全 文 ： 第 20 卷第 8 期
2012 年 8 月
Vol.20 No.8
Aug，2012
中国医学工程
China Medical Engineering
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刺五加叶粒度对总黄酮提取的影响
张晓旭
( 中山大学药学院，广东 广州 510006)
摘要 :刺五加含有的有效成分为黄酮类，本研究采用索氏提取法对刺五加叶总黄酮进行提取，探讨刺五加叶不同粉碎粒度、
不同提取时间对总黄酮提取量的影响，以期确定合适的提取参数。结果表明:刺五加叶的粉碎粒度对其总黄酮提取量有影响，
细粒（通过 80 目筛）提取量最大；提取时间与提取量呈正相关，但 3h后差异不显著，因此建议生产上采用细粒、提取时
间为 3h较为适合。
关键词 : 刺五加；总黄酮；索氏提取法；粒度
中图分类号 :R 917 文献标识码 :B
刺五加为五加科植物，主要分布于中国东北地区、朝鲜
半岛、日本北海道和俄罗斯远东等地区 [1-2]。刺五加作为传
统中药已广泛应用在临床治疗上，其根、茎、叶、花和果实
均可入药。现代临床用于治疗神经官能症、白细胞减少症、
风湿性及类风湿性关节炎、心绞痛、高血脂症、糖尿病、慢
性支气管炎和妇女保健、预防疲劳及增强运动能力等 [3-8]。
近年来研究表明黄酮类成分为刺五加主要有效成分。
本研究采用索氏提取法对干燥的刺五加叶在不同粉碎粒
度、不同提取时间对总黄酮提取量的影响。
1 实验材料与仪器
刺五加叶（哈药集团世一堂药厂购买）。芦丁标准品（北
京药品生物制品检定所）；石油醚；无水乙醇；NaNO2；
Al( NO3 ) 3；NaOH，试剂均为分析纯。实验用水为超纯水。
电子天平（AR1140）；双光束紫外可见光分光光度计
（UV762）。
2 实验方法
2.2.1 样品处理
干燥刺五加叶粉碎、混匀、过筛，将粉末分为粗粒（通
过 10 目筛未通过 40 目筛）、中粒（通过 40 目筛未通过 80
目筛）和细粒（通过 80 目筛）三组。分别取不同粉碎程度
的干燥刺五加叶粉末，浸泡于石油醚（ b.p. 60- 90℃）中，
室温放置 3h 后，倾去浸提液，再加石油醚浸泡，反复多次，
至浸提液无色，完全去除叶绿素。倾去浸提液，样品置于通
风处干燥至无醚味，再用烘箱 60℃烘至恒重， 放置于干燥
器中保存。
2.2.2 总黄酮的提取
精确称取干燥的刺五加样品 25.0g 放入索氏提取器中，
在蒸馏瓶中加入 85% 乙醇 200mL，水浴回流提取。提取完
毕后将提取液减压浓缩至干，用 70% 乙醇定容至 250mL，
待测。
2.2.3 标准曲线的绘制
准确称取干燥至恒重的芦丁标准品 0.0760g，用 70% 乙
醇溶解，转入 250mL 容量瓶中，用 70% 乙醇定容，摇匀备
用（此溶液浓度为 0. 3040mg/ mL）。准确移取上述芦丁溶
液 0mL、0.04mL、0.80mL、1.20mL、1.60mL 和 2.00mL 于
25mL 锥形瓶中，加入 70% 乙醇至 12.5mL， 加 5% NaNO2
溶液 0.8mL，放置 5min，加 5% Al( NO3 ) 3 溶液 0.8mL，放置
6min，加 4% NaOH 5mL 溶液，用 70% 乙醇稀释至刻度，放
置 10min，于 510nm 处测定吸光度，绘制校准曲线。回归方
程为 A = 0. 0817C- 0. 0602， 相关系数为 r= 0. 9995。
2.2.4 总黄酮的测定
准确移取 0.2mL 待测提取液于 25mL 锥形瓶中，加入
70% 乙醇至 12.5mL，加 5% NaNO2 溶液 0.8mL，放置 5min，
加 5% Al( NO3 ) 3 溶液 0.8mL，放置 6min，加 4% NaOH 5mL
溶液，用 70% 乙醇稀释至刻度，放置 10min，于 510nm 处
测定吸光度。
3 结果
实验结果见附表 :
附表 刺五加不同粉碎粒度、不同提取时间总黄酮提取量
提取时间与试验组别 总黄酮提取量（mg/g）
1 2 3 平均
1h 粗粒 8.37 7.98 8.05 8.13
中粒 13.08 14.04 13.17 13.43
细粒 17.56 16.89 17.33 17.26
3h 粗粒 17.26 17.59 16.83 17.23
中粒 20.73 21.35 21.26 21.11
细粒 24.85 25.21 25.32 25.13
5h 粗粒 22.25 23.19 23.82 23.09
中粒 25.56 25.73 25.88 25.72
细粒 26.30 25.98 27.01 26.43
10h 粗粒 27.21 28.05 27.37 27.54
中粒 28.46 27.76 28.73 28.31
细粒 28.77 28.04 29.01 28.61
从附表实验结果可知 : 粗粒、中粒、细粒三组数据存在明显
差异（P ＜ 0.05）。说明刺五加叶的不同粉碎粒度对总黄酮
提取影响显著。在同一提取时间下，细粒总黄酮提取量最高。
提取时间越长，总黄酮提取量越高，呈正相关关系。提取时
间 1 小时与 3 小时相比，差异显著；3 小时与 5 小时、10 小
时相比，差异较小。见附图 :
临床研究· ·
（下转第 135 页）收稿日期 :2012-06-28
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沉淀固定的原理就是通过沉淀蛋白质达到固定目的；交联固
定的原理是通过与氨基酸形成交联达到固定目的。在一般操
作常规中，冰醋酸、苦味酸、乙醇、丙酮等都被当作沉淀固
定剂应用，甲醛、戊二醛等都都被当作交联固定剂应用。冰
醋酸的固定原理就是利用其酸性沉淀蛋白质，抑制细菌和酶
的活性，防止自溶，且分子量小，穿透力强，但不能保存糖，
也不能固定脂肪和类脂，固定高尔基复合体不能用高浓度醋
酸，可以较好地保存染色体结构，可以把未分裂细胞核的染
色质沉淀为块状体，清楚显示细胞核，组织膨胀明显，但是
经过乙醇脱水后，形态较好。而甲酸既含有酸根，又有醛基，
因此既可以利用酸来沉淀蛋白质，又可通过醛基与氨基酸进
行交联，但是更多表现为利用酸性沉淀蛋白质。同冰醋酸一
样，对脂肪和类脂的固定不理想，高尔基复合体、染色体效
果较好，糖的保存优于冰醋酸，组织在固定时膨胀，脱水后
形态恢复。由于资料中对于甲酸的固定作用未加以提及，因
此各个病理实验室现在也没有过多应用，而笔者在工作中，
考虑冰醋酸的刺激性远远大于甲酸，对实验室和周围环境的
扩散影响小于冰醋酸，因此在实验中采用甲酸作为固定剂，
经实验证明 : 甲酸作为固定剂在实验室是可靠的。
在浓度的选择上，甲醛作为固定液浓度为 4%，笔者结
合甲酸的 pka 值为 3.75，而冰醋酸的 pka 值为 4.75，甲酸的
酸性强于冰醋酸，作为固定液的冰醋酸浓度为 5%，因此选
择 3% 的甲酸作为固定剂，在应用中证明是成功的。
参 考 文 献
[1] 刘盛 .病理学技术 [M]. 第一版 .北京 :人民卫生出版社 ,2008:78.
[2] 颜朝国 .有机化学 [M]. 第一版 .北京 :化学工业出版社 ,2009:99.
[3] 张曼夫 . 生物化学 [M]. 第一版 . 北京 : 中国农业大学出版
社 ,2002:86.
（高娟 编辑 ）
（上接第132页）
和 ET 在窒息程度越重的状态下，越呈明显的升高，AVP 在
机体有缺氧情况时大量进入血液，造成血管收缩，进而对组
织器官造成缺氧性损害。肾脏在人体的血流量呈较高水平，
为心排血量的 20%-25%，显著高于其它脏器血量，故对缺
氧缺血有高度敏感性。肾血流量在新生儿期较少，在 1 周内
为心排出量的 8%-12%，因血液在窒息后重新分布，显著减
少了肾血流量，是造成肾脏损害的主要因素。故肾脏功能在
窒息发生时受的影响较大，且通常先发生脑损伤。与轻度窒
息儿比较，正常新生儿尿素氮、血肌酐较低 [3]。统计学分析
差异有统计学意义。机体白蛋白在缺氧时代谢显著增加，并
降低了肾小球滤过率，使肌肉组织发生损伤，加大了肌酐、
肌红蛋白的释放，明显升高了尿毒氮、血肌酐的水平。
多巴胺属人类内源性儿茶酚胺，是去甲肾上腺素生物
合成的基础，在新生儿重度窒息且有肾功能损害中采用多
巴胺的治疗原理为 :（1）使血管中的多巴胺受体兴奋，对肠
系膜血管产生扩张作用，使肠壁微循环明显改善，对肠功能
的恢复有显著促进作用；（2）使肾脏的多巴胺受体激活，
对肾血管有明显舒张作用，增加肾小球滤过率及肾血流量，
明显改善肾功能，使尿量显著增加 [4]；（3）对心脏 β1 受
体和多巴胺受体有明显兴奋作用，增加了心输出量与心悸心
缩力，当血压 >6.67kPa，心率维持在 120 次 /min 以上时，
各脏器的血流量可得到保障，促进了各个脏器功能的恢复。
另外多巴胺对胃肠道正常灌注未构成影响，使胃肠道血供改
善，对内源性胃肠细胞有明显改善作用，使胃黏膜防御功能
增强，加速了胃损害的恢复。
本次研究中，对尿毒氮、血肌酐在入院第 3-7 天复查，
均呈正常恢复，提示肾小球滤过功能发生的障碍属一过性，
在纠正缺氧情况后可立即呈正常恢复，肾脏功能损害在窒息
后多无明显早期临床症状，易被忽视。故需加强窒息患儿肾
功能和尿量的监测，以及时发现并处理异常，以便宜对肾功
能损害及时检出，争取得到有效的治疗。多巴胺具有较短的
半衰期，起效迅速，早期可持续滴注。故重度窒息患儿早期
采用小剂量多巴胺治疗，可显著降低肾、胃肠等脏器损害，
缩短病程、使病情得到最大限度的缓解，提高疾病治愈率，
使家庭的经济负担减轻，值得在临床推广应用。
参 考 文 献
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中华儿科杂志 ,1997,35(3):1 38-141.
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人民卫生出版社 ,2001:96.
（高娟 编辑 ）
（上接第133页）
4 讨论
考虑到原料利用率和生产成本因素，建议生产上采用粉
碎刺五加叶为细粒（通过 80 目筛）、提取时间为 3h，总黄
酮提取可达到 25.13 mg/g。
参 考 文 献
[1] Qiming Liang,Xiaofeng Yu,Shaochun Qu,et al.Acanthopanax
senticosides B ameliorates oxidative damage induced by hydrogen
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（高娟 编辑 ）