全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
采用超声处理 30 min、加热回流 1 h、索氏提取
2 h 进行提取方法考察，超声提取含量测定结果较
低，加热回流与索氏提取结果相差不大，但加热回流
更简便、快捷，故采用加热回流法。采用甲醇、水、
50%甲醇作提取溶剂进行考察，用 50%甲醇提取所
得含量比高，且杂质较少，故采用 50% 甲醇作为提
取溶剂。以加热回流 30 min，1，2 h，进行提取时间
考察，加热回流 30 min，测得结果较低，加热回流 1，
2 h，两者无明显差别，故加热回流时间定为 1 h。
［参考文献］
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［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20111213(018)
［基金项目］ 上海市科学技术委员会择优委托项目(09dZ1974302) ;中药现代化专项项目(10DZ1975900)
［通讯作者］ * 王峥涛，博士，教授，从事中药的物质基础及质量评价研究，Tel:021-51322507，Fax:021-51322519，E-mail:wangzht@
hotmail． com
返魂草药材的 HPLC指纹图谱研究
马鸿雁1，2，杨莉1，王长虹1，王峥涛1*
(1. 上海中医药大学中药研究所 中药标准化教育部重点实验室，上海 201203;
2. 广东药学院中药学院，广州 510000)
［摘要］ 目的:研究返魂草药材的 HPLC 指纹图谱方法，为科学评价该药材质量提供了新方法。方法:利用 HPLC 方法，
色谱条件 Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，柱温 30 ℃，流动相为乙腈-0. 1%三氟乙酸溶剂系统，梯度洗
脱，流速 1. 0 mL·min － 1，检测波长 254 nm。对不同产地的返魂草药材进行研究，采用药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相
似度评价系统”2004A 对指纹图谱进行分析。结果:得到分离度，重复性均较好的返魂草药材 HPLC-UV 指纹图谱，标定 14 个
共有峰，11 批返魂草药材的相似度均 ＞ 0. 900。结论:该方法简便可靠，重复性好，可用于返魂草药材的质量控制。
［关键词］ 返魂草;高效液相色谱;指纹图谱
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)13-0101-04
Studies on HPLC Fingerprint of Senecio cannabifolius
MA Hong-yan1，2，YANG Li1，WANG Chang-hong1，WANG Zheng-tao1*
(1. Key Laboratory of Standardization of Chinese Medicine Ministry of Education，Shanghai
Univeristiy of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China;
2. School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical College，Guangzhou 510000，China)
［Abstract］ Objective:The chromatographic fingerprint of Senecio cannabifolius was established，which
created a new method for evaluating and controlling the quality． Method:HPLC analysis was carried out on Agilent
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第 18 卷第 13 期
2012 年 7 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 13
Jul．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.13.033
Zorbax SB-C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，with a mobile phase of acetonitrile-1% trifluoroacetic acid
system (gradient elution)． The detection wavelength was set at 254 nm and flow rate was 1. 0 mL·min － 1 ． Column
temperature was set at 30 ℃ ． The obtained data was analyzed by computer aided similarity evaluation． Result:
Fourteen common peaks were confirmed in fingerprints． The similarity degree of the samples was found to be higher
than 0. 900. Conclusion:This method is simple，credible and of good reproducibility，which can be used for their
quality control．
［Key words］ Senecio cannabifolius;HPLC;fingerprint
返魂草为我国长白山地区的一种特色资源，该
药材为菊科植物麻叶千里光和其变种单麻叶千里光
的干燥全草，具清热祛痰、镇咳平喘之功效［1］。以
其为原料的制剂如返魂草颗粒(肺宁颗粒)、肺宁口
服液等被广泛用于治疗肺内感染、慢性支气管炎、喘
息性支气管炎等疾病。目前，返魂草药材及其相关
制剂的质量控制水平还很低，卫生部部颁标准仅有
采用薄层色谱法对返魂草颗粒定性鉴别的描述，有
少量文献报道对其绿原酸或咖啡酸含量进行测
定［2-4］，但未见其指纹图谱研究的报道。本课题组
对返魂草进行了系统的化学成分研究，发现其主要
活性成分为有机酸和黄酮成分［5-8］。本文采用
HPLC 方法，建立返魂草药材的这两类化学成分指
纹图谱，并将其与千里光属其他 5 种药用植物的液
相图谱进行比较研究和相似度考察，为该药材的质
量控制研究提供参考。
1 材料
Agilent 1100 型高效液相色谱仪(自动进样器，
四元泵，柱温箱，DAD 检测器) (Agilent，美国) ，
BP211D 型电子天平 (Satorius Co． Ltd．，德国) ，
Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5
μm)。甲醇、乙醇、醋酸均为分析纯(上海国药集团
化学试剂有限公司) ，乙腈为色谱纯 (Merck 公司) ，
超纯水为 Milli-Q 处理水(Millipore Co．)。对照品绿
原酸、金丝桃苷为自制，纯度经高效液相按面积归一
化法测定均 ＞ 98%。
从吉林省共收集了不同产地的单麻叶千里光样
品 8 份，麻叶千里光样品 3 份(表 1)。从全国共收
集千里光属羽叶千里光，菊状千里光，欧洲千里光，
峨眉千里光，千里光药材各一份(表 2)。以上药材
均为自采，经上海中医药大学中药研究所吴立宏博
士鉴定。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-0. 1%三氟
乙酸溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 25 min，8% ～ 18% A，
表 1 返魂草药材来源
No． 采集地 基源
SC01 柳河县凉水 Senecio cannabifolius var． integrilifolius
SC02 哈泥湿地自然保护区 S． cannabifolius var． integrilifolius
SC03 江源县三岔子 S． cannabifolius var． integrilifolius
SC04 通化县兴林 S． cannabifolius var． integrilifolius
SC05 安图县白河 S． cannabifolius var． integrilifolius
SC06 通化县江甸子 S． cannabifolius var． integrilifolius
SC07 抚松县松江河 S． cannabifolius var． integrilifolius
SC08 靖宇县燕平 S． cannabifolius var． integrilifolius
SC09 柳河县凉水 S． cannabifolius
SC10 哈泥湿地自然保护区 S． cannabifolius
SC11 江源县三岔子 S． cannabifolius
表 2 千里光属其他药材来源
No． 采集地 基源
SA01 吉林 S． argunensis
SL01 四川 S． laetus
SV01 吉林 S． vulgaris
SF01 四川 S． faberi
SS01 安徽 S． scandens
25 ～ 50 min，18% ～ 22% A) ，流速 1. 0 mL·min － 1，检
测波长 254 nm，柱温 30 ℃，进样量 10 μL。
2. 2 供试品溶液的制备 取药材粉末 0. 25 g(过
40 目筛) ，精密称定，精密加入 70% 甲醇 10 mL，称
定质量，浸泡 30 min 后超声提取 60 min，静置到室
温，补足质量，摇匀，3 000 r·min － 1离心 10 min，取上
清液，0. 45 μm 微孔滤膜过滤，即得。
2. 3 对照品溶液的制备 称取对照品绿原酸、金丝
桃苷适量，精密称定，用 70%甲醇溶解，制成分别含
对照品 148，50 mg·L － 1的溶液，0. 45 μm 微孔滤膜过
滤，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 13
Jul．，2012
6 次测定，记录指纹图谱。以金丝桃苷峰为参照峰，
计算 14 个特征色谱峰的相对保留时间和相对峰面
积，RSD 均 ＜ 3%，符合色谱指纹图谱要求，说明精
密度良好。
2. 4. 2 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于
2，6，12，16，24 h 进样测定，以金丝桃苷峰为参照峰，
分别计算 14 个特征色谱峰的相对保留时间和相对
峰面积，RSD 均 ＜ 3%，说明样品溶液在 24 h 内
稳定。
2. 4. 3 重复性试验 同一样品粉末分别精密称定
6 份，按照上述样品溶液制备方法制成供试品溶液，
进样检测，以金丝桃苷峰为参照峰，计算 14 个特征
色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，RSD 均 ＜
3%，符合色谱指纹图谱要求，重复性良好。
4. 绿原酸;9. 金丝桃苷
图 2 返魂草药材的对照指纹图谱
2. 5 指纹图谱建立及相似度分析
2. 5. 1 返魂草药材的 HPLC 指纹图谱的建立 按
2. 1 项下方法测定样品，将 11 批返魂草药材的液相
图谱导入国家药典委员会指定的“中药色谱指纹图
谱相似度评价系统 A 版”(图 1) ，以样品 SC01 为参
照图谱，时间窗宽度为 0. 5，采用中位数法计算。采
用该软件生成返魂草共有模式的对照指纹图谱，得
到 14 个共有峰，见图 2。通过与对照品图谱比对，
指认 4 号峰为绿原酸，9 号峰为金丝桃苷。因金丝
桃苷峰面积大且峰形最稳定故以其为参照峰，计算
各共有峰的相对保留时间，11 批样品的相对保留时
间的 RSD ＜ 3%，符合指纹图谱的要求。
利用该软件对 11 批样品的指纹图谱进行数据
处理，相似度分析结果见表 3 所示。结果可以看出，
11 批返魂草指纹图谱与对照指纹图谱的相似度
均 ＞ 0. 9，说明各产地的药材具有较高的均一性。
2. 5. 2 千里光属其他药材与返魂草指纹图谱的相
似度研究 按 2. 1 项下方法测定样品，将 5 份千里
光属其他药材的液相图谱和按 2. 5. 1 项下得到的返
魂草对照指纹图谱导入国家药典委员会指定的“中
图 1 11 批返魂草药材的 HPLC 指纹图谱
表 3 返魂草药材相似度分析
No． 相似度 No． 相似度
SC01 0. 977 SC07 0. 976
SC02 0. 940 SC08 0. 963
SC03 0. 988 SC09 0. 994
SC04 0. 951 SC10 0. 923
SC05 0. 985 SC11 0. 992
SC06 0. 976
表 4 返魂草药材与千里光属 5 种药用植物的相似度分析
No． 相似度 No． 相似度
SA01 0. 767
SL01 0. 771
SV01 0. 641
SF01 0. 401
SS01 0. 744
药色谱指纹图谱相似度评价系统 B 版”，相似度分
析结果见表 4。
3 讨论
3. 1 流动相的选择 比较了甲醇-水、乙腈-水、甲
醇-1%三氟乙酸(磷酸)、乙腈-0. 1%甲酸(磷酸)等
不同溶剂系统。结果表明，乙腈-0. 1% 三氟乙酸溶
液的流动相中，色谱峰的分布、峰形和分离度均优于
其他系统。因此，选择其为该指纹图谱的流动相。
3. 2 检测波长的选择 根据文献及前面的化学成
分研究工作，可以看出返魂草中的主要化学成分有
·301·
马鸿雁，等:返魂草药材的 HPLC 指纹图谱研究
酚酸、黄酮类及萜类成分。由于萜类成分的紫外吸
收不明显，本文建立的方法主要是获得酚酸和黄酮
类成分的指纹峰。绿原酸类成分在 310，325 nm 有
最大吸收，黄酮类成分在 260，360 nm 有最大吸收，
通过初步分析，样品中还有一类成分在 230 nm 有最
大吸收，经实验比较，通过综合考虑在不同波长下出
峰的多少和各成分的分离情况及各色谱峰的丰度，
最后选择 254 nm 下检测，这三类成分都有良好的吸
收值。
3. 3 样品提取条件的优化 试验比较了不同比例
的甲醇(5%，20%，50%，70%，90%)通过不同提取
方法(超声 30 min，超声 60 min，加热回流 2 h)得到
的 HPLC 指纹图谱，结果显示 70%甲醇超声 60 min
得到色谱图信息最丰富，分离效果最好，故最终采用
的方法，取药材 0. 25 g(过 40 目筛) ，精密称定，精
密加入 70%甲醇 10 mL，浸泡 30 min 后，超声提取
60 min，放冷，补重，3 000 r·min － 1离心 10 min，取上
清液，过滤，即得。
3. 4 返魂草指纹图谱在药材质量评价方面的意义
通过建立返魂草对照指纹图谱，采用相似度软件
对各批药材进行比较，返魂草不同产地药材与对照
指纹图谱之间的相似度均 ＞ 0. 9，说明不同产地的返
魂草药材化学成分很相似，麻叶千里光和单麻叶千
里光的相似度很高。绿原酸和金丝桃苷的色谱峰占
较高的比例，说明这两者可作为返魂草质量评价中
含量测定的指标性成分，从而完善返魂草质量评价
的指标。
建立的返魂草指纹图谱与千里光属其他药材的
比较中，相似度均很低，表明建立的方法可很好的区
别返魂草药材与其他品种。
［致谢］ 通化师范学院于俊林教授对本实验的药材采
集提供帮助。
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［责任编辑 顾雪竹
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
］
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领域新成果、新技术、新方法与新思路，内容包括栽培、资源与鉴定、炮制、药剂、化学、药理、不良反应、临床等。设有专论、综
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