全 文 ：中 药 研究
白花蛇舌草与水线草的鉴别及化学成分的含量测定
陈彩莲 ,朱流财
(福建省莆田市武警 8710部队医院 ,福建 莆田 351133)
摘　要:目的　鉴别白花蛇舌草与水线草 ,并对其所含化学成份作定量分析。方法　采用生药学方法及含量
测定的方法对白花蛇舌草及其伪品水线草进行鉴别。结果　在生药学研究中 , 两种药物存在着差异 , 在含量测定
中 ,白花蛇舌草与水线草含有的多糖成分与氨基酸总量存在着差异 , 而且两种药物所含的主要成分也不同。结论
　将生药学研究方法和含量测定方法相结合 , 鉴别出白花蛇舌草与水线草 ,为临床用药的安全有效性作出进一步
的保证。
关键词:白花蛇舌草;水线草;多糖成分;氨基酸总量;齐墩果酸;甙类物质;鉴别
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1000-0704(2011)06-0069-03
　　白花蛇舌草 [ OldenlandiaDifusa(Willd)Roxb]为茜草科植物
白花蛇舌草的干燥全草 ,为常用中药 ,具有清热解毒 、利尿消肿 、
活血止痛之功效 , 广泛分布于亚热带地区。近年来由于临床上
应用广泛 , 商品供不应求 , 导致收购和临床用药上 , 混淆情况很
普遍 [ 1] 。常见的混伪品有水线草 [ (茜草科)Hedyotiscorym-bo-
sa(L)Lam的全草 ] 。白花蛇舌草本是我国南方的民间草药 , 于
近代开发 , 是临床常用的清热解毒药。最早记载在 《广西中药
志》。 《中国药典》 1995年版记载为茜草科白花蛇舌草一种 [ 2] 。
其性味微苦 , 甘寒。入胃 、小肠 、大肠经 , 有清热利湿 , 解毒消痈
之功效。主治痈肿疮毒 , 毒蛇咬伤 , 咽喉肿痛 , 热淋 ,胃癌及食管
癌等多种病症。现代药理实验表明 ,白花蛇舌草主要有解热 、抗
炎及免疫等方面的药理作用 , 其临床功效主要也是以这些方面
药理作用为基础。为保证临床用药安全有效 , 我们对白花蛇舌
草进行生药研究 , 并将常见的混伪品水线草进行鉴别。
1　仪器与药品
1.1　仪器
日本岛津 UV-210可见紫外分光光度仪 , HITCHI835-50
型高速氨基酸分析仪(上海市实验仪器厂), 离心机。
1.2　试药
无水葡萄糖;氯仿(分析纯 , 哈尔滨市新达化工厂);乙醇 、甲
醇 、苯酚 、硫酸 、盐酸 、NAOH、醋酸乙酯(天津市东方化工厂);齐
墩果酸对照品(中国生物制品鉴定所);硅胶 G(青岛海洋化工有
限公司)。
2　生药学研究
2.1　植物形态特征鉴别 [ 3]
白花蛇舌草为一年生披散小草本植物 , 茎扁圆柱形 , 从基部
分枝。单叶对生 、膜质 、线形。 花四数 , 单生或成对生于叶腋。
蒴果扁球形 , 灰褐色。水线草为一年生披散纤弱草本植物 , 秃净
或被粉状微毛。茎多分枝 ,无毛或疏被细柔毛。叶对生 , 无柄或
具短柄;叶片线状披针形 , 或线形。花序腋生 ,多为 2-5朵排列
成伞房花序。蒴果圆球形 ,种子细小 , 多数。
2.2　显微特征鉴别
2.2.1　白花蛇舌草:(1)表皮细胞一列 , 类方形或卵圆形 ,常见
单个细胞向外强烈突起 ,外被角质层;(2)皮层较窄 , 细胞一般比
表皮细胞小 ,含少量小油滴 , 个别细胞中含草酸钙针晶束;内皮
层细胞一列 ,切向扁长;(3)韧皮部狭窄 ,约 2-5列细胞。 (4)木
质部呈环 ,导管常 2-6个径向单列 , 木纤维壁厚 , 木化;(5)髓部
宽阔 ,细胞较大 , 可见草酸钙针晶。
2.2.2　水线草显微鉴别:(1)表皮细胞一列 , 排列整齐 , 类圆形
或类方形 ,可见皮孔;(2)皮层稍宽 ,多见皮薄壁细胞含草酸钙针
晶束 ,内皮层可见;(3)韧皮部窄;(4)木质部导管呈放射状排列 ,
大小较均匀 ,木化;(5)髓部薄壁细胞含草酸钙簇晶。
3　有效成份的含量测定
3.1　多糖成分的含量测定 [ 4]
3.1.1　对照品溶液的制备:精密称取 105℃干燥至恒重的无水
葡萄糖 100mg, 置 100mL量瓶中 , 加蒸馏水溶解并稀释至刻度 ,
制成 1.014mg/mL的对照品溶液。
3.1.2　标准曲线的制备:精密量取对照品溶液 0.0、 1.0、 1.5、
2.0、 2.5、 3.0mL, 分别置于 50mL量瓶中 , 加水稀释至刻度 , 摇
匀。精密量取上述溶液各 2mL, 置具塞试管中 , 分别加 4%苯酚
溶液 lmL,混匀 , 迅速加入硫酸 7mL, 于 40℃水浴中保温 30min,
取出后冰水浴中放置 5min, 取出 , 以第一份为空白 , 照分光光度
法实验 ,在 490nm的波长处测定吸收度。经考察葡萄糖标准品
在 4.0560×10-6 -1.2168 ×10-5g范围内呈良好的线性关系 ,
以吸收度为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,绘制标准曲线 , 回归方程为:
y=7209.073x-0.0344 r=0.9996.
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3.1.3　样品测定:称取水线草商品 、白花蛇舌草商品(福建省鹭
燕医药有限公司)、水线草自采品白花蛇舌草品粗粉各 1g, 置圆
底烧瓶内 , 加水 100mL, 回流提取 1h, 用脱脂棉过滤 , 如上重复提
取 1次 , 两次药液合并 ,浓缩至约 50mL, 移至 100mL量瓶中 , 加
水至刻度 , 摇匀。精密量取 2mL, 加乙醇 10mL, 搅拌 , 离心 , 取沉
淀加水溶解 , 置 50mL量瓶中 , 并稀释至刻度 , 精密量取 2mL, 加
4%苯酚溶液 1mL,混匀 , 迅速加入硫酸 7mL, 摇匀 , 于 40℃水浴
中保温 30min, 取出后冰水浴中放置 5min, 照分光光度法实验 , 在
490nm的波长处测定吸收度。
从标准曲线上读出供试品溶液中多糖含量 , 计算 , 得出各供
试品多糖成分的含量 。结果见表 1。
表 1　各供试品多糖含量
样品 1 2 3 平均值 RSD(%)
白花蛇舌草
商品 2.3792 2.3872 2.3459
2.3078±
0.0219 0.924
白花蛇舌草
自采品 2.4992 2.4829 2.7320
2.5714±
0.1393 5.419
水线草
商品 2.3038 2.2531 2.2900
2.2823±
0.0262 1.149
水线草
自采品 2.3234 2.2975 2.2717
2.2975±
0.0259 1.125
　　注:水线草商品及自采品多糖含量均低于白花蛇舌草。
3.2　总氨基酸含量测定
准确称取供试品干品 , 水线草 214.7mg, 白花蛇舌草
203.5mg,装入硬质玻璃水解管中 , 加入 6N盐酸适量 , 搅拌使样
品溶解 , 然后封管 ,将封好的管放入烘箱 , 维持 110士 1℃24h使
其完全水解 , 最后蒸干 ,放置 , 并加入适量 NaOH溶液 , 室温下放
置 4h, (使半肤氨酸氧化为肤氨酸)再加入 0.02N的 HCl溶液适
量并稀释至 10mL,样品溶液以 1000转 /min离心 20min,稀释 , 以
高速氨基酸分析仪测定水解氨基酸。
工作条件:柱温 53℃ , 泵压力 90kg/cm2 , 泵流速 0.225mL/
min,进样体积 50 μL。结果见表 2。
表 2　白花蛇舌草 、水线草的氨基酸总量
氨基酸名称 样品中含量(%)白花蛇舌草 水线草 氨基酸名称
样品中含量(%)
白花蛇舌草 水线草
门冬氨酸 2.8877 1.9378 异亮氨酸 0.5639 0.7855
苏氨酸 0.4856 0.6789 亮氨酸 0.8839 1.3607
丝氨酸 0.4340 0.5893 酪氨酸 0.3432 0.4657
谷氨酸 1.3768 1.9187 苯丙氮酸 0.7044 0.8790
脯氨酸 0.8691 0.7249 赖氮酸 0.5339 0.6570
甘氨酸 0.6631 0.9123 氨 0.4455 0.3450
丙氨酸 0.6490 0.9503 组氨酸 0.2454 0.3097
胱氨酸 0.0583 0.0434 色氨酸 - -
缬氨酸 0.0727 0.9828 精氨酸 0.6929 0.8557
甲硫氨酸 0.1166 0.1715 氨基酸总量 12.70 14.57
　　结果显示白花蛇舌草的氨基酸总量少于水线草(色氨酸在
测定过程中 ,由于酸水解 , 完全被破坏 ,故未测出。)
3.3　白花蛇舌草中齐墩果酸的含量测定 [ 5]
3.3.1　溶液的制备
3.3.1.1　对照品溶液的制备:精密称取齐墩果酸对照品 8.0mg
于 5mL容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,即得。
3.3.1.2　药材供试液的制备:取过 40目筛的干燥的白花蛇舌
草药材粉末 0.2g, 精密称定 , 加硫酸 -乙醇(1∶ 9)50mL, 回流
3h, 待冷却后 , 加氯仿 50mL, 再回流 2h, 冷却 , 过滤。 药渣用
20mL氯仿洗涤 ,洗涤液与滤液合并。分取氯仿层 、水层 , 分别用
10mL氯仿萃取 3次 ,合并氯仿液。氯仿液用 40mL水洗涤 , 分取
氯仿层 ,置水浴上蒸干。残渣用氯仿溶解并定溶至 2mL, 作供试
液。
3.3.2　薄层扫描条件:硅胶 G预制薄层板 , 展开剂为氯仿 -甲
醇(9∶1),上行展开后 ,取出 , 晾干 ,喷 10%硫酸乙醇溶液 , 105℃
烘 3min, 取出 ,在薄层板上覆盖一同样大小的洁净玻璃板 ,四周
用胶带封牢。
3.3.3　线性范围:精密吸取上述齐墩果酸对照品溶液 0.5、 1.0、
2.0、3.0、4.0μl,分别点于同一硅胶 G薄层板上 , 按上述条件展
开 、显色 、扫描 ,得回归方程 Y=3565X-1779, r=0.9996,线性范
围在 0.8-6.4μg内。
3.3.4　精密度试验:精密吸取齐墩果酸对照品溶液 2.0μL, 共 5
份 ,分别点于同一硅胶 G薄层板上 , 按上述条件展开 、显色 、扫
描 ,测得峰面积积分值的 RSD=1.66%(n=5)。
3.3.5　稳定性试验:取对照品溶液点样 , 按上述条件展开显色
后 ,在 0、0.5、1、1.5、2、2.5、 3h, 分别进行扫描测定 , 结果峰面积
积分值的 RSD为 0.57%, 显示在 3h内稳定。
3.3.6　重现性试验:精密称取同一批号样品 5份 , 按 3.2.7项下
操作 ,测得样品齐墩果酸的 RSD=1.8%(n=5)。
3.3.7　样品测定:分别精密吸取药材供试液 2.0μL, 对照品溶液
1.0μL和 3.0μL, 交叉点于同一硅胶 G薄层板上 , 按上述条件展
开 、显色 、扫描测定 ,以外标二点法计算含量。
3.3.8　回收率试验:按加样回收法制备试样并按 3.2.7项下操
作 ,结果回收率为 98.7 %, RSD为 19.5%(n=5)。
检测表明 ,白花蛇舌草主含齐墩果酸等。
3.4　水线草总苷类化合物的检测 [ 6]
3.4.1　溶液的制备:称取水线草粗粉 30g, 加蒸馏水 300mL, 煮
沸 15min,过滤得水提液 , 药渣加蒸馏水 210mL,煮沸 15min, 过滤
得水提液 ,药渣加蒸馏水 150mL, 煮沸 15分钟 ,过滤得水提液 , 将
3次水提液合并 , 用醋酸乙酯萃取 3次得醋酸乙酯萃取液备用液
①,药渣以 50%乙醇回流提取 3次 , 得取水提液 , 再用醋酸乙酯
萃取 3次得醋酸乙酯萃取液备用液②, 合并备用液①、②, 浓缩
至适量。
3.4.2　苷类化合物检测:
3.4.2.1　FeCl3反应:取乙酸乙酯的萃取液于试管中 ,加 1-5%
FeCl
3
的乙醇溶液 1滴 ,溶液呈墨绿色。
3.4.2.2　Molisch反应:取乙酸乙酯的萃取液于试管中 , 加 10%
a-萘酚溶液适量 ,再沿试管壁加入 H2SO4数滴 , 生成紫红色物
质。
·70· 湖北中医杂志　　　　　　 　　　　　　　　　2011年第 33卷第 6期
　　检测表明 , 水线草含有苷类物质。
4　讨论
白花蛇舌草与水线草药材外观极相似 , 引起产地错收错销 ,
应予纠正。其次福建省部分地区历来就有将水线草与白花蛇舌
草相互混用习惯 , 然而在化学成分的含量测定中 ,两者所含的多
糖成分与氨基酸总量也存在着差异 , 且白花蛇舌草主含齐墩果
酸 、熊果酸等 ,水线草主含东叶草苷 、鸡屎藤次苷。 化学成分不
同 , 功效一定也有差异 ,故笔者认为水线草不能代替白花蛇舌草
药用。
参考文献:
[ 1] 　扬兆基.中药鉴定手册.第三分册 [ M].第一版.北京:科技文献出
版社 , 1994:92.
[ 2] 　殷昊.白花蛇舌草及其混淆种类的形态组织学鉴定 [ J] .中国中药
杂志 , 1989, 14(2):73.
[ 3] 　何敏.白花蛇舌草的研究与应用概况 [ J] .海峡药学 , 1994, (5):36
-39.
[ 4] 　中国药典一部 [ S] .1995:93;49.
[ 5] 　卢文彪.薄层扫描法测定白花蛇舌草中齐墩果酸含量 [ J] .时珍国
医国药 , 2001, 12(11):61-62.
[ 6] 　国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册 [ M] .第
一版.北京:人民卫生出版社 , 1996:93.
(收稿日期:2011-04-10　编辑:郑晓屏)
显微制片技术在碧桃干鉴定中的应用
夏四喜 ,陈兰君
(武汉市中医医院药剂科 ,湖北 武汉 430014)
关键词:碧桃干;显微制片技术;鉴定
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1000-0704(2011)06-0071-02
　　碧桃干系蔷薇科植物桃 Prunuspersica(L.)Batsch或山桃
P.davidiana(Carr.)Franch.的未成熟果实。 4 -6月摘取未成熟
果实 , 晒干。主产于江苏 、浙江 、安徽等地。酸苦 、平 、归肺 、肝
经。能止血敛汗 , 行气止痛 , 截疟。用于治疗盗汗 , 遗精 , 吐血 ,
疟疾 , 心腹痛及妊娠下血 [ 1] 。由于此类药材混淆 ,且无显微鉴定
的前例 , 故笔者对此作一鉴别实验 , 以填补该类药材显微鉴别之
空白 , 报道如下。
1　药材
1.1　药品
本实验中碧桃干原植物的生药由湖北天济中药饮品有限公
司提供 , 经武汉市中医医院药学部主任药师叶世登鉴定 , 为蔷薇
科植物山桃的干燥未成熟果实。经过笔者初挑选出大小均一 、
软硬一致的干燥碧桃干作为样品。
1.2　仪器
Nikon三目显微镜(YS100型)、酒精灯 、临时制片用具 、电脑
成像系统(JVCTK-C921 -EC型彩色摄像头 、EpsonEPL-
G200L型打印机)等。
1.3　试剂
水合氯醛试液 、稀甘油 、稀盐酸(纯学纯)、蒸馏水等。
2　方法
2.1　生药性状观察
本品果肉稍瘪 , 呈矩圆形或卵圆形 , 长 1.8-3cm, 直径 1.5
-2cm, 厚 0.9-1.5cm, 先端渐尖 , 呈鸟喙状 , 基部不对称 , 有的
存有少数棕红色的果柄;表面黄绿色 , 具网状皱缩的纹理 , 并密
被短柔毛;质坚硬 ,不易折断。破开 ,断面内果皮厚而硬化 , 腹缝
线凸出 ,背缝线明显。含未成熟种子 1枚。 气微弱 , 味微酸涩。
桃奴呈扁压状卵形 , 较小 , 表面毛茸更多。质软 , 断面内果皮较
薄 ,未硬化。以干燥 、实在 、坚硬 、色黄绿者为佳 [ 2] 。
2.2　临时制片
本品果肉较软 ,可直接用徒手切片制备临时制片。
取适量本品 ,大小均一者 , 在放置有硅胶干燥剂的干燥皿中
放置 24h。取大小适中者一粒 , 从果肉处切开 , 用滑手切片法 [ 3]
切下数张薄片 ,分别放在干净载玻片上滴加水合氯醛试液液化 ,
用稀甘油装片 ,即成。注意避免使切片卷曲重叠 ,否则不利于观
察。取其中一张薄厚均匀透化效果好的进行显微观察。
2.3　临时粉末制片
取剩下的碧桃干干燥品 , 粉碎 , 过 40目筛。取适量粉末于
干净载玻片上 ,用水合氯醛透化 ,微微加热 5min, 使其透化更完
全。最后滴一滴稀甘油 ,装片即成。
3　结果
3.1　横切面显微特征
镜下观察 ,本品毛茸众多 , 排列整齐。 外果皮层宽广 , 细胞
排列整齐紧实 , 皮层内含有大量螺纹导管束 , 常 6 -8个相连。
中果皮薄壁细胞 7 -8层 , 排列紧实。种子多干瘪。 果肉浅棕
色 ,厚约 2-3mm。
3.2　粉末显微特征
本品粉末棕黄色。非腺毛众多 , 单细胞 , 淡黄色 , 多自基部
断离 , 呈纤维状 , 微弯 ,长 33-612(-2700)μm,直径 17-40μm,
壁厚 ,表面有螺纹状角质层。内果皮细胞成片 , 呈尖圆形 、类方
·71·2011年 6月第 33卷第 6期Jun.2011.Vol.33, No.6 　　　　　　　　　　　　　　 湖北中医杂志HubeiJournalofTCM