456.4。与理论值
456.7仅相差 0.3,可能是由于仪器的误差或试样纯度
不够造成 ,但在误差范围内 ,且样品与白桦脂酸对照品
所得质谱图完全一致 。在红外光谱(IR)图中 ,对照品
与样品的峰形 、峰数 、峰强都一致。
紫外光谱图中 ,对照品与样品均在 206.8nm处有
最大吸收 ,峰形一致 ,但样品在 268.4 nm处尚有小吸
收峰 ,估计为样品中的少许杂质的吸收。
4　讨论　
水线草经水煮 ,趁热过滤 ,去除水溶性和部分油脂
类杂质 ,残渣以醇提 、碱液洗涤可将主要成分分离得到
的同时除去其他大量杂质 。通过对影响得率的醇浓
度 、醇用量 、提取次数 、NaOH溶液浓度 4个因素进行
正交优化设计 ,得到最佳的提取工艺条件:6倍量 97%
乙醇超声提取 3次 , 1%NaOH洗涤浸膏至洗液接近无
色 。纯化后得到的结晶 ,经过鉴定为高纯度的白桦脂
酸 ,成为申报一类新药的基础。此提取方法操作简便 ,
适合工业化 ,为大规模开发水线草的抗癌成分提供了
可靠的方法 。
[参考文献 ]
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·282· HeraldofMedicineVol.26 No.3March2007