全 文 ：第28卷 第2期 肇 庆 学 院 学 报 Vol.28,No.2
2007年3月 JOURNALOFZHAOQINGUNIVERSITY Mar.2007
收稿日期:2006-11-30
基金项目:肇庆市科学技术创新项目(2006G21);肇庆学院科学研究基金资助项目(0643)
作者简介:刘艳清(1973-),女,江西萍乡人,肇庆学院轻工化学系讲师,博士.
返魂草颗粒中绿原酸含量测定研究
刘艳清,鲁湘鄂,柯 超
(肇庆学院 轻工化学系,广东 肇庆 526061)
返魂草颗粒是以返魂草(SeneciocannabifoliusLes)为原料经精制而成的纯中药制剂,具有清热祛
痰、镇咳平喘等功效[1],其主要活性成分为绿原酸(chlorogenicacid)和咖啡酸(cafeicacid)[2].王继彦等
人[3]利用 HPLC对返魂草及其注射剂中绿原酸的含量进行了测定.为了有效地控制返魂草颗粒的质量,
本研究选定返魂草颗粒中的主要活性成分绿原酸为定量指标,为返魂草颗粒质量控制标准的建立提供
了依据.
1 仪器与试药
实验仪器:UVYVIS916型紫外-分光光度计(澳大利亚 GBC公司),SK8200H超声波清洗器(上海科
导仪器有限公司),SHB-B95A型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司),ESJ120-4电子天平
(沈阳龙腾电子有限公司).
实验药品:绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所),返魂草颗粒(肺宁颗粒)(吉林益民堂制药有
限公司),试剂均为国产分析纯.
2 方法与结果
2.1 正交实验设计
参照文献[4-5],通过预实验,选定水浴、超声提取法各条件.按照 L9(34)安排 4因素 3水平的正交实
验,实验方案见表 1和表 2.
表 1 水浴法因素水平表
表 2 超声波法因素水平表
摘 要:优选返魂草颗粒中绿原酸的提取工艺.设计正交实验,采用水浴和超声波分别对返魂草颗粒中绿原
酸的提取方法进行了研究.水浴法的最佳提取工艺条件为:70%乙醇,料液比 24:1,40℃水浴回流 90min;超声波
法最佳提取工艺条件为:80%乙醇,料液比 24:1,预浸渍 30min超声 40min.结果显示超声波提取法所得绿原酸
含量较高,以本工艺提取返魂草颗粒绿原酸,绿原酸含量达到 3.63mgYg.
关键词:返魂草颗粒;分光光度法;正交实验;绿原酸;含量
中图分类号:R927.2 文献标志码:A 文章编号:1009-8445(2007)02-0054-04
2.2 供试品溶液的制备
准确称取 1g返魂草颗粒,置于 100mL锥形瓶中,按照正交实验条件进行添加溶剂以及提取(超声
或回流).放置、冷却至室温,然后添加对应浓度的乙醇将提取液定容于 100mL量瓶,作为供试品溶液
待用.
2.3 测定波长的选择
采用乙醇为溶剂,配制绿原酸对照溶液(20mg)L);以乙醇为空白,于 200～400nm波长范围测定紫
外吸收光谱.结果可见绿原酸在波长 329.6nm处有最大吸收,故确定 329.6nm为测定波长.
2.4 方法学考察
1)标准曲线的绘制.精密称取 105℃干燥至恒重的绿原酸对照品 5.2mg,置于 250mL量瓶中,添加
70%乙醇溶解并稀释至刻度,作为标准溶液备用.精密量取此溶液 1.00,3.00,5.00,7.00,9.00及 11.00mL
分别置于 50mL量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀;以乙醇为空白,在 329.6nm波长处分别测定各溶液
的吸光度.以绿原酸标准品的浓度为横坐标,以其吸光度为纵坐标绘制标准曲线.用最小二乘法经线性
回归,得绿原酸浓度-吸光度的关系曲线回归方程为 A=51.133C-0.0058(r=0.9999).结果表明,绿原酸
在 0.42～4.8mg)L浓度范围内,绿原酸浓度与吸光度呈良好的线性关系.
2)稳定性实验.取对照品溶液在 329.6nm波长处每隔 1h测定 1次吸光度,结果表明,吸光度在 6h
内几乎无变化,说明样品的稳定性良好.
3)重现性实验.精密称取同一批号的返魂草颗粒 5份,按含量测定方法,在相同条件下,进行重复实
验,测定绿原酸的含量,RSD为 2.06%,表明重现性良好.
4)加样回收率实验.精密称取 1g的返魂草颗粒,置于 100mL量瓶中,并用 80%乙醇定容;精密称取
1g绿原酸对照品,置于 100mL量瓶中,并用 80%乙醇定容;样品、对照品的母液均分别取 1.00,2.00,
3.00,4.00及 5.00mL,平行操作 5份,按照超声波最优条件 A3B3C3D2进行提取;以乙醇为空白,在 329.6
nm波长处测定吸光度.计算总含量与回收率,平均回收率为 100.8%(RSD=1.51%).
2.5 最佳工艺条件的确定
1)样品的测定.根据表 1和表 2进行正交实验,结果见表 3.为了确定显著性因子,对表 3进行方差
分析和显著性检验,结果见表 4.
表 3 正交实验设计及结果表
注:Ki值为对应绿原酸含量之和.
第2期 刘艳清等:返魂草颗粒中绿原酸含量测定研究 55
肇庆学院学报 第28卷
表 4 显著性检验
F(2,2)0.01=99;F(2,2)0.05=19;F(2,2)0.1=9. F(2,2)0.2=4;F(2,2)0.25=3.
2)水浴最佳条件.从表 3的直观分析和表 4的方差分析可知,对于水浴法中 FB=16.55>F(2,2)0.1,即
P<0.1,故 B(乙醇浓度)为显著影响因素;FC=13.26>F(2,2)0.10,P<0.10,C(料液比)为显著因素;D(提取时
间)不显著,4种因素对提取结果影响大小依次为 B>C>D>A.从表 4可知其最佳组合为 A1B2C3D2,即水
浴最佳提取条件为 70%乙醇,料液比 24:1,40℃水浴回流 90min,所得绿原酸的含量达到 2.99mgAg.
3)超声最佳条件.显著性检验结果表明,对于超声法中 FB=133.75>F(2,2)0.01,P<0.01,乙醇浓度为高
度显著影响因素;FD=15.32>F(2,2)0.10,P<0.10,超声时间为一般显著影响因素;FA=11.10>F(2,2)0.10,P<
0.10,预浸渍时间为一般显著影响因素;总体显著性良好.4种因素对浸提结果影响大小依次为 B>D>A>
C,从表 4可知最佳组合为 A3B3C3D2,即超声最佳提取条件为用 24倍原料重的 80%乙醇预浸渍 30min
超声 40min,绿原酸的含量达到 3.43mgAg.
2.6 返魂草颗粒中绿原酸的含量
取返魂草颗粒,研细,精密称取 1g,平行操作 5份,
置于 100mL锥形瓶中,按照最优条件:超声波提取
A3B3C3D2进行提取.以乙醇为空白,在 329.6nm波长处
测定其吸光度,计算绿原酸含量,所得结果见表 5.5次
的 RSD为 1.94%.
3 讨 论
在水浴与超声方法中,影响绿原酸提取的主要因素基本相同,所不同的是超声条件下提取效果优
于水浴.其原因可能是:1)超声的空化作用对细胞膜的破坏有助于绿原酸的释放与溶出.2)超声波使浸提
剂和提取物不断震荡,有助于溶质的扩散.3)超声的热效应使水介质对样品有水浴的效果.
参考文献:
[1] 崔静莲,付艳敏,王丹玉,等.乙醚质量影响返魂草冲剂 TLC的鉴别[J].中国药品标准,2004,5(2):28,39.
[2] 李丽静,王继彦,王岩,等.返魂草提取物及其有效成分抗病毒作用的研究[J].中国中医基础医学杂志,2005,11(8):
585-587.
[3] 王继彦,李丽静,张莲珠.HPLC法测定返魂草及其注射剂中绿原酸[J].中草药,2005,36(8):1166-1167.
[4] 郑用熙.分析化学中的数理统计方法[M].北京:科学出版社,1986:125-163.
[5] 克洛福.超声工程[M].杜连耀,应崇福,译.北京:科学出版社,1996:156-231.
表 5 返魂草颗粒中绿原酸含量的测定
56
第2期 刘艳清等:返魂草颗粒中绿原酸含量测定研究
更 正
因发排软件与排版软件匹配不当及编辑校对失误,《肇庆学院学报》2006年第 5期所发 《不同季节
含笑挥发油成分的 GC-MS分析》一文,表 2中部分化合物的名称出现错误,特此列表予以更正,并向作
者致以歉意.此外,作者指出含笑的学名以采用 Michelia figo为宜.
化合物名称正误表
Determination the Contents of Chlorogenic Acid in
Fanhuncao Granule
LIU Yanqing,LU Xiang’e,KE Chao
((Department of Light Industry & Chemistry,Zhaoqing University,Guangdong Zhaoqing 526061,China)
Abstract: In order to study the extraction process of aster pellet,optimal conditions for extracting
chlorogenic acid in Fanhuncao Granule with water bath and ultrasonic wave were studied by using or-
thogonal design. The results showed that the optimal conditions for extracting with water bath was 40℃,
24:1 of 70% ethanol solution to Fanhuncao Granule weight ratio,extracting for 90 minutes and that with
ultrasonic technique was 24:1 of 80% ethanol solution to Fanhuncao Granule weight ratio,presoaking 30
minutes and extracting for 40 minutes. The results showed that the content of chlorogenic acid extracted
with ultrasonic wave was higher than with water bath. The content of chlorogenic acid in Fanhuncao
Granule was 3.63mg\g. Verification experiment proved the optimum processing method was feasible.
Key words:Fanhuncao Granule^ spectrophotometry^ or hogonal design^ chloro enic acid^ content
(责任编辑:李 湘)
57