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HPLC法同时测定桂圆肉、皮、核不同构型维生素E含量



全 文 :HPLC法同时测定桂圆肉、皮、核不同构型维生素E含量
修金月,阿依江·赛勒汗,赫彬彬,姜 波*
(大连民族大学生命科学学院,辽宁大连 116600)
摘 要:以石油醚为溶剂利用索氏提取法提取了桂圆果肉、果核、果皮的油脂。油样品用正己烷溶解,用甲醇定容,其中正己烷含量
为 20%(v/v)。用 Hypersil ODS2 5μm色谱柱,甲醇为流动相,对所提油脂中α、γ(β)、δ3 种构型维生素 E(VE)含量进行测定。
试验结果表明,在 204nm波长下,α-维生素 E(VE)、γ-维生素 E(VE)、δ-维生素 E(VE)在 0~200μg/mL范围内与峰面积有良好
的线性关系,标准曲线相关系数 r均大于 0.9978,α-VE、γ-VE、δ-VE加标平均回收率分别为 98.07%、97.98%、98.92%。
关键词:桂圆果核;果肉;果皮;3 种构型维生素E(VE);HPLC法
据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
桂圆购于大连超市。
标准对照品:α- 维生素 E(VE)、γ- 维生素 E
(VE)、δ-维生素E(VE)购于Sigma公司;甲醇为色谱
纯;正己烷为优级纯;0.45μm微孔滤膜。
LC-20AB液相色谱仪:日本岛津公司,其中包括
SPD-20A 紫外检测器,CTO-20A 柱温箱,DGU-20A3
脱气机,LCsolution工作站;色谱柱:大连依利特分析仪
器有限公司;B5200S-DT型超声洗器:上海必能达超
声有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1 标准溶液的配制。分别准确称取标准对照品
α-VE、γ-VE、δ-VE各5mg于不同的5mL容量瓶中,
分别用1mL正己烷溶解,然后用甲醇定容。分别从上
述各标准溶液中取0.2、0.4、0.6、0.8、1mL于5mL容量
瓶中,补加正己烷使各容量瓶中含正己烷为1mL,然后
用甲醇定容,得α-VE、γ-VE、δ-VE的混合标准溶液
系列。分别过0.45μm微孔滤膜(油系)。
1.2.2 油脂的提取和精制。称取10g已粉碎干燥样品于
索氏提取器中,加入150mL30~60℃石油醚,回流6h,
提取液旋转蒸发至无溶剂,得到各油脂。
1.2.3 油样品的处理。准确称取0.05g油样品(精确至
0.0001g),加入1mL正己烷溶解,然后加入甲醇定容至
5mL,摇匀。分别过0.45μm微孔滤膜。
1.2.4 色谱条件。Hypersil ODS2(5.0mm,25cm,5μm)
色谱柱,流动相为甲醇,流速:0.8mL/min,进样量
20μL,检测波长为204nm,柱箱温度为30℃。
1.2.5 VE的测定。定性是依据α-VE、γ-VE、δ-VE标
准样品的保留时间的确定,由于β-VE和γ-VE的保
留时间一致,所以所测样品结果为β-VE和γ-VE之
和。定量分析采用外标法。2.2~2.5的试验均按照1.2.4
的色谱条件测定。
2 结果与讨论
世界上很多国家都有种植桂圆,尤其是亚热带地
区。中国更是桂圆的原产国和最大生产国,种植面积和
产量分别占世界70%和50%[1]。桂圆的肉具有补益心
脾,养血安神,抗衰老,抗癌等功效[2];果核具有止痛,理
气化湿,降血糖等作用[3];叶可治感冒、痢疾、痔疮等;
根、花、皮均可入药,因此具有广泛的应用价值。桂圆,
供生食或加工成干制品。肉、核、皮及根均可作药用,有
补心脾,益气血,美容及延年益寿的功效[4]。除此之外还
有极高的营养价值,对全身都有补益作用,尤其是脑细
胞,可增强记忆,消除疲劳[5]。随着桂圆果肉多种生理功
效保健机理逐渐被人们认识,已被人们推崇为“果中圣
品”。因此桂圆肉被列为药食同源的品种之一。但是,对
桂圆果肉中的活性成分研究较少,且缺乏系统的研究,
尤其是果核和果壳,研究更少。作为药品《中国药典》中
只对其水分、灰分、性状、浸出物量有明确规定,对其有
效成分并无说明。
维生素E(VE)是一种脂溶性维生素,其水解产物
为生育酚,是最主要的抗氧化剂之一。溶于脂肪和乙
醇等有机溶剂中,不溶于水,对热、酸稳定,对碱不稳
定,对氧敏感,对热不敏感,但油炸时VE活性明显降
低。生育酚能促进性激素分泌,使男子精子活力和数量
增加;使女子雌性激素浓度增高,提高生育能力,预防
流产,还可用于防治男性不育症、烧伤、冻伤、毛细血管
出血、更年期综合症、美容等方面。近来还发现VE可抑
制眼睛晶状体内的过氧化脂反应,使末梢血管扩张,改
善血液循环,预防近视眼发生和发展。VE有α、β、γ、
δ4种不同构型。在常温下,生物活性为α>β>γ>
δ。研究表明,α-生育酚生物活性是γ-生育酚活性
的10倍[6]。
本文对桂圆果肉、果核、果壳中不同构型VE含量
的研究,旨在不仅揭示桂圆果肉、果核、果壳中不同构
型VE含量,而且为果核、果壳的开发利用提供重要依
基金项目:大连民族大学大学生创新科研项目。
作者简介:修金月(1993-),女,本科生,研究方向:生物成分分析。
*:为通讯作者。
2015年第11期 现代园艺 试验研究

DOI:10.14051/j.cnki.xdyy.2015.21.003
2.1 得油率
按照1.2.2的方法得桂圆果肉、果核、果皮的得油
率见表1,所提油脂通过加压过白土填料的柱子,以实
现所提油样品的精制。
表1 索氏提取法中样品所得油脂率
样品
样品质量
(g)
瓶重
(g)
装油后瓶
重(g)
油质量
(g)
得油率
(%)
桂圆果肉 10.0000 16.0289 16.3541 0.3252 3.25
桂圆果核 10.0000 17.9310 18.2143 0.2833 2.83
桂圆果皮 10.0000 20.6799 21.7998 1.1199 11.20
2.2 样品溶剂
α-VE、γ-VE、δ-VE标准样品以及所提油样品在
甲醇中的溶解度较差,在正己烷中溶解度较好。为了使
标准样品和油样品能很好溶解,先用正己烷溶解,然后
用甲醇定容,得到了清澈透明的标准样品和样品溶液。
在配制标准溶液及样品溶液时,不是仅用正己烷处理
样品,是考虑到正己烷的挥发性较高,用甲醇以减少样
品溶剂的挥发,使定量分析准确。
2.3 标准曲线
按1.2.1配制的α-VE、γ-VE、δ-VE标准溶液浓
度、标准曲线线性方程及相关系数见表2。
表2 标准溶液、线性方程和相关系数
维生

标准溶液浓度(μg/mL) 线性方程
线性相关
系数r
α-E 40 80 120160 200y=112723x-263042 0.9978
γ-E 40 80 120160 200y=89458x-171753 0.9985
δ-E 40 80 120160 200y=108273x-414145 0.9978
α-VE、γ-VE、δ-VE标准样品的色谱图见图1。图
1 中α-VE、γ-VE、δ-VE 标 准 溶 液 浓 度 均 为
40μg/mL。
图 1α-VE、γ(β)-VE、δ-VE混合标准样品的色谱图
2.4 方法的准确性
为了考察方法的准确性,用果肉做回收率实验。在
3份样品溶液中分别加入3个不同浓度的标准样品,
测定的回收率见表 3。由表 3 可见,α-VE、γ-VE、
δ-VE 加 标 回 收 率 在 97.37% ~98.71%、97.60%
~98.30%、98.73%~99.06% 之间,α-VE、γ-VE、δ-VE
平均回收率在97.98%~98.92%之间。
2.5 稳定性实验
用3种构型VE的混标做稳定性试验,试验结果见
表3。由表3可见,δ构型VE在48h内基本是稳定的,
当达到72h时,峰面积明显减小;α和γ构型VE在
72h时,峰面积基本不变。因此,α-VE、γ (β)-VE、
δ-VE制成的标准样品溶液和样品溶液同时检测
α-VE、γ(β)-VE、δ-VE应在48h内完成。
表3 样品回收率试验结果
维生素
样品中维
生素量
(μg/mL)
加入标准

(μg/mL)
理论值
(μg/m
L)
测定值
(μg/m
L)
回收

(%)
平均回
收率
(%)
α-VE
13.97 10 23.97 23.66 98.71
98.0714.21 20 34.21 33.31 97.37
14.06 30 44.06 43.24 98.14
(β)-VE
7.08 10 17.08 16.67 97.60
97.987.12 20 27.12 26.66 98.30
7.25 30 37.25 36.52 98.04
δ-VE
6.03 10 16.03 15.88 99.06
98.925.94 20 25.94 25.61 98.73
5.88 30 35.88 35.51 98.97
表3 稳定性结果试验
VE 时间 α-VE γ-(β)VE δ-VE
测得的峰面积
0h 4947382 4045670 6081867
24h 5166893 4166037 6184769
48h 5068907 4106608 5918654
0~48hRSD(%) 2.17 1.47 2.21
测得的峰面积 72h 4971679 3960887 5335823
0~72h峰面积平均值 5038715 4069801 5880278
0~72hRSD(%) 1.99 2.15 6.45
2.6 样品测定结果
各油中α-VE、γ (β)-VE、δ-VE3次测定结果见
表4。由表4可见,桂圆果皮中VE含量高于果肉和果
核,果肉中VE含量高于果核。
表4桂圆中α-VE、γ(β)-VE、δ-VE含量测定结果(mg/g)
维生素 α-VE γ-(β)VE δ-VE VE之和 VE平均和
桂圆果肉
13.97 7.08 6.03 27.08
27.1814.21 7.12 5.94 27.27
14.06 7.25 5.88 27.19
相对标准偏差(%) 0.86 1.24 1.27 0.35
桂圆果皮
9.11 57.40 4.87 71.38
71.288.97 57.29 4.91 71.17
9.04 57.24 5.01 71.29
相对标准偏差(%) 0.77 0.14 1.46 0.15
桂圆果核
0.71 8.73 11.73 21.17
21.260.68 8.81 11.77 21.33
0.74 8.80 11.84 21.38
相对标准偏差(%) 4.23 0.50 0.47 0.51
3 结论
试验结果可见,就α-VE的含量而言,果肉明显高
于果皮和果核,且果核中含量不到1mg/g。但是,桂圆
试验研究 现代园艺 2015年第11期

HPLC法同时测定木瓜肉、皮、核不同构型维生素E含量
赫彬彬,修金月,阿依江·赛勒汗,姜 波*
(大连民族大学生命科学学院,辽宁大连 116600)
摘 要:以石油醚为溶剂,用索氏提取法提取了木瓜的皮、肉、核的油脂。油样品先用正己烷溶解,再用甲醇定容,其中正己烷含量
为 20%(v/v),用 Hypersil ODS2 5μm色谱柱,甲醇为流动相,对所提油脂中α-维生素 E(VE)、γ-(β)维生素 E(VE)、δ-维生素
E(VE)含量进行检测,结果表明,在 204nm波长下,α-VE、γ-VE、δ-VE,在 0~200μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,标准曲
线相关系数 r均大于 0.9978,平均回收率分别为α-VE 98.55%、γ-维生素 E 97.96%、δ-VE 98.49%。采用高效液相色谱法测定木
瓜肉、皮、核中α-VE、γ-(β)VE、δ-VE含量方法简单准确。
关键词:木瓜肉;木瓜皮;木瓜核;HPLC;不同构型维生素 E(VE)
育酚活性的10倍[6,7]。
本文用高效液相色谱法同时测定了木瓜皮、木瓜
肉、木瓜核中α-VE、γ-(β)VE、δ-VE、含量。本研究获
得的相关数据揭示了木瓜果皮、果肉、果核中α-VE、
γ-(β)VE、δ-VE含量水平,提供了木瓜果皮、果肉、果
核α-VE、γ-(β)VE、δ-VE含量的含量差异。本文旨在
采用高效液相色谱法测定木瓜皮、肉、核不同构型VE
含量,为木瓜的综合利用和研发拓展思路。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 待测样品:木瓜皮、木瓜肉、木瓜核。
1.1.2 标准对照品:α-VE、γ-VE、δ-VE。
1.1.3 主要试剂:甲醇为色谱纯,正己烷为优级纯,
45μm微孔滤膜,石油醚。
1.1.4 主要仪器:LC-20AB液相色谱仪(LC-20AB液相
色谱仪,其中包括SPD-20A紫外检测器,CTO-20A柱
温箱,DGU-20A3脱气机,LCSolution工作站),日本
岛津公司;色谱柱,大连依利特分析仪器有限公司;旋
转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂;恒温水浴锅,上海亚
荣生化仪器厂;电子分析天平,上海奥豪斯公司。
1.2 试验方法
1.2.1 标准溶液的配制。分别准确称取标准对照品
α-VE、γ-VE、δ-VE各5mg于不同的5mL容量瓶中,
分别用1mL正己烷溶解,然后用甲醇定容。分别从上
述各标准溶液中取 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL 于 5mL 容
量瓶中,补加正己烷使各容量瓶中含正己烷为1mL,然
后用甲醇定容,得α-VE、γ-VE、δ-VE的混合标准溶
液系列。分别过0.45μm微孔滤膜(油系)。
1.2.2 油脂的提取和精制。称取10g已粉碎干燥样品于
索氏提取器中,加入150mL30~60℃石油醚[12,13],回流
6h,提取液旋转蒸发至无溶剂,得到各种油脂。
1.2.3 油样品的处理。准确称取0.05g油样品(精确至
0.0001g),加入1mL正己烷溶解,然后加入甲醇定容至
5ml,摇匀。分别过0.45μm微孔滤膜。
1.2.4 色谱条件。HypersilODS2(5.0mm×25cm×5μm)
木瓜为蔷薇科植物, 属落叶灌木贴梗海棠的干燥
成熟果实,又名贴梗海棠,主产于安徽、山东、浙江等
地。木瓜作为一种常用中药,有舒筋、健脾开胃、舒肝止
痛之功效,富含维生素C(Vc)、维生素B(Vb)以及钙磷
物质,其中多酚类物质既有流感病毒抗性[1]。因此,木瓜
是我国集药用、食用、观赏等多重价值为一体的水果,
具有重要的应用价值和广阔的应用前景。目前,对木瓜
的活性成分、药理成分研究颇多,但迄今未见HPLC法
同时测定木瓜果皮、果肉、果核中维生素E(VE)含量的
报道。
维生素E(VE)是脂溶性的化合物,在植物油中均
有存在。VE又称为生育酚,对人体有相当广泛的生理
功能,可以促进血管扩张,还能促进纤维素溶解,改善
人体微循环,并对肿瘤的生长有好的抑制作用。在生物
体内可保护细胞膜的稳定性,从而具有抗衰老、保护皮
肤、防止习惯性流产等作用[2-5]。VE有 α-、β-、γ-、
δ-4种不同的结构形式。在常温下,生物活性为α>
β>γ>δ。研究表明,α-生育酚生物活性是γ-生
基金项目:大连民族大学大学生太阳鸟科研项目。
作者简介:赫彬彬(1993-),女,本科生,研究方向:生物成分分析。
*为通讯作者
果肉和果核的 VE 总和相接近,分别为 27.18mg/g、
21.26mg/g,而桂圆果皮中 VE 总 含量最高,达
71.28mg/g。由此可见,桂圆果核和果壳有一定的利用
价值。 (收稿:2015-09-21)
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2015年第11期 现代园艺 试验研究

DOI:10.14051/j.cnki.xdyy.2015.21.004