全 文 ：返魂草的鉴别研究
＊南敏伦 1　邢振发 2　赫玉芳 1　赵昱玮 1
1、吉林天药现代中药科技有限公司(吉林　长春　130012)　2、长春精优药业有限公司(吉林　长春　130033)
　　摘　要　目的:对返魂草(Seheciocannabifoliusless)药材进行鉴别研究。方法:应用性状鉴别 、显微鉴别法和薄层色
谱法为返魂草建立了药材鉴别方法。结果:返魂草的显微特征和薄层色谱特征明显。结论:特征可以作为返魂草的鉴
别手段。
关键词:返魂草;鉴别;显微;薄层色谱
中图分类号:R282.5　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1006-2882(2009)04-454-03
StudyonIdentificationofSeheciocannabifoliusLes
NanMinlun1 , etal
ModernChineseMedicineofNaturalPharmatech(JilinChina)Co., Ltd.(Changchun130012)
Abstract:Objective:TostudytheidentificationmethodofSeheciocannabifoliusless.Methods:Charactersofthecrude
drug, microscopiccharacteristics, TLCwereobservedandstudied.Results:TheCharactersofthecrudedrug, microscopicchar-
acteristics, TLCwereconfirmedofSeheciocannabifoliusless.Conclusion:ThecharacteristicsofSeheciocannabifoliuslesscanbe
usedtoidentify.
Keywords:Seheciocannabifoliusless;Identification;microscopiccharacteristicsidentification;TLC
　　返魂草(Seheciocannabi.foliusless)又名麻叶千里光 , 为
菊科(Compositae)千里光属(SenecioI.)多年生草本植物 , 主
要分布于我国东北 、河北等地及朝鲜 、日本 、前苏联远东地
区 , 生长于山沟 、林缘及湿草甸上 [ 1] 。返魂草地上部分主要
含有的生物碱为千里光啡啉 、千里光碱 A、B、C, 含有的酚酸
类成分为氢醌 、绿原酸 、对羟基苯乙酸 、熊果苷 、对 -羟基苯
宕昌(甘肃)秋季
细胞 4 ～
8 列 , 深入 至 皮层
细胞 4 ～
8 列 , 深入 至 皮层
可见
韧 皮纤 维束 散在
有 纤维 束及 草酸 钙方晶
薄 壁细 胞中 可见 草酸 钙方晶
未见异型维管束
承德(河北)秋季
细胞 5 ～
8 列 , 呈长方形 ,深 入 至皮层 , 在皮 层 向一 侧 弯曲
细胞 5 ～
8 列 , 呈长方形 ,深 入 至皮层 , 在皮 层 向一 侧 弯曲
由 3～ 6层 扁平 薄壁 细胞 组成
韧 皮纤 维束 散在
有 草酸 钙方晶
薄 壁细 胞中 充满 淀粉粒 ,并 有草 酸钙 方晶
未见异型维管束
赤峰(内蒙)秋季
细胞 3 ～
5 列 , 呈不 规 则形 , 深入至皮层
细胞 3 ～
5 列 , 呈不 规 则形 , 深入至皮层
由 3～ 6层 扁平 薄壁 细胞 组成
韧 皮纤 维束 散在
薄 壁细 胞中 含有 颗粒 状物
未见异型维管束
3　讨论
本研究采用的苦参药材分别采集于黑龙江林口 、泰康 、
内蒙赤峰 、河北省承德 、甘肃省宕昌五个苦参主产地的春 、
夏 、秋三个季节 , 具有一定的代表性。按照 1995年版《中国
药典》苦参含量测定项下进行测定。结果表明 , 五个产地春 、
夏 、秋三个季节采收的苦参总生物碱含量无显著差异 , 五个
产地之间黑龙江省林口略高。因此 , 从生态和可持续利用资
源的角度上考虑 , 以采收秋季苦参药材为宜;按照 2005年版
《中国药典》苦参薄层鉴别项下进行薄层鉴别 , 发现槐定碱呈
现地区差异 , 山海关为分界线 , 东北地区(含内蒙的东北部)
苦参药材不含槐定碱 , 黄河流域苦参药材含槐定碱。苦参
碱 、氧化苦参碱 、氧化槐果碱为共性成份 , 且相对含量一致 ,
以氧化苦参碱 、氧化槐果碱含量较高;按照 2005年版《中国
药典》方法 ,对五个苦参主产地的药材标本进行了性状鉴别 ,
从试验结果看 , 五个主产地的苦参药材性状呈较一致性 , 有
较细微差别。按照 2005年版《中国药典》方法对苦参五个主
产地的药品标本进行显微鉴别比较。从试验结果看 , 五个主
产地的苦参药材显微鉴别结果呈较一致性 ,有较细微差别。
通过我们的试验对苦参在性状及显微鉴别方面进行了
细致深入的研究 , 对苦参药材秋季采集进行了理论依据的考
察 , 对苦参薄层色谱进行了地域性的界定 , 为苦参药材的鉴
定和质量控制提供了良好的依据。
参考文献
[ 1] 　赵玉英等 .北京医科大学学报 [ J] , 1992;24(5):419.
[ 2] 　中国药典 [ S] ,二部 , 1995, 176-177.
[ 3] 　中国药典 [ S] ,一部 , 2005, 141. 收稿日期:2009-04-20
·454· 黑龙江医药 HeilongjiangMedicineJournalVol.22No.4 2009DOI :10.14035/j.cnki.hljyy.2009.04.028
乙酸甲酯 、 3, 4-二羟基苯甲酸 、 2, 5-二羟基苯乙酸 、 2, 5-
二羟基苯乙酸甲酯 、 3-羟基 4-甲氧基苯甲酸 、邻羟基苯甲
酸 、对羟基苯甲酸等 , 还含有铁 、锰 、锌 、铜等微量元素 [ 2、3] 。
该植物具有散瘀 、止血 、止痛的功效 , 在民间被广泛用于病毒
性感冒 、抗炎的治疗。目前 , 有多家制药企业用返魂草单方
和组成的复方制剂 , 生产颗粒剂 、胶囊剂 、片剂 , 具有清热祛
痰 、镇咳平喘等功效。用于治疗肺内感染 、慢性支气管炎 、喘
息性支气管炎 、急性呼吸道感染等症 , 且疗效确切 , 成药销售
状况极佳。为了控制返魂草的质量 , 我们对其进行了性状描
述 , 显微特征描述 , 薄层色谱鉴别研究。图 1、 2为返魂草中
主要成分绿原酸和氢醌的结构式。
1　试药与仪器
返魂草药材购于吉林省宏检药材有限公司 ,经吉林省中
医药科学院徐国经教授鉴定为菊科(Compositae)千里光属
(SenecioI.)多年生草本植物返魂草的干燥地上部分。 Leica
显微镜;720A型超声波清洗器;MetlerAE-260电子分析天
平;返魂草对照药材 , 批号:120948-200302, 中国药品生物
制品检定所);氢醌对照品为分析纯试剂(沈阳市新西试剂厂
生产 , 批号为 20010904)。试剂均为分析纯。
2　性状鉴别
茎呈圆柱形 , 上部多分枝 ,表面绿褐色或棕褐色 , 无毛 ,
易折断 , 断面不平整 , 灰白色 ,髓部疏松或中空。单叶互生 ,
叶柄短 ,基部有两小耳;叶皱缩 ,多破碎 , 完整叶片展平后呈
椭圆形 , 羽状或近掌状深裂 ,裂片披针形或条状披针形 , 先端
渐尖 , 边缘有密锯齿;上表面灰绿色或黄棕色 , 下表面色较
浅 , 两面无毛或下面沿脉有微毛。头状花序顶生或枝端 , 排
列成复伞房状 , 总苞黄褐色 ,羽状冠毛灰白色。气微 ,味淡。
3　显微鉴别
3.1　茎的横切面
呈圆形;外韧形维管束环状排列。表面稍有突起的棱
脊。表皮由 1列类圆形细胞组成 ,壁稍厚 ,外被角质层 , 可见
少数多细胞非腺毛。 皮层由薄壁细胞和厚角组织组成。厚
角组织位于棱脊处。内皮层为 l列切向延长的长方形或类
长方形的薄壁细胞;中柱鞘纤维多角形 、壁厚 、腔小。对应棱
脊处的中柱鞘纤维发达。有的呈半月形 , 几接近于厚角组
织。在内皮层与中柱鞘之间有分泌道 , 内含棕黄色分泌物。
韧皮部较宽 , 连成环带 ,韧皮射线大多数不甚明显;木质部由
导管 , 木纤维及少数木薄壁细胞组成。木射线 4 ～ 7列 , 由长
椭圆形或长方形薄壁细胞径向排列。壁木化。木纤维为类
方形或多角形 , 细胞壁厚 ,排列较整齐;导管众多。木质部内
方几乎均有环髓纤维。髓部发达 ,由较大的类圆形薄壁细胞
组成。
3.2　叶横切面
由表皮细胞 、厚壁组织 、厚角组织 、薄壁组织及维管束组
成。表皮上可见非腺毛 , 上下表皮均有角质层。 上表皮为 l
列切向延长的长圆形细胞。壁厚。下表皮为 1列类圆形细
胞 , 壁厚 ,具气孔和毛茸。栅栏组织为 1列长柱形或长椭圆
形细胞。海绵组织内散在分泌道 。主脉下面突出 ,其上下表
皮内方均有厚角组织。维管束 2 ～ 3个 , 排列成半圆形 , 外韧
式 , 木质部上方为厚壁组织;韧皮部较窄 , 其下方为厚角细
胞;外侧通常有分泌道 ,内含棕黄色分泌物。
3.3　粉末显微特征
干燥全草用粉碎机粉碎 , 然后过 100目筛 , 即得返魂草
的药材粉末。取粉末少许 , 装片观察粉末 , 有较多的多细胞
非腺毛碎段 , 呈肢节状 , 基部细胞较大 , 直径 50μm～ 76μm,
无色透明 , 完整者可见由 4 ～ 7个细胞组成 , 稍弯曲 , 长
480μm～ 730μm。细胞为类圆形或长圆形 , 大小在 20μm～
45μm之间 , 细胞壁薄 ,细胞内充满了深绿色的叶绿体。皮层
薄壁细胞形状不规则 , 有明显的胞间隙;髓部薄壁组织的细
胞为多边形或类圆形。用间苯三酚和浓硫酸将木质化细胞
壁染成红色 , 可见孔纹导管 、梯纹导管和螺纹导管的碎片 , 直
径 12μm～ 50μm,多为单穿孔板。
4　薄层鉴别
4.1　氢醌鉴别
取药材粉末 2g, 加 100ml水煮沸 1h, 离心 , 取上清液 , 加
入 5%明矾溶液 15ml,搅拌 , 放置 , 离心 ,取上清液 , 用乙醚萃
取 3次 , 每次 40ml,合并乙醚液 , 用 5%碳酸氢钠溶液洗涤 3
次 , 每次 15ml,乙醚层再用去离子水洗涤 2次 , 每次 15ml, 取
乙醚液置水浴锅上低温挥干 , 残渣加去离子水 1ml使溶解 ,
用 45μm微孔滤膜过滤作为供试品溶液;另取返魂草对照药
材 2g,同法制成对照药材溶液;另取氢醌对照品 , 加甲醇制成
每 1ml含 0.2mg的溶液 , 作为对照品溶液。 吸取供试品溶
液 、对照药材溶液 、对照品溶液各 5μl, 分别点于同一硅胶 G
薄层板 , 以氯仿 -丙酮(7:4)为展开剂 , 展开 , 取出 , 晾干 , 喷
以 2%三氯化铁 -2%铁氰化钾溶液(临用前等体积混合)。
供试品色谱中 , 在与对照品及对照药材色谱相应的位置显相
同颜色斑点。见图 3。
图 3　返魂草薄层鉴别
1.氢醌对照品;2.返魂草对照药材;3、4.返魂草药材;5.溶剂
5　讨论
5.1　通过对返魂草药材粉末的观察研究 , 认为该药材粉末
的显微鉴定依据一是具有透明的肢节状多细胞非腺毛碎段;
·455·黑龙江医药 HeilongjiangMedicineJournalVol.22No.4 2009
乳糖酸修饰壳聚糖载体与 siRNA结合体外稳定性研究
刘　恒　李郑武　王　莹
哈药集团生物工程有限公司(黑龙江　哈尔滨　150020)
　　摘　要　基因载体系统是实现基因转导和基因治疗的关键 , 壳聚糖作为一种安全 、无毒 、可降解的阳离子基因治
疗载体受到越来越多的关注。本实验研究具有靶向作用的乳糖酸修饰壳聚糖体外与 siRNA最佳结合质量比及稳定结
合条件。结果发现修饰后的壳聚糖能结合的 siRNA量减少 , pH及盐浓度对乳糖酸修饰壳聚糖与 siRNA结合的稳定性
均有影响。本实验为壳聚糖的靶向提供思路 ,并为乳糖酸修饰壳聚糖载体基因治疗制剂提供实验指导。
关键词:壳聚糖;基因载体;靶向作用;siRNA
中图分类号:TQ464　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1006-2882(2009)04-456-03
　　siRNA可以借导 mRNA水平沉默蛋白表达为许多疾病
的治疗提供了一种新的策略。但是由于 siRNA的不稳定和
细胞摄取的非特异性限制了 siRNA在人类中的应用。 目前 ,
人们正在研究载体系统以克服限制治疗的这些屏障 [ 1] 。脂
质体 , 多聚赖氨酸淀粉纳米颗粒 [ 2] ,壳聚糖等都是比较好的
选择。壳聚糖是一种无毒 、生物相容性好的多聚阳离子 , 并
且有较低的免疫源性。它是 siRNA传递系统好的选择 , 一方
面它带有阳离子可以和带有阴离子的 siRNA有效的结合 ,并
且保护它免受核酸酶的降解 [ 3] , 另一方面它又能和哺乳动物
细胞表面的唾液酸受体结合 , 通过受体介导或直接经细胞内
吞作用进入胞内 , 从而达到将外源 siRNA导入到细胞内的目
的 [ 4] 。壳聚糖作为 DNA载体已多有报道 ,如骨性关节炎的
基因治疗 [ 4] , 癌症的基因治疗等 [ 5] 。近些年来 , 人们已经针
对不同的目的开发出了许多壳聚糖的衍生物 , 如 N-三甲基
壳聚糖转运蛋白通过鼻粘膜 [ 6] , 并且取得了较好的效果。本
文介绍了具有靶向作用的乳糖酸修饰壳聚糖载体的合成及
其与 siRNA形成稳定复合物的条件。
1　材料和方法
1.1　材料
壳聚糖(分子量分别为 5万 、10万 、 20万 、 30万 ,脱乙酰
度在 95%以上 , 浙江金壳生物化学有限公司), siRNA
(2.9mg/ml,本实验室制备), TEMED, EDC· Hcl(上海蓝季
科技发展有限公司), NHS(Fluka), 乳糖酸(99%, 上海汇申
化工有限公司), 琼脂粉 , Goldview, TanonEps300凝胶电泳
仪 , 贺力氏离心机 ,透析袋。
1.2　方法
1.2.1　乳糖酸修饰壳聚糖
配置 20mMTEMED, 用 Hcl调 pH=4.5, 定容至 50ml。
加入 EDC· Hcl至 50Mm/L, NHS至 5Mm/L。加入 0.08gLA
(乳糖酸)搅拌至溶解 , 加 0.11g壳聚糖(分子量 20万)(脱乙
酰度 >95%)搅拌至全溶。室温反应 36小时。透析 48小时
(置换液为去离子水 ,检测 pH值稳定为止)。 透析后的溶液
4℃保存备用。
1.2.2　壳聚糖与 siRNA结合试验
1.2.2.1　修饰壳聚糖与 siRNA结合的最佳质量比
取 siRNA3μl、6μl分别与 1.5μl修饰壳聚糖混合,用纯水补
至 200μl(图 1);取修饰壳聚糖 1.5μl、3μl、6μl、12μl、 24μl、48μl
分别与 2.0μlsiRNA混合,用纯水补至 200μl(图 2)。
1.2.2.2　未修饰壳聚糖与 siRNA结合的最佳质量比
取分子量分别为 10万 、20万 、30万的壳聚糖 0.012克 ,
分别用 20mM醋酸缓冲液溶解 , 再用 1M氢氧化钠调 pH=
5.5, 壳聚糖终浓度为 1.2mg/ml。
分取各分子量壳聚糖 100μl(图 3)、50μl(图 4)、30μl(图
5)与 2μlsiRNA混合 ,用纯水补至 200μl。 1%的琼脂糖凝胶
电泳检验未修饰壳聚糖与 siRNA结合效果。
1.2.2.3　pH值对修饰壳聚糖与 siRNA结合效果的影响
将生理盐水用盐酸调 pH=3.7,分取 200μl、50μl修饰壳
聚糖各两份与 12μlsiRNA混合 ,将其中一份 200μl、50μl
二是薄壁细胞多见 , 直径多在 30μm～ 70μm;三是导管类型
多为孔纹 、梯纹和螺纹 ,单穿孔板。
5.2　在返魂草药材的鉴别中 ,我们直接采用乙醚提取;水煎
煮 、丙酮:甲醇提取的方法进行了研究 ,结果表明对单一的返
魂草药材可以进行鉴别 , 但是含有返魂草的复方制剂很难鉴
别其中的有效成分。杂质比较多 ,而且一般的复方制剂中阴
性都有干扰。但是采用本文的方法进行鉴别效果都比较好 ,
故此采用本文的方法对返魂草进行鉴别。
5.3　为了控制返魂草的质量 ,对其进行性状描述 、显微特征
鉴别 、薄层色谱鉴别外 , 还应该对其进行定量控制 , 我们在
HPLC法测定不同产地返魂草中绿原酸的含量一文中进行了
研究 [ 4] , 供大家参考。
参考文献
[ 1] 　吉林省中医中药研究所 .长白山植物药志 [ M].长春:吉林人
民出版社 , 1982:1235.
[ 2] 　严仲铠 .中国长白山药用植物彩色图志 [ M].北京:人民卫生
出版社 , 1997:44.
[ 3] 　王吉彦,李丽静 ,张连珠 .HPLC法测定返魂草及其注射剂中绿
原酸 [ J] .中草药 , 2005, 36(8):1166-1167.
[ 4] 　南敏伦,赫玉芳 .HPLC法测定不同产地返魂草中绿原酸的含
量 [ J] .沈阳药科大学学报 , 2008, 25(2):119-121.
收稿日期:2009-04-10
·456· 黑龙江医药 HeilongjiangMedicineJournalVol.22No.4 2009