全 文 ：［收稿日期］ 20130617(023)
［基金项目］ 广东省科技计划项目(2009B0308001002)
［第一作者］ 李雪玲，中药药剂学硕士，E-mail:lxl825528
@ 163. com
［通讯作者］ * 刘强，教授，博士，从事中药新剂型与新技术研
究，E-mail:gzlq2002@ 163． com
鹿茸草药材的 HPLC指纹图谱
李雪玲1，黄德浩2，刘志刚1，左婷1，李沙沙1，刘强1* ，黄志刚2
(1. 南方医科大学中医药学院，广州 510515;2. 惠州市九惠制药股份有限公司，广东 惠州 516007)
［摘要］ 目的:建立鹿茸草的 HPLC指纹图谱，为鹿茸草的质量控制提供依据。方法:采用 HPLC-UV分析鹿茸草的指纹
图谱，色谱条件为 Agilent HC C18 色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，以乙腈(A)-0. 4% 磷酸水(B)梯度洗脱，流速
0. 8 mL·min －1，柱温 35 ℃，检测波长 254 nm，进样量 10 μL。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A 版)对不同批次
鹿茸草的 HPLC图进行比较分析。结果:建立了鹿茸草的 HPLC 指纹图谱，以木犀草素为参照峰，确立了鹿茸草指纹图谱中的
13 个共有峰。结论:所建立的指纹图谱稳定性和重复性均好，可用于鹿茸草药材的常规质量控制。
［关键词］ 鹿茸草;木犀草素;高效液相色谱;指纹图谱
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)05-0082-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2014050082
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20131218． 1417． 016． html
［网络出版时间］ 2013-12-18 14:17
HPLC Fingerprint of Monochasma sheareri
LI Xue-ling1，HUANG De-hao2，LIU Zhi-gang1，ZUO Ting1，LI Sha-sha1，
LIU Qiang1* ，HUANG Zhi-gang2
(1. Department of Traditional Chinese Medicine of Nanfang Hospital，Southern Medical University，
Guangzhou 510515，China;2. Jiuhui Pharmaceutical Co． LTD，Huizhou 516007，China)
［Abstract］ Objective:To establish the chromatographic fingerprint for Monochasma sheareri． by ＲP-
HPLC． Method:The HPLC fingerprint of M． sheareri were determined on an Agilent HC C18 column (4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)eluted with the mobile phase consisted of acetonitrile and 0. 4% phosphoric acid in gradient
mode，flow rate 0. 8 mL·min －1，column temperature 35 ℃and the detection wavelength was set at 254 nm． The
chromatograms of different batches of M． sheareri． were compared by the software of Similarity Evaluation System
for Chromatographic Fingerprint of TCM (Version 2004A)． Ｒesult:HPLC Fingerprint of M． sheareri． was
established with luteolin as the reference compound． 13 common peaks were selected as the fingerprint peaks of M．
sheareri． Conclusion:The established HPLC fingerprint of M． sheareri． has desirable precision，reproducibility，
and can be applied to routine quality control of M． sheareri．
［Key words］ Monochasma sheareri;luteolin;fingerprint;HPLC
鹿茸草为玄参科植物绵毛鹿茸草的全草，味苦
涩性凉，具有清热解毒、祛风止痛、凉血止血的功
效，主治感冒、咳嗽、肺炎发热、疮疖臃肿等［1-2］。鹿
茸草中含有黄酮类、生物碱类、皂苷类以及多糖类成
分［3-5］，张舒婷等［6］采用 HPLC对鹿茸草中的木犀草
素进行测定。现行的用 1 ～ 2 种化学成分表征中药
质量的质控方法，无法表征中药制剂的物质基础和
化学成分群的整体性和复杂性，难以全面控制鹿茸
草药材的内在质量。同时，由于采收时间及贮藏对
药材质量具有重要影响［7］，不同采收时间的鹿茸草
药材是否存在显著的质量差异尚有待研究。本文采
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第 20 卷第 5 期
2014 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 5
Mar．，2014
用 HPLC建立了鹿茸草药材的指纹图谱，并对所得
图谱进行分析、解析，建立了鹿茸草指纹图谱的指标
参数评判标准，为全面控制鹿茸草的质量提供了
参考。
1 材料
1. 1 仪器 Agilent 1260 型高效液相色谱仪(真空
脱气机、四元泵、二极管阵列检测器、自动进样器、智
能恒温柱温箱、ChemStation 化学工作站)，SB3200
型超声清洗仪(BＲNSON)，AB1352S型电子天平(1 /
10 万，METT LEＲ TOLEDO)。
1. 2 试药 木犀草素(批号 111520-200504)购于
中国药品生物制品检定所，流动相乙腈为色谱纯，水
为二重蒸馏水，其他试剂为分析纯。
1. 3 药材 鹿茸草由惠州市九惠制药股份有限公
司提供，经南方医科大学中医药学院陈兴兴鉴定为
玄参科植物绵毛鹿茸草 Monochasma sheareri Maxim．
ex Franch． et Savat．的全草，批号见表 1。
表 1 鹿茸草药材不同样品批号
No． 批号 No． 批号
1 20080801 6 20120108
2 20090103 7 20120501
3 20100702 8 20120505
4 20100802 9 20120910
5 20110321 10 20121010
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent HC C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)，流动相 A为乙腈，B为 0. 4%磷酸，
梯度洗脱条件见表 2，流速 0. 8 mL·min －1，检测波长
254 nm，柱温 35 ℃，进样量 10 μL。
表 2 梯度洗脱程序
T /min B /% T /min B /%
0 3 25 17
8 4 30 18
12 15 45 35
18 16 60 45
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取木犀草素对照
品适量，加甲醇溶解并定容至 10 mL，制成木犀草素
储备液。精密吸取木犀草素储备液 1 mL于 10 mL量
瓶中，加甲醇定容，制成木犀草素 0. 011 2 g·L －1的对
照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 将鹿茸草剪碎，称取样
品约 1 g于 50 mL 锥形瓶中。加入 25 mL 甲醇，称
定质量，超声 40 min。放冷后，称重，用甲醇补足减
失的质量，摇匀，滤过。用微孔滤膜(0. 45 μm)滤
过，取续滤液，作为供试品溶液。
2. 3 方法学考察［8-10］
2. 3. 1 专属性试验 取空白溶剂(甲醇)和鹿茸草
供试品溶液各 1 份，按 2. 1 项色谱条件，分别进样
10 μL，记录色谱图。比较两者的色谱图可知，空白
溶剂对供试品溶液的测试不存在干扰，专属性良好。
2. 3. 2 精密度试验 取同一份鹿茸草供试品溶液，
连续进样 6 次，记录 60 min 图谱。以木犀草素峰
(13 号峰)为参照峰，计算各共有峰相对保留时间的
ＲSD均 ＜ 1. 86%，相对峰面积的 ＲSD 均 ＜ 2. 23%，
表明本方法精密度良好，符合指纹图谱的检测要求。
2. 3. 3 稳定性试验 取同一批鹿茸草供试品溶液，
在 0，2，4，6，8，12，24 h 检测特征指纹图谱，结果各
共有峰相对保留时间的 ＲSD 均 ＜ 2. 17%，相对峰面
积的 ＲSD均 ＜ 2. 93%，表明供试品溶液在 24 h内稳
定性良好，符合指纹图谱的检测要求。
2. 3. 4 重复性试验 平行制备同一批 5 份鹿茸草
供试品溶液，测定，结果各共有峰相对保留时间的
ＲSD 1. 45%，相对峰面积的 ＲSD 2. 09%，表明本方
法重复性良好，符合指纹图谱的检测要求。
2. 4 鹿茸草药材 HPLC 指纹图谱的建立及相似
度计算［11］
2. 4. 1 指纹图谱的建立及共有峰的标定 依上述
方法测定了 10 批不同采收时间鹿茸草药材的指纹
图谱，采用国家药典委员会颁布的《中药色谱指纹
图谱相似度评价系统 A 版》软件导入 10 批次鹿茸
草的 HPLC图谱数据，以中位数法生成对照指纹图
谱的共有模式，建立对照指纹图谱。10 批鹿茸草药
材的指纹图谱见图 1，指纹图谱共有模式见图 2。
图 1 10 批鹿茸草药材的指纹图谱
根据 10 批供试品溶液 HPLC 指纹图谱给出的
数据，比较供试品图谱，其中 13 个峰是各批供试品
所共有的，因此，确定这 13 个峰为 10 个不同采收时
·38·
李雪玲，等:鹿茸草药材的 HPLC指纹图谱
图 2 鹿茸草药材指纹图谱共有模式
间鹿茸草药材的共有峰，并指认了 12 峰为木犀草
素，确定其为参比峰，标号为 S，其他特征峰依次标
号为 1，2……S，13，根据指纹图谱相似度评价结果
得出各样品的相似度，结果见表 3。
由表 3 可以看出，S1，S2，S3 相似度均 ＜ 0. 9，
S4 ～ S10 相似度良好，均 ＞ 0. 9，说明不同采收时间
对鹿茸草中化学成分含量影响较大。
2. 4. 2 鹿茸草药材各样品指纹图谱共有峰的相对
保留时间及相对峰面积值 以 12 号峰为参照峰，对
鹿茸草药材指纹图谱共有模式中已标定的 13 共有
峰进行计算，各样品的指纹图谱共有峰相对保留时间
及相对峰面积值数据见表 4，5。由表 4 可以看出，所
建立的鹿茸草药材指纹图谱的 13 个共有峰非常吻
合，保留时间稳定，无明显差异。由表 5 可知，不同批
次鹿茸草样品各成分的含量则存在明显差异。
表 3 10 批鹿茸草相似度数据
No． S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照指纹图谱
S1 1 0. 362 0. 53 0. 713 0. 724 0. 497 0. 562 0. 666 0. 619 0. 715 0. 66
S2 0. 362 1 0. 674 0. 763 0. 631 0. 947 0. 746 0. 712 0. 800 0. 603 0. 749
S3 0. 53 0. 674 1 0. 827 0. 794 0. 766 0. 857 0. 773 0. 837 0. 749 0. 826
S4 0. 713 0. 673 0. 827 1 0. 989 0. 855 0. 933 0. 979 0. 959 0. 981 0. 985
S5 0. 724 0. 631 0. 794 0. 989 1 0. 825 0. 911 0. 980 0. 944 0. 989 0. 977
S6 0. 497 0. 947 0. 766 0. 855 0. 825 1 0. 893 0. 891 0. 937 0. 811 0. 912
S7 0. 562 0. 746 0. 857 0. 933 0. 911 0. 893 1 0. 929 0. 973 0. 890 0. 956
S8 0. 666 0. 712 0. 773 0. 979 0. 980 0. 891 0. 929 1 0. 965 0. 982 0. 993
S9 0. 619 0. 800 0. 837 0. 959 0. 944 0. 937 0. 973 0. 965 1 0. 922 0. 984
S10 0. 715 0. 603 0. 749 0. 981 0. 989 0. 811 0. 89 0. 982 0. 922 1 0. 968
对照指纹图谱 0. 66 0. 749 0. 826 0. 985 0. 977 0. 912 0. 956 0. 993 0. 984 0. 968 1
表 4 鹿茸草指纹图谱共有峰相对保留时间
No．
相对保留时间
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 S 13
S1 0. 051 8 0. 082 6 0. 086 8 0. 099 7 0. 136 3 0. 332 2 0. 364 4 0. 387 2 0. 406 7 0. 446 5 0. 592 5 1. 000 1. 065 2
S2 0. 051 8 0. 082 8 0. 086 5 0. 100 0 0. 135 9 0. 332 1 0. 364 2 0. 387 3 0. 406 8 0. 446 6 0. 593 0 1. 000 1. 065 1
S3 0. 051 9 0. 082 5 0. 086 5 0. 099 5 0. 136 1 0. 332 3 0. 364 2 0. 387 3 0. 406 8 0. 446 8 0. 592 7 1. 000 1. 065 1
S4 0. 051 6 0. 082 6 0. 086 8 0. 099 5 0. 136 1 0. 332 3 0. 364 4 0. 378 2 0. 406 6 0. 446 6 0. 592 4 1. 000 1. 065 3
S5 0. 051 7 0. 082 7 0. 086 9 0. 099 8 0. 136 2 0. 331 9 0. 364 3 0. 387 4 0. 406 5 0. 446 7 0. 592 5 1. 000 1. 065 2
S6 0. 051 6 0. 082 7 0. 086 6 0. 099 9 0. 136 0 0. 332 4 0. 364 2 0. 387 1 0. 406 7 0. 446 4 0. 592 6 1. 000 1. 065 4
S7 0. 051 5 0. 082 8 0. 086 8 0. 099 7 0. 136 2 0. 332 3 0. 364 0 0. 387 1 0. 406 4 0. 446 5 0. 592 6 1. 000 1. 065 1
S8 0. 051 7 0. 082 5 0. 086 7 0. 099 6 0. 136 3 0. 332 3 0. 364 5 0. 387 3 0. 406 5 0. 446 5 0. 592 7 1. 000 1. 065 3
S9 0. 051 7 0. 082 6 0. 086 7 0. 099 8 0. 163 2 0. 332 1 0. 364 5 0. 387 2 0. 406 6 0. 446 3 0. 592 4 1. 000 1. 065 2
S10 0. 051 8 0. 082 7 0. 086 5 0. 099 7 0. 136 0 0. 332 1 0. 364 3 0. 387 4 0. 406 8 0. 446 8 0. 592 8 1. 000 1. 065 2
ＲSD% 1. 24 0. 11 0. 72 0. 10 0. 12 0. 20 0. 04 0. 04 0. 27 0. 03 0. 05 0. 00 0. 01
3 讨论
3. 1 提取条件的考察 对不同提取溶剂如 60%乙
醇、乙醇、70%甲醇和甲醇进行考察，同时比较了超声
提取、加热回流、冷浸等不同提取方法，结果表明以甲
醇为提取溶剂超声提取 40 min的方法提取率较优。
3. 2 色谱条件的优化 考察了甲醇-水，乙腈-水，
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第 20 卷第 5 期
2014 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 5
Mar．，2014
表 5 鹿茸草指纹图谱共有峰相对峰面积
No．
相对保留时间
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 S 13
S1 0. 341 2 0. 278 5 0. 217 3 0. 150 3 0. 107 2 0. 146 6 0. 100 3 0. 074 7 0. 161 7 0. 062 4 0. 184 4 1. 000 0. 050 1
S2 0. 488 5 0. 123 7 0. 158 1 0. 045 1 0. 325 0 2. 705 8 0. 028 2 0. 025 7 0. 021 2 0. 031 1 0. 754 0 1. 000 0. 015 0
S3 0. 349 4 0. 343 8 0. 639 9 0. 310 7 0. 077 5 0. 628 6 0. 059 2 0. 024 6 0. 107 1 0. 012 8 0. 846 0 1. 000 0. 068 4
S4 0. 514 1 0. 074 1 0. 140 4 0. 108 1 0. 256 9 0. 377 5 0. 052 2 0. 021 8 0. 052 5 0. 046 8 0. 306 9 1. 000 0. 034 1
S5 0. 412 1 0. 081 1 0. 120 2 0. 039 9 0. 277 5 0. 307 9 0. 030 0 0. 015 8 0. 005 4 0. 037 8 0. 255 3 1. 000 0. 044 5
S6 0. 299 0 0. 047 2 0. 068 7 0. 022 2 0. 189 7 1. 239 4 0. 017 2 0. 022 9 0. 005 8 0. 037 7 0. 423 1 1. 000 0. 029 0
S7 0. 216 8 0. 043 6 0. 056 7 0. 019 3 0. 106 3 0. 531 0 0. 017 3 0. 011 9 0. 025 1 0. 028 7 0. 673 6 1. 000 0. 024 3
S8 0. 312 1 0. 047 7 0. 056 9 0. 029 8 0. 210 6 0. 441 6 0. 020 1 0. 011 5 0. 005 5 0. 029 4 0. 205 0 1. 000 0. 028 4
S9 0. 420 2 0. 070 1 0. 072 9 0. 042 9 0. 206 6 0. 620 0 0. 020 3 0. 011 2 0. 013 9 0. 047 5 0. 491 5 1. 000 0. 044 8
S10 0. 514 0. 079 7 0. 072 3 0. 042 1 0. 231 7 0. 285 7 0. 021 8 0. 015 5 0. 014 7 0. 052 0 0. 156 1 1. 000 0. 078 8
ＲSD /% 17. 68 32. 47 49. 56 49. 47 46. 76 115. 72 32. 6 60. 66 64. 30 32. 69 56. 84 0. 00 51. 52
甲醇-0. 1%磷酸溶液，乙腈-0. 1%磷酸溶液，甲醇-
0. 4%磷酸溶液和乙腈-0. 4%磷酸溶液 6 个流动相
系统。结果由于大比例甲醇会导致柱压较高，而且
以甲醇作为流动相系统，洗脱的物质较少，分离度不
理想。采用乙腈-0. 4%磷酸溶液作为流动相系统，
得到的色谱峰总数多，各峰分离度有所改善，而且色
谱峰峰形好且稳定。
3. 3 检测波长的选择 使用二极管阵列检测器对
样品进行 190 ～ 400 nm 的全波长扫描，并对各波长
下的色谱图进行分析比较。结果表明指标成分木犀
草素有 3 个吸收带，分别在 210，254，350 nm处均有
较大吸收，而且在 254 nm 下检测到的峰的数目较
多，各峰分离良好，特征峰明显且峰形较好，从图谱
中可以尽可能的获取色谱组分信息以反映体系组成
的全貌，因此选定 254 nm为测定波长。
3. 4 10 批药材的质量评价 在生药学鉴定的基础
上，建立了鹿茸草药材的 HPLC指纹图谱，并采用中
药色谱指纹图谱相似度评价系统 A 版软件，对不同
批次的鹿茸草药材的 HPLC指纹图谱进行相似度评
价，结果发现不同批次的鹿茸草药材的含量差距较
大，可能是因为采收时间以及贮藏影响鹿茸草药材
中化学成分的含量，鹿茸草药材采收后放置越久，由
于药材受外界因素和自身因素的影响，质量不断发
生变化，其变化的性质和程度各有不同，因此，对鹿
茸草药材的质量控制应从源头严格监控，从而保证
鹿茸草药材成分中有效成分的含量相对稳定。
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技术要求［S］． 2000.
［责任编辑 顾雪竹］
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李雪玲，等:鹿茸草药材的 HPLC指纹图谱