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鹿茸顶端组织IGF1R基因的部分cDNA克隆及差异表达



全 文 :书第 39 卷 第 9 期 东 北 林 业 大 学 学 报 Vol. 39 No. 9
2011 年 9 月 JOURNAL OF NORTHEAST FORESTRY UNIVERSITY Sep. 2011
1)国家自然科学基金(30972083)、吉林省科技发展计划项目
(20090574)资助。
第一作者简介:胡薇,女,1966 年 1 月生,吉林农业大学生命科学
学院,副教授。
收稿日期:2011 年 2 月 22 日。
责任编辑:张建华。
鹿茸顶端组织 IGF1R基因的部分 cDNA克隆及差异表达1)
胡 薇 孟星宇 田玉华 刘 宁
(吉林农业大学,长春,130118)
摘 要 为了研究梅花鹿鹿茸顶端组织 IGF1R基因的表达水平,采用 TRIzoL试剂分别提取鹿茸真皮层、间充
质层、前软骨层和软骨层总 RNA,以逆转录酶 AMV反转录合成 cDNA,根据 GenBank 已发表的相关序列设计梅花
鹿 IGF1R基因特异引物并克隆 IGF1R基因,最后利用相对荧光定量 Real - time PCR 法检测 IGF1R 基因在鹿茸顶
端不同部位组织的表达差异。研究结果表明:试验成功克隆到 1 203 bp的 IGF1R基因序列,该序列包含 IGF1R基
因的部分编码序列,并编码 401 个氨基酸长度的多肽;与 GenBank中的牛、猪、人和小鼠 IGF1R基因进行比对分析,
梅花鹿 IGF1R基因与牛、猪、人和小鼠 IGF1R核苷酸同源性分别为 98%、94%、93%和 88%;IGF1R 蛋白氨基酸序
列同源性分别为 98. 3%、98. 5%、97. 8%和 94. 5%。对荧光定量 PCR 的差异分析发现,IGF1R 基因在鹿茸顶端间
充质层、真皮层、前软骨层和软骨层存在明显的上调表达现象。
关键词 鹿茸;胰岛素样生长因子 1 受体;cDNA克隆;差异表达分析;鹿茸再生
分类号 Q786:S825
Cloning of Insulin-like Growth Factor I Receptor Gene and Differential Expression in Antler Tip Tissue /Hu Wei,
Meng Xingyu,Tian Yuhua,Liu Ning(College of Life Sciences,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,P. R.
China)/ / Journal of Northeast Forestry University. - 2011,39(9). - 108 ~ 111,131
The study was to detect the expression level of Insulin-like Growth Factor I Receptor Gene (IGF1R)in antler tip to
provide theoretical basis for regeneration of antler molecular mechanism. Total RNA was isolated from dermis,mesen-
chyme,precartilage,cartilage in growing antler tips respectively,and the cDNA was synthesized using AMV reverse tran-
scriptase. A pair of primers was designed according to the homology region of IGF1R among other species. The cDNA se-
quence of IGF1R gene was cloned by RT-PCR technology. Then,real-time PCR was performed to detect the expression
level of IGF1R in the antler tip. Results showed that the complete coding sequence of IGF1R gene was cloned. Bioinforma-
tic analysis based on IGF1R genes of cattle,pig,human and mouse showed CDS partial region of the sika deer IGF1R gene
was 1 203 bp,which encoded a 401 amino-acid-long peptide. Compared with other four species,the homologies of IGF1R
to cattle,sheep,human and mouse were 98%,94%,93% and 88% respectively,but the homologies of protein were 98.
3%,98. 5%,97. 8% and 94. 5% respectively. Fluorescence quantification showed that IGF1R cDNA was distinctly up-
regulated in dermis layer,mesenchymal layer,precartilage layer and cartilage layer from growing antler tip.
Keywords Antler;Insulin-like growth factor 1 receptor;cDNA cloning;Differential expression;Antler regeneration
鹿茸角作为一种哺乳动物器官,它具有两个独特的生长
特性,即可再生和快速生长。而鹿茸生长发育机制的研究使
它成为一个极其重要的哺乳动物骨质器官再生的自然模
型[1 - 2]。鹿茸角生长速度之快是其它哺乳动物组织和器官无
法相比的,其生长最旺盛阶段每天可长 1 ~ 2 cm[3]。因此,人
们推测其中可能存在特殊的促进骨和上皮组织快速生长的活
性物质,促进骨质和表皮层的增殖。胰岛素样生长因子受体
(insulin - like growth factor receptor,IGFR)在动物体的生长发
育过程中起着举足轻重的作用。胰岛素样生长因子受体有两
种,分别称为 IGF1 受体和 IGF2 受体。IGF2 受体没有 IGF 的
信号传导功能,可能仅仅是一种清除型受体,其功能在于获取
和降解 IGF2。IGF对细胞的作用绝大多数都是通过与 IGF1
受体结合而实现的。而 IGF1 是一种重要的强有丝分裂原,主
要通过 IGFR1 受体发挥生物学效应,而且两者必须结合才能
发挥生物学作用。大量的研究已证明[4],鹿茸的生长中心位
于顶端,该处组织是生长因子和其它很多生理活性成分含量
高的部位。冯海华等[5]报道 IGF1 是一种促细胞分化的生长
因子,存在于鹿茸角顶部增殖区,能促进间充质干细胞及软骨
细胞的增殖。而 Suttie[6]早前曾发现,在鹿茸顶部非骨化部位
存在大量受体 IGF1R,可促进鹿茸细胞的增殖。近些年的许
多研究结果也证明了一些生长因子存在于鹿茸顶部,IGF1 和
IGF1R可能是影响鹿茸生长速度的主要因素之一。目前,对
鹿源 IGF1R的研究相对较少,而许多其它动物的 IGF1R基因
及氨基酸序列在 NCBI 数据库中都相继被登出。但是,未见
有关梅花鹿 IGF1R 基因方面的相关报道。鉴于 IGF1R 在动
物生长轴上的重要作用,本研究将通过 IGF1R 基因的部分
cDNA克隆及在鹿茸顶端不同部位组织的差异表达分析,揭
示鹿茸快速生长阶段 IGF1R对其生长的调节作用和规律,为
探索鹿茸再生的机理提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1. 1 材料
新鲜东北梅花鹿鹿茸于 2010 年 6 月上旬采自吉林农业
大学试验鹿场 1 头 3 岁龄左右的健康雄鹿,保存于液氮中立
即带回实验室备用。TRIzoL试剂购自 Invitrogen公司,pMD -
18T vector、Ex Taq DNA 聚合酶、AMV 反转录酶、限制性内切
酶 XbaⅠ和 PstⅠ、dNTP、DL - 2000 Marker购自 TaKaRa公司,
Real Master Mix购自长春宝泰克公司。
1. 2 样品制备
鹿茸组织区别于其他组织和器官的重要一点是生长中心
位于顶端,因此,鹿茸的顶端是生长最旺盛的部位。根据组织
结构和生长特点,可将鹿茸顶端组织大致分为真皮层、间充质
层、前软骨层和软骨层。使用一次性手术刀在离鹿茸顶端生
DOI:10.13759/j.cnki.dlxb.2011.09.002
长点 5 cm处垂直鹿茸生长轴方向切断,切取真皮层、间充质
层、前软骨层和软骨层组织各 100 mg,于液氮保存。
1. 3 鹿茸顶端组织总 RNA提取及 RT - PCR反应
按照 Trizol操作手册分别提取真皮、间充质、前软骨和软
骨组织各样品总 RNA,1. 0%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光法
检测总 RNA质量和含量。以总 RNA为模板,以 Oligo - dT为
引物(工作浓度为 10 μmol /L) ,以逆转录酶 AMV反转录合成
cDNA。
1. 4 IGF1R基因克隆及序列分析
参照 GenBank中相关序列,设计 IGF1R 基因特异性引物
(IGF1R上游引物:AAGGAATGAAGTCTG GCTCCG 和下游引
物:AGGAAGGACAAGGAGACCAAGG) ,以软骨组织 cDNA 为
模板进行 PCR扩增,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收目的
片段,并克隆入 pMD18 - T 载体中,转化大肠杆菌 JM109,涂
板,37 ℃过夜培养。挑取阳性克隆制备质粒,并将鉴定正确
的重组质粒送 TaKaRa公司测序。将梅花鹿 IGF1R 基因与牛
(XM_002696504)、猪(NM_214172)、人(BC143721)、小鼠
(BC138869)等物种 IGF1R基因 CDS区 DNA及氨基酸序列利
用 Blast分别进行比对分析。
1. 5 Real - time PCR法检测 IGF1R 基因在鹿茸顶端不同部
位组织的表达水平
合成 IGF1R基因特异引物(上游引物 5 - GCACCATCT-
TCAAAGGCAATC - 3和下游引物 5 - GAGACCAAGGCGTGG-
GAGT - 3) ,扩增片段长度为 136 bp。以鹿的持家基因 actin
(GenBank登录号:AY345228)作为内参基因,合成 actin 引物
(上游引物 5 - TGACCCTTAAGTACCCCATCGA - 3和下游引
物 5 - TTGTAGAA GGTGTGGTGCCAGAT - 3) ,扩增片段长
度为 85 bp。采用 Real Master Mix试剂和 7500 Real Time PCR
System分析 IGF1R基因在真皮层、间充质层、前软骨层和软
骨层组织中的转录表达水平。Real - time PCR 体系:1 ng 总
RNA反转录的 cDNA,上下游引物各 5 pmol,10 μL real Master
Mix,总体积为 25 μL。反应条件:94 ℃激活 DNA 聚合酶 2
min,94 ℃变性 20 s,60 ℃复性 30 s,68 ℃延伸 45 s;进行 40 个
循环。随后做 PCR产物的扩增曲线分析,使用 StepOne Soft-
ware v2. 1 软件分析 IGF1R相对内参 actin基因的差异表达 Ct
值(Ct 为荧光达到荧光阈值的循环数)。
2 结果与分析
2. 1 鹿茸顶端组织总 RNA的提取
各样品总 RNA经 1%琼脂糖凝胶电泳后可清晰见到 28
S、18 S和 15 S rRNA各 1 条带(图 1) ,表明本试验所提取的鹿
茸真皮、间充质、前软骨和软骨组织总 RNA是基本完整的,材
料保存和提取过程未发生 RNA降解。
2. 2 IGF1R基因的克隆
IGF1R基因 PCR扩增产物经电泳得到 1 203 bp 左右的 1
条特异性条带(图 2) ,与预期结果相符。提取质粒,分别用
XbaI、PstI双酶切和 PCR 鉴定重组质粒 pMD - 18T - IGF1R
(图 3) ,从图 3 中可看出,均得到了与目的带大小相符的明显
的电泳带,表明克隆基本成功。
2. 3 IGF1R基因的序列分析
东北梅花鹿 IGF1R基因与其它 4 个物种的 DNA 和氨基
酸序列比对结果分别见图 4 和图 5。其中:梅花鹿 IGF1R 基
因编码区部分序列为 1 203 bp,与牛、猪、人和小鼠核酸序列同
源性分别为 98. 07%、94. 21%、93. 94%、88. 05% (图 4) ;
IGF1R蛋白氨基酸序列长度为 401 个氨基酸,与牛、猪、人和
小鼠同源性分别为 98. 3%、98. 5%、97. 8%和 94. 5%(图 5)。
图 1 鹿茸顶端组织总 RNA提取结果
1 ~ 4.软骨、前软骨、间充质和真皮组织的总 RNA。
图 2 IGF1R基因的 PCR扩增结果
M. DL - 2000 Marker;1、2. IGF1R基因 PCR扩增产物。
图 3 重组质粒 pMD -18T - IGF1R的 PCR和双酶切鉴定结果
M. DL - 2000 Marker;1、2. 重组质粒 pMD - 18T - IGF1R 的 PCR 产
物;3、4.重组质粒 pMD18T - IGF1R;5、6. 重组质粒 pMD - 18T -
IGF1R双酶切产物(PstI /XbaI)。
2. 4 IGF1R基因在鹿茸顶端不同部位组织的差异表达
相对荧光定量 PCR 结果显示:以梅花鹿 actin 作为内源
参照基因,在鹿茸顶端间充质、真皮、前软骨和软骨组织中,
IGF1R基因 mRNA转录水平存在着明显的差异。其中:在软
骨区转录表达水平高于其它部位;其次,由高到低为前软骨
层、真皮层和间充质层。见图 6、表 1。
901第 9 期 胡 薇等:鹿茸顶端组织 IGF1R基因的部分 cDNA克隆及差异表达
图 4 东北梅花鹿、牛、猪、人及小鼠 IGF1R基因 DNA序列分析
“.”代表与梅花鹿碱基相同;“*”代表碱基缺失;每行末尾数字代表碱基数。
011 东 北 林 业 大 学 学 报 第 39 卷
图 5 东北梅花鹿、牛、猪、人及小鼠 IGF1R氨基酸序列分析
“.”代表与梅花鹿氨基酸相同,“*”代表氨基酸缺失;每行末尾数字代表氨基酸数。
图 6 鹿茸顶端不同部位组织 IGF1R基因的 PCR扩增曲线
横坐标为 Cycle;纵坐标为 ΔRn。
表 1 相对荧光定量 PCR法检测鹿茸顶端组织 IGF1R 基因的表达水
平(n = 3)
顶端
组织
actin扩增循
环数(Ct1)
IGF1R扩增循
环数(Ct2)
相对定量
结果(2ΔΔCt2)
以间充质表达
量为 1 标准化
间充质 13. 904 21. 300 0. 005 9 ± 0. 06 1. 000
真 皮 25. 798 32. 810 0. 007 7 ± 0. 38 1. 305
前软骨 18. 973 24. 667 0. 019 3 ± 0. 45 3. 254
软 骨 15. 724 20. 524 0. 035 9 ± 0. 23 6. 046
注:Ct 代表荧光达到荧光阈值的循环数;2ΔΔCt2代表目的基因相
对于内参基因的定量。
3 讨论
近年来,国内外学者相继在鹿茸中发现了各种细胞生长
因子,如胰岛素样生长因子、表皮生长因子、神经生长因子、转
化生长因子,表明鹿茸是一个天然的细胞生长因子库[7 - 8]。
最近研究表明,鹿茸生长因子不但与鹿茸生长有关,还与鹿角
柄的形成及鹿茸的转化有关[9]。已知 IGF1R为糖蛋白,是一
种细胞生长因子受体,广泛表达于多种细胞的表面,它接受
IGF1 和 IGF2 的刺激发挥促细胞生长、分裂及分化等生理作
用[10],介导 IGF1 和大部分 IGF2 的生物活性,维持细胞的最
佳生长条件和促进细胞的转化。Elliott[11]曾报道鹿茸顶端存
在 IGF - 1 受体,并推测 IGF - 1R 在鹿茸顶部以内分泌的方
式发挥其作用。而 IGF - 1 是一类多功能细胞增殖调控因子,
通过与 IGF1R受体结合而发挥作用,对胚胎发育和多种细胞
的生长增殖都在不同程度上发挥了积极的生物学功能[12]。
因此,IGF1R基因对动物体的生长发育具有重要的作用。
目前,鹿的 IGF1R 基因研究甚少,且 cDNA 尚未得到克
隆,GenBank中关于梅花鹿 IGF1R 基因序列没有任何记录。
本研究根据牛和猪的 IGF1R 基因序列设计引物,通过 RT -
PCR和 PCR技术克隆了梅花鹿 IGF1R 基因 cDNA 的部分序
列,并与牛、猪、人和鼠 4 个物种 IGF1R 基因进行了核苷酸和
氨基酸序列的比较分析,结果表明:该序列与牛、猪的 IGF1R
基因序列高度同源。
RT - PCR是一种非常敏感的检测方法,但无论竞争 RT
- PCR还是内源性参比基因 RT - PCR定量法,它们均属 PCR
终点检测法,在 PCR 扩增的指数期和平台期产量相差极大,
很难对起始模板数准确定量。荧光定量 PCR 技术不仅实现
了 PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规 PCR 相比,它具有
特异性更强、灵敏度高、重复性好和定量准确等优点,成为基
因工程研究中的重要工具,目前已得到广泛应用[13]。本研究
利用 Real time PCR方法,以梅花鹿 actin 基因作为内源参照
基因,对梅花鹿 IGF1R基因的 4 种组织进行了组织相对定量
表达分析,结果表明:IGF1R基因在检测的所有组织中均有不
同程度的表达,该结果具有很好的重复性和稳定性,且检测结
果用拷贝数来表示起始模板的含量,相对半定量 RT - PCR中
的比较值更为准确可靠。通过数据分析显示:IGF1R 基因在
软骨组织中表达量最高;其次,由高到低依次为前软骨层、真
皮层和间充质层。试验结果初步表明,IGF1R 是鹿茸再生过
程中软骨生长的主要调节因子之一。
目前,国内外对 IGF1R基因的研究主要集中在其与肿瘤
的关系上[14 - 15],提示 IGF1R和 IGF1 以自分泌途径参与肿瘤
发病过程,由于两者活性增强,促使受体活化水平的提高和信
号转导增强,进而促进细胞的异常增殖;而鹿茸细胞的增殖速
度比肿瘤细胞快 30 倍。IGF1R 基因到底在鹿茸组织中发挥
着怎样的功能,还需要今后大量的试验研究去证实。近几年,
笔者在寻找参与鹿茸再生调控的关键因子方面取得了一定的
进展,但是对于鹿茸复杂的生长调控机制研究而言,仍然处于
初级阶段。本研究只是针对 IGF1R基因在东北(下转 131页)
111第 9 期 胡 薇等:鹿茸顶端组织 IGF1R基因的部分 cDNA克隆及差异表达
测,采用溴甲酚绿比色法;尿素氮、丙氨酸氨基转移酶、天门冬
氨酸氨基转移酶水平检测,采用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸比色
法;碱性磷酸酶水平检测,采用对硝基苯酚比色法。
1. 6 数据分析
采用 SPSS11. 0 软件,以 LSD 法检验各处理组的血生化
指标与对照组的统计学差异。
2 结果与分析
进食天牛粉饲粮小鼠的血生化指标如表 2 所示。与对照
相比,试验结束时,饲粮为 100%天牛粉的小鼠体质量显著降
低,血浆总胆固醇、尿素氮水平显著升高(p < 0. 05) ,白蛋白
值显著降低(p < 0. 05) ,碱性磷酸酶活性降低(p = 0. 063) ;饲
粮含 50%天牛粉处理的小鼠,其尿素氮、天门冬氨基转移酶
活性升高(p < 0. 05)。
3 结论与讨论
天牛粉具有高蛋白(46. 3%)、高脂肪(15. 2%)的营养特
点。在小鼠饲粮中添加天牛粉的比例越高,蛋白质和脂肪水
平越高。饲粮天牛粉质量分数 50%以下时,并没有引起小鼠
血浆甘油三酯、总胆固醇和血糖水平的显著变化,显示该剂量
的饲粮脂肪水平能够被小鼠接受。然而,进食全天牛粉饲粮
小鼠的血浆总胆固醇升高,可直接导致碳水化合物供应不足
使血糖降低。天牛壳聚糖含量丰富[2],但其对调节血糖水平
的影响还需要试验验证。天牛粉比例大于 50%,饲粮蛋白质
水平则大于 32%,相比 GB 14924. 3—2001 推荐量 20%的蛋
白质水平[4]已经过高,致使小鼠血尿素氮水平显著升高。反
映了蛋白质营养过剩,这可能是引起一系列生化指标变化的
主要原因。高蛋白和高脂肪营养可能使机体代谢负担加重,
代谢平衡发生变化。由于全天牛粉日粮的蛋白质和脂肪水平
远高于推荐标准,导致本试验的全天牛粉日粮组小鼠的肝脏
对过量蛋白质、脂肪的代谢负担加重,饲粮理想氨基酸平衡变
差,进而引起机体合成白蛋白能力降低,免疫机能下降。肝、
心、肾损伤或药物作用可通过 ALT、AST、ALP 等酶指标以及
BUN、Glu、TCh、Alb的变化反应出来[6 - 7]。ALT活性的降低和
AST活性的提升,反映糖异生能力的下降和蛋白质核酸代谢
的活跃。这与饲粮天牛粉比例小于 50%的条件下,实验动物
血糖水平降低,血浆白蛋白及尿素氮水平的波动相关。ALP
主要分布于肝脏、骨骼、肾脏等组织气器,当以上组织器官损
伤时,血清 ALP 可升高[6],极端营养条件下碱性磷酸酶活性
的降低反映机体总体代谢机能的衰弱。酶学指标变化幅度较
小,总体反映出天牛粉不能对小鼠肝、心和肾产生实质性损伤
或毒性。
表 2 进食天牛粉饲粮小鼠的血生化指标
处理
体质量 /
g
甘油三酯 /
mmol·L -1
总胆固醇 /
mmol·L -1
血糖 /
mmol·L -1
白蛋白 /
g·L -1
尿素氮 /
mmol·L -1
丙氨酸氨基转
移酶 / IU·L -1
天门冬氨酸氨基
转移酶 / IU·L -1
碱性磷酸酶 /
IU·L -1
对照 26. 21 ± 2. 34 0. 66 ± 0. 14 3. 18 ± 0. 50 1. 78 ± 1. 00 33. 58 ± 3. 73 9. 76 ± 1. 44 175. 58 ± 126. 00 296. 80 ± 109. 40 65. 16 ± 30. 70
1 27. 58 ± 2. 36 0. 75 ± 0. 14 3. 03 ± 0. 61 1. 54 ± 0. 78 34. 00 ± 4. 37 8. 78 ± 1. 96 156. 65 ± 103. 70 357. 17 ± 133. 80 51. 33 ± 12. 66*
2 26. 05 ± 2. 81 0. 70 ± 0. 09 3. 16 ± 0. 26 1. 51 ± 0. 81 31. 83 ± 3. 90 11. 31 ± 4. 54 150. 83 ± 75. 25 367. 36 ± 126. 30 54. 36 ± 26. 00
3 24. 50 ± 2. 08 0. 63 ± 0. 17 3. 26 ± 0. 56 1. 87 ± 0. 53 34. 67 ± 5. 03 14. 86 ± 4. 79* 156. 08 ± 91. 05 414. 54 ± 141. 40* 55. 81 ± 24. 12
4 18. 41 ± 2. 26* 0. 61 ± 0. 25 4. 04 ± 0. 46** 1. 47 ± 0. 59 28. 00 ± 5. 02* 18. 11 ± 3. 57** 185. 70 ± 147. 10 404. 70 ± 137. 20 44. 55 ± 22. 85
注:数据后* 表示该处理与对照相比差异显著(p <0. 05) ,**表示差异极显著(p <0. 01) ;n =12。
小鼠以天牛粉为单一食物时,高蛋白、高脂肪营养使总代
谢氮水平和脂肪过剩导致血尿素氮和血清总胆固醇升高,白
蛋白水平降低。碳水化合物供应减少致使血糖水平倾向于下
降。丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶
水平没有受到进食全天牛粉饲粮的影响。小鼠正常进食天牛
粉比例小于 25%的饲粮时,天牛粉对小鼠生化指标无异常或
不利影响,不显示血生化指标毒性效应。
参 考 文 献
[1] 黄琼,周祖基,周定刚,等.两种天牛的营养成分分析[J]. 东北
林业大学学报,2007,35(1) :49 - 52.
[2] Jensen M,Weis-Fogh T. Biology and physics of locust flight V.
Strength and elasticity of locust cuticle[J]. Philos Trans R Soc
London,1962,245:137 - 169.
[3] Chen Jinxiang,Ni Qingqing,Xu Yinglian,et al. Lightweight com-
posite structures in the forewings of beetles[J]. Composite Struc-
tures,2007,79(3) :331 - 337.
[4] 李大军,宋海明,王宝.栗山天牛成分分析[J].吉林林业科技,
2011,40(1) :17 - 19.
[5] 卫生部. GB 14924. 3—2001.实验动物小鼠、大鼠配合饲料标准
[S].北京:中国标准出版社,2001.
[6] 王天成,张智勇,贾光,等.纳米氧化镁对小鼠血清生化指标的
影响[J].中国工业医学杂志,2005,18(3) :140 - 142.
[7] 孙凤祥,翟筱,崔群,等.丙烯酰胺对染毒小鼠血清生化指标的
影响[J].潍坊医学院学报,2002,24(1) :

64 - 65.
(上接 111 页)梅花鹿这个物种上进行了初步的探索,为进一
步研究 IGF1R在鹿茸角快速生长和再生过程中可能具有的
重要作用,提供一定参考和可利用的基础试验数据。
参 考 文 献
[1] Kierdorf U,Kierdorf H,Szuwart T. Deer antler regeneration:cells,
concepts,and controversies[J]. J Morphol,2007,268(8):726 -738.
[2] Price J,Faucheux C,Allen S. Deer antlers as a model of mammali-
an regeneration[J]. Curr Top Dev Biol,2005,67:1 - 48.
[3] 郝丽,李和平,严厉.东北梅花鹿鹿茸尖端组织全长 cDNA 文库
的构建[J].东北林业大学学报,2009,37(11) :120 - 122.
[4] Li Chunyi,Suttie J M. Tissue collection methods for antler research
[J]. European Journal of Morphology,2003,41(1) :23 - 30.
[5] 冯海华,闭兴明,赵丽红,等. 胰岛素样生长因子 1 对不同生长
时期鹿茸生长中心细胞体外增殖的影响[J]. 中国组织工程研
究与临床康复,2007,11(37) :7373 - 7376.
[6] Suttie J M,White R G,Breier B H,et al. Photoperiod associated
changes in insulin-like growth factor-I in reindeer[J]. Endocrinolo-
gy,1991,129(2) :679 - 682.
[7] 刘学东,张子栋,郑冬,等. 东北马鹿鹿茸软骨组织 cDNA 文库
构建及 IGF2 基因克隆与结构分析[J].中国农业科学,2008,41
(9) :2806 - 2812.
[8] 王秋玉,王本祥. 论鹿茸生长因子[J]. 中医药学报,2000,28
(6) :10 - 12.
[9] Li Chunyi,Littlejohn R P,Suttie J M. Effects of insulin-like growth
factor I and testosterone on the proliferation of antlerogenic cells in
vitro[J]. J Exp Zool,1999,284(1) :82 - 90.
[10] Navarro M,Baserga R. Limited redundancy of survival signals
from the type 1 insulin-like growth factor receptor[J]. Endoeri-
nology,2001,142(3) :1073 - 1081.
[11] Elloitt J L,Oldham J M,Asher G W,et al. Effect of testosterone
on binding of insulin-like growth factor-Ⅰ (IGF-Ⅰ)and IGF-Ⅱ
in growing antlers of fallow deer (Dama dama) [J]. Growth Reg-
ul,1996,6(4) :214 - 221.
[12] 赵红霞,詹勇,许梓荣,等. 胰岛素样生长因子 - 1 研究与应用
[J].畜牧与兽医,2002,34(6) :36 - 38.
[13] 赵焕英,包金风.实时荧光定量 PCR技术的原理及其应用研究
进展[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2007,16(4) :492 -
497.
[14] 谢庆祥,林吓聪,张闽峰,等. IGF1 和 IGFR 在膀胱癌组织中表
达的意义[J].癌症,2004,23(6) :707 - 709.
[15] 丁娟娟.胰岛素样生长因子一及其受体在胃癌中的表达和意
义[D].天津:天津医科大学,2006.
131第 9 期 李大军等:进食栗山天牛粉对小鼠血生化指标的影响