全 文 ：现代生物医学进展 P r o M od ernB i o m ed i en i e 20 8 Vol .N 8 o . 233 1
分光光度法测水红花子中花旗松素含量 *
刘 东△ 林书玉 梁戈亮
(陕西师范大学物理学与信息技术学院 西安 7 10 0 6 2)
摘要 目的 :检测水红花子中花旗松素的含量 。 方法 : 采用紫外分光光度法 ,在常温 下 ( 25 ℃ )290 nl 处 , 对水红花子 乙醉提取物进
行吸光度测定 结果 :此方法线性范围 : 0 . 0 2一 0 . 01 叭 ,花旗松素浓度与吸光度线性关系: =y 住07 24 +x .0 0 7 ,产住9 986 ;平均回收率
为 9 9 . 3 7% , R SD二 0 . 89 7% 。 结论 : 紫外分光光度法测定水红花子中花旗松素含量操作简便 、 快速和准确度高 , 具有一定实用价值 。
关键词 :水红花子 ;分光光度法 ;花旗松素
中图分类号 : 2R 84 文献标识码 : A 文章编号 : 167 3 一62 73 ( 2 00 8 )0 2一0 33 1一 02
D e t e r r n in at io n o f ht e C o nt e n t o f T a x ifo lin in P r in e e s
一
fe a ht e r
Fur it b y S P e e tr o P h o t o m e ytr
L刀刀。唱 丈石勺hS u -y “ , 丈仍刀6 eG 刁应切 g
(oC (I 3gc 叮队外元5 朋d 加乃m j a lot n 几 c h no !( )gy ; hS a nxl 入乞用〕aj nU j~ 心 Xi 如 , 71 00` 2 , hS 口甜儿hC 勿a)
A B ST RA C T o bj e e tiv e : T o d e te mr i
n e t h e e o n t e n t o f ta x ifo l in in th e fur
e ut s Po ly go
n i o ir e n ta li s
.
M ehot ds
:
hT
e t e s t w va
e le n gt h w a s
s e t a t 2 90 n m a n d th e te m P e r a ut er a t 2 5℃ . R e sul st : T h e m e th o d w a s li n e a r w ith in ht e ar n g e o f o 刀0 2一O
.
o l gL/ (产0 . 9 98 6 ) . T h e a v e r a g e
r e e o v
eyT
o f th e a s s ay w a s 9 9 3 7%
, a n d R SD w a s o
.
9 16%
.
C o n e lus i
o n : T h e m e ht o d a PP e a rs t o b e s imP l
e , h i g h ly a e e u ar te an d e a n b e u s e d
fo r t h e de te mr i
n a t io n o f ta x ifo l in e o n te n t in fur
e ut s Po l y g o n i o ir e n at l is
.
K e y wo dsr
: P ir n e e s fe a th e r fur i t; Fur
e tU s P o ly g o n i o ir e n ta li s : S Pe c tr o Ph o to m e ytr ; T
a x ifo l in
C hin e s e ibL
r a yr C las s i五e iat o n : 2R 84 D o c切口ent e o de : A
为 t ie l e DI : 16 73一6 27 3 ( 20 08 )02一 033 1一02
月明吕
药水红花子 ( F ur e ut s P o ly go n um O ir e n at li s )为寥科植物 , 干
燥成熟果实 , 主产于黑龙江 、吉林 、 辽宁 、 内蒙古 、河北 、山西 、甘
肃 、 山东 、江苏等地 。 中国药典 197 年版开始收载。 水红花子及
原植物 , 主要含有黄酮类 、木脂素类和二苯乙烯类化合物。 已见
报道其主要黄酮类化学成分有榭皮素 、花旗松素 、 3 , 5 , 7一 二经
基色原酮等卜 ” 。 其中 , 花旗松素具有许多重要的生物学活性 ,能
够抑制和激活多种酶 ,从而产生不同的生理效应。 具有抗氧化 ,
抗辐射作用 。 工业上用做食品添加剂四 。 此外 ,还具有抗病毒和
抗肿瘤活性 。 目前 , 报道用薄层扫描法测定水红花子中花旗松
素的含量51[ 。 本研究采用紫外分光光度法测定了水红花子中花
旗松素的含量。 此方法简便 、快速 、准确 ,更易于普及 。
醇等实验所用试剂均为分析纯 ,实验所用水为二次蒸馏水。
2 实验与结果
2
.
1 标准曲线的绘制
2
.
1
.
1 标准溶液的制备 精密称取 2 5 m g 花旗松素标准品于
25 m l 容量瓶中 ,用甲醇定容 ,作为标准溶液储备液 。
2
.
1 2 测定波长的选择 取适量对照品溶液 , 在常温下 , 以甲醇
试剂为空白参比液 ,在 20 Onm ~6 0 n m 的波长范围内扫描 , 扫描
结果显示如下所示 (图 1 ) 。 该溶液在 2 90n m 波长处有最大吸收
峰 , 故选定该波长为测量波长。
材料和样品 1一 {
T U
一
180 0 紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责
任公司 ) , K Q32 00 B 超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公
司 ) , T B 一2巧 D 电子天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司 ) ,
JY 92 一 H超声波细胞粉碎机 (宁波新芝生物科技股份有限公
司 ) ,既 一52 A A 旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂 ) , JA 20 03 电
子天平 (中国上海精科天平 ;) 花旗松素标准品 (批号 : 0 703 19 ,
上海康九化工有限公司 ) , 水红花子 (产自陕西 ) , 甲醇 、 95 % 乙
作者简介 :刘东 , ( 198 3一 ) , 女 , 山东临清人 ,
陕西师范大学硕士研究生 ,从事环境与辐射生物物理研究
△通讯作者 :刘东 , E 一 m a i l : li u d o n攻 8 16@ 16 3￡ o m T e l : 13 4 6 5 9 5 5 5 54
(收稿日期 : 2 0 0 7一 0 8一3 0 接受日期 : 2 00 7一 0 9一2 3 )
图 l 花旗松素扫描曲线
F 19
.
1 S e an
n in g e u vr e o f t a x ifo l in
2
.
1
.
3 线性范围 分别精密吸取 住2 、 0 . 3 、 .0 4 瓜 6 、仓 8 、 1 . om l 标准
品溶液于 10m l 容量瓶中 , 甲醇定容 , 以溶剂作空白 , 在最大吸
收波长 29o n m 处用紫外可见分光光度计测各溶液浓度 , 得回
归方程 (图 2 ) 。
DOI : 10. 13241 /j . cnki . pmb. 2008. 02. 033
0
.
8 厂
瑟 0.6 卜 /
迢 0. 4 卜 /
侧 1 _ /, 二 0 . 0 72咤x + 0 . 0 07絮 0 . 2 卜 /
一 。 2 二 。 . 9 05 6
督 -一 l /
0
` ` es we e 一一- - -占一一-
0 5 1 0 1 5
浓度 e o n e e n t r a t i o n (略 / l )
图 2 花旗松素标准曲线
F i g Z S tan dadr
e
vur
e o f axt i fo li
n
以吸光度 ( y )为纵坐标 ,浓度 ( x )为横坐标 ,得浓度与吸光
度的关系式厂 0 072 4x +() .0 0 7 ,产0 . 99 86 (如图 2 ) 。 结果表明 :懈
皮素的浓度范围住 002 ~0 . 01 留L 内 ,其浓度 ( x) 与吸光度 ( y )线
性关系良好 。
.2 2 供试品溶液的制备
.2 .2 1 药材的处理 将水红花子干燥 ,粉碎 ,过 60 目筛 ,称取适
量于锥形瓶中 ,加人适量石油醚 , 60 ℃ 回流脱脂 h2 ,倾去石油
醚 ,并挥去药材残余石油醚 ,加人 20 倍量 80 %酒精 ,浸泡 2 h0 ,
超声振荡 2 次 ,每次 3Om in ,过滤 ,合并两次滤液 ,旋转蒸发至
少量 ,甲醇定容作为供试品。
.2 2
.
2 提取仪器的选择 精密称取 5 份水红花子各 29 , 按照 ”
1
.
1
” 下方法浸润 ,脱脂后 ,分别置于超声清洗器与相同功率下
冰水浴超声细胞粉碎机下振荡 IOm in 、 Zom i n 、 3om i n 、 4om i n 、
50 m in
。 过滤 ,将滤液旋转蒸发后 , 甲醇定容 ,分别测其吸光度
(表 l ) 。
表 1 超生清洗器与超声细胞破碎机提取效果的比较
Tab le 1 C o m Pan
s o n o f e x atr
e t io n e fe
e t b y tw o d ife
r en t u lt ras o n ie
m a e h i n e s
nI s t ru m en ts T im e ( m i
n
) A b
so
rb 即 e y
U ltr as o n i e e le an i
n g d e
v ie e 10 0 4 0 1
20 0
`
4 3 3
3 0 0
.
4 4 0
4 0 0 4 5 8
5 0 0
.
4 6 8
U ltr as o n i e e e l ls Sm韶h e r 10 0 .3 8 1
2 0 0 4 0 1
3 0 0
,
4 5 6
4 0 0石4 0
5 0 0石7 9
由于采用冰水浴降温 , 超声细胞破碎机在实验的 20 分钟
内提取效果低于超声波清洗器。 但是在相同时间内 ,但是由实
验结果可知 ,前者对样品的作用效果明显高于后者 ,并且在 30
分钟后 , 花旗松素的得率高于超声波清洗器 。 故选用超声细胞
破碎机为提取装置 。
.2 3 精密度实验
取同一样品按 “ .2 2 . 1” 以下方法进行处理 , 连续进样 5 次 ,
计算 R s D闭 3 % ,提示此方法精密度较好 。
.2 4 重复性实验
精密称取样品 5 份 ,按 ’ 2 2 . 1” 方法进行处理 ,配制 ,测吸
光度 ,结果如表 3 ,计算 sr =d 2 . 6 % ,说明此方法重复性较好 。
.2 5 稳定性实验
配制适量浓度对照品溶液 ,在室温 ( 25 ℃ ) ,每隔 .0 h5 测其
吸光度 ,连测 h3 , 计算 R SD =l . 0 1% ,说明此物质在室温下 , h3
内基本保持稳定 。
2
.
6 加样回收率实验
精密量取已知含量样品液 1m l( .6 243 m岁l )加人标准花旗
松素对照品溶液 ( 14 .4 06 m留1) lm l , 甲醇定容至 5m l , 同前样品
测定方法操作测定吸光度 ,测得结果如下 (表 5 ) 。 由结果可知 ,
本法的回收率较高 ,表明测量准确度较高。
表 2 回收率实验结果
T a b le 2 eR su lst
o
f er
e o v
eyr
样品量 加标量 测得量 回收率 平均回收 相对标准
Sam p l
e
dA d
e d F o un d R
e e o v e yr 率vA e r age 偏差 RS o
3 1
.
2 1 5 14
.
4 0 6 2 0
.
79 0 10 0
.
1 36% 99
.
3 7% 0
.
8 9 7%
2 0
.
5 14 9 8名0 4%
2 0 .8 0 8 1 00
.
2 1 9%
2 0 6 6 9 9 9
.
5 5 0%
2 0
.
3 7 6 9 8
.
13 8%
2
.
7 样品含里的测定
精密称取样品粉末三份 ,按 “ .2 2 ” 下方法处理 ,配置 ,测吸
光度 , 计算的含量分别为 5 . 4 64 m留g , 5 . 738 m留g , 5 . 125 m岁g ,平
均含量 5 .科 Zm留go
3 讨论
花旗松素在调节脂代谢 、抗脂质过氧化 、抗病毒 、 抗肿瘤等
医学领域和食品添加剂领域应用前景广阔。 但是查阅文献仅有
极少数药材含有花旗松素网 ,故专属性较强 ,因此可以作为水红
花子的标准物质对其进行质量控制 ,测定花旗松素的含量有一
定实际意义。
本实验将花旗松素对照品溶液置于 60 ℃水浴锅内测其吸
光度 ,结果在 h2 内数值基本没有变化 ,说明在短时间内 ,花旗
松素在该温度下稳定性较好 , 故可采用旋转蒸发回收溶剂 ,不
会影响花旗松素含量测定 。 供试品溶液的制备受提取方法 、 乙
醇浓度 、料液比及时间等因素影响较大 ,本文中水红花子供试
品溶液的制备工艺条件尚待优化 。 与薄层色谱法对比 ,紫外分
光光度法简单快捷 ,操作简单 ,且有良好的重复性 ,精密性 , 回
收率高 , 更易于普及。 并且 ,本方法所用试剂比薄层扫描法所用
相比毒性小 ,更安全。
参 考 文 献 ( Re fe er n e e s )
[ l ] Zh an g J i
一
hz
e n , L in C h e n g一i , L in M ao , e t al . S ut d ie s o n ht e e h e m ie a l
c o n s t iut e n t s o f P o lyg
o n u m o ir en at l
e
[J ]
.
C h in e s e T r a d i t io n a l an d
H e br
a l D ur g
s , 19 9 0
,
2 1
,
( 8 )
: 7 1 ( ih C h i n
e s e )
【2 ] Y an g G u o 一 x u n , S o n g L e i , L i uK i一 lia n , e t a l
.
S ut d ie s o n th e e h
em ie a l
e o n s t i ut e n t s o f P o lyg o n um
o ir en t
a le [J ]
.
C h in e s e Ph
amr
ac e u t ic a I J o u -r
n a l
,
2 0 0 3
,
3 8 ( 5 )
: 3 3 8 1( I
n C h in e s e )
「3 ] Z he n g S h an g 一hz e n , Wan g D in 兮yo n g , L iu W u 一 x ia , et a l . S tu d ie s o n ht e
fl a v o n o i ds o f fru i t
s o f P o ly gn
u m o ir e n at le L [J ]
.
J o u rn
a l o f N o rt hw
e s t
N o rm
a l U n iv e r s ity
,
19 9 9
,
3 5 ( 4 )
: 4 2 1 ( I n C h in e s e )
(下转第 3 2 0 页 】
i nM o de rni Bo me i de i ne 2 008 V心 l旦 丛遇
肝细胞表面的低密度脂蛋白 (L D) L受体的合成 ,从而增加对血
浆 L D L 的摄取和分解代谢 ,减少斑块内的脂质沉积 ,延缓甚至
逆转斑块的形成。 ②阿托伐他汀的非降脂途径 ,主要包括通过
借助影响炎症反应因子 ,如 C 一反应蛋白( CRP ) 、超敏 C 反应蛋
白( h s一 c RP ) 、 e N O S 、及抑制 LD L 的氧化等 ,这些炎症因子参与
了急性冠状动脉综合症的发生 、发展 ;改善内皮血管功能及抑
制动脉平滑肌细胞增殖等 。 本研究结果发现与正常组相比 ,急
性冠状动脉综合症患者治疗 8 周后 , 常规治疗组 中患者的
h s
一
C即 、 T C 、 DL L 一C 的水平 明显下降 ( P < 0 . 0 5 ) 、 而 T G 和
HD L
一
C 的水平虽有变化 ,但差异无统计学意义 (P>0 . 05 ;) 阿托
伐他汀组中患者的 ha 一C即 、 T C 、 T G 、 L D L 一C 的水平明显下降 ,
差异有统计学意义 ( P 0< .05 ) 、而 HD L一 C 的水平明显升高 ( P0< .
05 )( 表 l) 。 但与常规治疗组相比 ,治疗 8 周后 , 阿托伐他汀组
中患者的 hs 一 C即 、 T C 、 T G 、 L D L一 C 和 HD L一 C 的水平变化差异
均有统计学意义 ( P < .0 05 ) (表 1) 。 这与文献报道的基本一致8o[]
本研究发现不同剂量 ( 20 m酬 、 40 m留d 和 80 m留d) 的阿托
伐他汀治疗 8 周后患者的 hs 一CRP 、 T C 、 T G 、 L D L 一C 的水平相应
的均下降 , 而 HD L一 C 的水平均升高 , 差异均有统计学意义
( p < 0刀5 ) (表 l ) 。 在比较三个剂量 20 n l留d 、 4 0m留d 和 80 m留d
的阿托伐他汀治疗效果变化态势时发现 , 40 m留d 组的治疗效
果相对最好 (p < 0 . 05 ) ;虽然 s o m留d 组的疗效比 20 mg/ d 的要好
( P < 0 05 )
,但与 40 m留d 组相比无明显差别 ( >P .0 05 ) 。 这与国外
文献报道的有所差异 9I] 。 导致出现的原因 ,这可能与人种及饮食
相关。 同时 ,提示治疗我国汉族人种中急性冠状动脉综合症时 ,
治疗效果并不与阿托伐他汀的剂量呈正比 ,成年人 日服剂量效
果相对较好的为 40 m留d 。 本研究结果显示 :急性冠状动脉综合
症患者的发病的风险度 /程度与患者年龄的呈正相关 ;但治疗
效果与年龄基本呈负相关 (表 3) ,因此老年人是急性冠状动脉
综合症相对高危人群且治疗效果相对较差 ,这可能是与肌体功
能的降低相关 , 因此 ,老年人应该注意饮食 , 进行适量锻炼 , 同
时定时的进行身体检查十分必要 。
总之 , 急性冠状动脉综合症是一类十分复杂且高危性疾
病 。 目前治疗方法与治疗药物也有许多种 ,本研究发现采用适
当剂量 (成年人 40 m留d )的阿托伐他汀进行治疗对调节患者的
hs
一
CRP
、
T C
、
T G
、
L D L
一
C 和 HD L一 C 的水平均可以收到较好的
疗效 ,且安全性相对也较高 ,值得推广 。
参考文 献 ( R e fe nr e e s )
【l ] S e v e r PS , D ah lo f B , P o hu e r N R , e t a l . p er v e n t io n o f e o or n aI’y an d
s t r o ke e v en t s w iht a t o vr a st a t i
n in hyP e rt e n s iv e Pat ie n t s hw o hva e va
-
e ar g e o r lo w e -r th an
一 a v e ar g e e h
`) le st er l
e o n e e n tr at i o
n ,
in th
e
nA g l
o
一
S e an di n a
v ia n C a dr ia e o ut e o m e s T ir a l
一
L IP id L o we ir
n g A n n (A S
-
C O T
一
II A ): a m
u ih e e n tr e r an d e
, m iez d c o n t or le d t ir a l 【J ]. L a n c e t ,
2 0 0 3
,
36
: 114 9
一
1 15 8
[2 ] eL a AP
,
M e T a v is h D
.
A t o vr as tat i
n人 re v ie w o f it s Pharm a e o lo gy an d
ht earP
e u t i
e p o te n t ia l i
n th e m an age m
e n t o f hyP e
r liP id e m ias [ J ]
·
D ru g s
,
1 99 7
,
53 ( 5 )
: 82 4
一
8 4 7
[3 ] A
.
M o ham m ad i
,
N
.
R eazn
o ur
.
A s atb ility
一
in d ie a t i
n g h ig h P eorf rm an e e
liq u id ehor
m at o『 aP h ic (HP LC ) as s ay of r t h e s im u latn e o us d e t e rm i-
n at io n o f aot vr a s t a t l
n
an d am l
o d i Pi n e in e o m m e cr ial atb l
e t s [J ]
·
J o ur
·
n a l o f C h r o m at o g r a Ph y B
,
2 0 0 7
,
84 6
: 2 15
一
22 1
(4」irT o nA , d eM at M , J u k e m aW , et a l
.
nA
t iat h e or
se le r o t i e e fe C t o f am
-
lo d iPi
n e , a lo n e an d in c om b in at io n w iht a ot vr as t at i n
,
in AP O E 3
一
L e i
-
d
e rt h/ C RP t r a n s g
e n ie m i e e闭. J C adr io v a se Pharm ac o l, 2 0 0 6 ,4 7: 89一 9 5
[5 ] B
o n e t i PO
,
L e rm an OL
,
N ap
o l i C
,
et a l
.
Sat i
n e
fe e t s b
e
yo
n
d liP id
lo w e ir n g aer ht
e y e lin ic a l ly er l
e v ;m t[ J ]
.
Eur H e ar’t J , 2 0 0 3 , 2 4 : 2 2 5 一2 4 8
[6」T o u so u lis D , nA t o n ia d e s C , K a t s i V , e t a l . Tl l e imP a c t o f e ar ly a d扣 in -
i s t r a t l o n o f lo w
一
do
s e a t o vr a s t a t i幻 etr a tm e
n t o n in fl a m m at o yr Pr o e e s s
,
i n P at ie n ts w it h un st ab l
e
an gm
a an d l
o w e h o le s
一 t e or l le
v e l [刀. In t J
C a r d io l
,
2 00 6
,
10 9: 4 8
一
52
[7」P e ars o n TA . M en s a b GA , A le x an d e r RW , e t a l . M a r kers o f in fl am m a -
t io n an d e adr i
o v as e n lar d i
s e
as e aP Pli
e at io n t o e lin i c a l an d Pub lie
h e a lht Pacr
t i e e : a s ta t e m e n t of r h
e a lth eare P
r o fe s s i
o n a ls ofr m ht e e
e n -
t e ls of r d i
s e as e e o
n tr o l an d P re
v e n t io n an d th e A l l l e ir e an H e art A
s s o -
e
ia t i
o n [J ]
.
C ire u l
a t io n
,
2 0 0 3
,
10 7 : 4 99
一
5 12
[8 ] Yam ad T
,
N o d eK, M i n e T
, e t a l
.
A t o vr
a s t a t in th e arn y as
s o e iat e d w iht
im Por
v em e n t i n le ft v e n itr e u lar re m o d e lin g In a e a se o f id i o Pat h ie d i
-
late d
e
adr i
o m y o P a th y【J ] . Am J M e d S e i , 2 0 0 6 , 3 2 : 3 6 1一 3 7 1
[9 ] N i ss e n SE
,
Tuz ￡ u EM , S e h o e n ll ag e n p , e t a l
.
E fe e t o f in t e
n s iv e c o m
-
pare d w ith m o de art
e lip id
一
lo w e ir n g th e
r a p y o n p or gre
s s io n o f e o r o
-
n a ry a ht oer
s e
l
e
or
s
is
: A arn do
n i ize d e o n otr l l
e
d itr a l [,]
. 」AM产 ,
2 0 0 4
,
2 9
: 10 7 1
一
10 8 0
(上接第 33 2 页 )
【4 ] Qiao H au , 为 e J in , hZ a n g X ia o 一y l l n , e t a l . hT e b io lo g ie a l a c t iv ity an d
aP P lie a t io n o f t a x i of lin 【J ]. C h in e s e T r a d i t io n a l an d H e ht a l D r u g s ,
2 0 0 3
,
3 4 ( 8 )
:
ap P
e n d ix l s
一
16
[5」H e J in g , hZ a i Y an 一un . D e et mr in a t io n o f th e tax i fo l in e o n t e n t in th e f
ur
e ut s P o ly g o n i ir e n t a lis b y T LC
一 s e
axm i
n g 【J ] . J o u nr a l o f L ia o n i n g
C o lle ge o f Tadr i
t io n a l C h in e s e M e d i e in e
,
2 0 0 5
,
7 ( 6 )
: 6 2 2
一
6 2 3 (nI C h i
-
n e s e
)
6[] 肖培根主编 .新编中药志「M l.第 l 版 . 北京:化学工业出版社 , 20 02 年
X ia o P e i
一
g e n
.
N e w C h in e s e T r a d i t io n a l H e ht D ie t io n ary [M ]
.
F ir s t
Ed iit o n
.
B e ij i
n g : C h e m ie a l 玩du s tI’y rP e s s , 2 0 0 2