全 文 ：HPLC法同时测定三七花中鸟苷和腺苷的含量
张冰 ,陈晓辉 ,毕开顺＊
(沈阳药科大学药学院 , 沈阳 110016)
摘要　目的:建立 HPLC法同时测定三七花中鸟苷和腺苷的含量。方法:采用 DikmaODS(200 mm ×4.6 mm, 5 μm, 迪马公
司)色谱柱 ,乙腈 -水二元梯度洗脱 , 流速 1.0 mL· min-1 , 检测波长 254 nm, 柱温 30 ℃。结果:鸟苷和腺苷分别在 17.2 ～
103.2 μg· mL-1(r=0.9995, n=6)和 15.6 ～ 93.6 μg· mL-1(r=0.9997, n=6)范围内呈良好线性关系;平均回收率分别
为 97.6% ～ 99.7% (n=3)和 98.1 ～ 99.2% (n=3)。 结论:本测定方法简便 、快速 、准确 , 为三七花质量评价提供了可靠方
法。
关键词:三七花;鸟苷;腺苷;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2009)12-2113-03
HPLCsimultaneousdeterminationofguanosineandadenosine
contentsinflowerbudsofPanaxnotoginseng
ZHANGBing, CHENXiao-hui, BIKaishun
(SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
Abstract　Objective:AnRP-HPLCmethodwasdevelopedtodeterminethecontentsofguanosineandadenosine
simultaneouslyinflowerbudsofPanaxnotoginseng.Methods:TheanalysiswasperformedonaC18 columnwith
gradientelutionofacetonitrileandwaterataflowrate1.0mL· min-1.TheUVdetectionwavelengthwas254nm,
andthecolumntemperaturewassetat30 ℃.Results:Thelinearrangewas17.2-103.2μg· mL-1(r=0.9995,
n=6)forguanosineand15.6-93.6 μg· mL-1(r=0.9997, n=6)foradenosine.Theaveragerecoveriesof
guanosineandadenosinewere97.6%-99.7% (n=3)and98.1%-99.2% (n=3), respectively.Conclusion:
Themethodwasfoundtobesimpleandaccurateforsimultaneousanalysisofguanosineandadenosineinflower
budsofPanaxnotoginseng, andprovidedareliablewayforevaluatingthequalityofit.
Keywords:flowerbudsofPanaxnotoginseng;guanosine;adenosine;RP-HPLC
　　三七 [ Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen]
是我国著名的药用植物 ,主产于云南和广西部分地
区 ,药用部位主用根及根茎 ,具有化瘀止血 、活血定
痛 、防治心脑血管疾病 、提高机体免疫力等多种药理
活性[ 1] 。三七花属于三七的地上部分 ,作为高血压
病人常用的保健和治疗用药 ,历时已久 ,效果颇佳 。
目前 ,关于三七的研究大都集中在其块根 ,块根也是
现阶段三七产业的基本原料药物。三七花作为民间
治疗高血压 、咽痛音哑 、津伤口渴等症的药材 ,由于
使用区域受限 ,使其药材资源的经济价值未被充分
利用 ,因此研究也较为薄弱 [ 2 ～ 3] 。至今为止 ,三七中
的核苷类成分尚未见文献报道 。而核苷类成分是生
物细胞维持生命活动的基本组成元素 ,参与 DNA代
谢过程 ,具有抗肿瘤 、抗病毒 、基因治疗等多种生物
活性 。腺苷作为一种天然成分 ,具有抗凝血 、扩张冠
状动脉 、松驰支气管平滑肌 、镇静中枢神经 、心肌保
护 、镇痛 、抗炎等作用 [ 4] 。根据文献报道的相关核
苷类化合物 HPLC含量测定方法 [ 5 ～ 8] ,本文最终确
立了鸟苷和腺苷这两种核苷类化合物在三七花中的
RP-HPLC含量测定方法 。
1　仪器与试剂
ShimadzuLC-10AT高效液相色谱仪 , SPD-
10A紫外检测器 , As3120B超声波清洗器:频率 55
kHz, AB135-5十万分之一天平(METTLERTOLE-
—2113—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)
＊ 通讯作者　Tel:(024)23986016;E-mail:bikaishun@yahoo.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2009.12.021
DO仪器有限公司), ANASTARChromatographyData
System色谱工作站;鸟苷对照品(自制 , HPLC归一
化法测定纯度 >99%),腺苷对照品(自制 , HPLC归
一化法测定纯度 >99%);购于各地的三七花药材
共 6批 ,经沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定
为三七 [ Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen]的
花;乙腈为色谱纯 ,甲醇为分析纯 ,水(二次重蒸水 ,
本室自制)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件和系统适用性试验　色谱柱:Dik-
maODS(200mm×4.6mm, 5μm,迪马公司);流动
相:乙腈 -水梯度洗脱:0 ～ 19 min(2∶98), 19 ～
19.01 min(2∶98 ～ 5∶95), 19.01 ～ 35 min(5∶95 ～
11∶89);流速:1.0 mL· min-1;检测波长:254 nm;
柱温:30℃;进样量:10 μL。在选定的色谱条件下 ,
理论塔板数按鸟苷计算不低于 4000,按腺苷计算不
低于 10000。鸟苷和腺苷与其相邻峰之间分离度均
大于 1.5。鸟苷和腺苷的拖尾因子在 0.95 ～ 1.05
之间(见图 1)。
图 1　对照品(A)与供试品(B)溶液色谱图
Fig1　Chromatogramsofreferencesubstances(A)andsample(B)
1.鸟苷 (guanosine)　 2.腺苷 (adenosine)
2.2　对照品溶液的制备　分别取鸟苷和腺苷适量 ,
精密称定 ,分别置于 10mL量瓶中 ,用流动相溶解并
定容至刻度 ,摇匀 ,配制成含鸟苷 0.43 mg· mL-1和
腺苷 0.39 mg· mL-1的对照品溶液 。
2.3　供试品溶液的制备　取干燥的三七花药材粉
末(过 40目筛)约 1.0 g,精密称定 ,置具塞锥形瓶
中 ,加水 25 mL,称定重量 ,超声 (55 kHz)提取 30
min,放冷 ,再称定重量 ,用水补足减失的重量 ,摇匀 ,
滤过 ,取续滤液备用。
2.4　线性关系的考察　分别精密量取鸟苷对照品
溶液和腺苷对照品溶液 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.0, 2.4
mL,置 10 mL量瓶中 ,用流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,
作为系列对照品混合溶液。在上述色谱条件下分别
进样 10μL,记录各色谱图。以色谱峰面积 Y为纵
坐标 ,对照品浓度 X(μg· mL-1)为横坐标绘制标
准曲线。结果表明 ,鸟苷在 17.2 ～ 103.2 μg· mL
-1范围内线性关系良好 ,回归方程(n=6)为:
Y=1.118 ×104X-2.192 ×104　r=0.9995
腺苷在 15.6 ～ 93.6 μg· mL-1范围内线性关系良
好 ,回归方程(n=6)为:
Y=9.38 ×103X-8.86 ×103　r=0.9997
2.5　精密度试验　取鸟苷对照品和腺苷对照品浓
度分别为 68.8μg· mL-1和 62.4μg· mL-1的对
照品混合溶液照 “ 2.1 ”方法测定 ,分别重复进样 6
次 ,记录鸟苷和腺苷的峰面积 ,测定结果表明 RSD
分别为 1.6%和 1.4%。
2.6　重复性试验　称取同一样品(NO.6)6份 ,每
份约 1.0g,精密称定 ,按 “ 2.3 ”项下操作 ,在上述
色谱条件下进行分析 ,结果鸟苷和腺苷的平均含量
(n=6)分别为 0.11% 和 0.11%, RSD分别为
0.9%和 0.7%。
2.7　稳定性试验　取同一供试溶液 ,室温下放置 ,
分别于 0, 2, 4 , 8, 12 h测定 ,进样量均为 10μL,记录
峰面积。结果表明 ,鸟苷和腺苷在 12 h内稳定性良
好 , RSD分别为 0.9%和 1.3%。
2.8　回收率试验　取已知含量的三七花样品(NO.
6)9份 ,每份 0.5 g,精密称定 ,置锥形瓶中 ,分别按
样品中鸟苷和腺苷含有量的 50%, 100%, 150%,精
密加入混合对照品溶液适量 ,按 “ 2.3 ”项下操作 ,
在上述色谱条件下分别进样 10 μL,记录色谱峰 ,计
算回收率 。结果见表 1。
2.9　样品的测定　取所收集的各产地三七花干燥
药材粉末 ,按 “ 2.3 ”项下操作 ,在上述色谱条件下进
行分析 ,分别计算鸟苷和腺苷的含量 ,结果见表 2。
3　讨论
3.1　提取方法的选择　本实验考察了冷浸 、超声和
回流 3种提取方法 ,结果表明 ,超声法提取效率最
高。随后 ,又考察了提取溶剂 -水 、不同浓度甲醇 -
水 、甲醇 、不同浓度乙醇 -水 、乙醇 ,提取时间 ,提取
次数 ,经单因素循环进行优选 ,选定上述提取方法。
该方法提取完全 ,简单易行 ,样品前处理操作简便省
时 ,能降低因操作带来的误差 。
—2114— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)
表 1　回收率结果 (n=3)
Tab1　Resultofrecovery
成分
(component)
称样量
(sampleweight)/g
样品含量
(content)/mg
加入量
(added)/mg
测得量
(measured)/mg
回收率
(recovery)/%
平均回收率
(meanrecovery)/%
RSD
/%
鸟苷 (guanosine) 0.4900 0.832 0.2821 0.2790 98.9 99.7 1.9
0.4946 0.845 0.2821 0.2872 101.8
0.4817 0.821 0.2821 0.2775 98.4
0.4906 1.102 0.5642 0.5485 97.2 97.6 1.0
0.5393 1.155 0.5642 0.5464 96.8
0.5192 1.143 0.5642 0.5571 98.7
0.4769 1.367 0.846 0.829 97.9 98.2 2.3
0.4768 1.351 0.846 0.813 96.1
0.4909 1.406 0.846 0.868 100.7
腺苷 (adenosine) 0.4900 0.810 0.2732 0.2743 100.4 99.2 1.2
0.4946 0.809 0.2732 0.2679 98.1
0.4817 0.7971 0.2732 0.2706 99.0
0.4906 1.080 0.5465 0.5441 99.6 99.6 0.6
0.5393 1.131 0.5465 0.5415 99.1
0.5192 1.116 0.5465 0.5481 100.3
0.4769 1.334 0.820 0.812 99.1 98.1 1.1
0.4768 1.315 0.820 0.7942 96.9
0.4909 1.343 0.820 0.806 98.3
表 2　样品的测定结果 (%)
Tab2　Determinationresultsofthesamples
产地
(habitat)
鸟苷
(guanosine)
腺苷
(adenosine)
新疆乌鲁木齐(Wulumuqi, Xinjiang) 0.14 0.097
贵州贵阳(Guiyang, Guizhou) 0.064 0.086
江西南昌(Nanchang, Jiangxi) 0.11 0.099
辽宁大连(Dalian, Liaoning) 0.18 0.21
云南文山 1 (Wenshan1, Yunnan) 0.090 0.11
云南文山 2 (Wenshan2, Yunnan) 0.11 0.11
3.2　测定波长的选择　紫外光谱图显示鸟苷和腺
苷皆在 254nm附近有最大吸收 ,故选定 254 nm为
测定波长。
3.3　流动相的选择　本实验曾尝试用等度洗脱分
离该两个化合物 ,但由于两者极性不同 ,其保留行为
差别较大 ,故选用乙腈 -水梯度洗脱 ,缩短分离时
间 ,以达到较好的分离效果 。
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(本文于 2008年 9月 18日收到)
—2115—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)