全 文 ：were calculated by DAS 2． 1． 1． Result The calibra-
tion curve of tryptanthrin was linear in the range of
0. 0183 ～ 1. 1712 mg·L －1，with the correlation coeffi-
cient of 0. 999． The lower limit of quantitation was
0. 02 mg·L －1 ． The intra-and inter-day precision of
the method were smaller than 8% ． The main pharma-
cokinetic parameters of tryptanthrin after oral adminis-
tration to female and male rats at a single dose of 56
mg·kg －1 were evaluated，which T 1
2
were 4. 314 and
5. 597 h，Tmax were 5. 2 and 4. 6 h，Cmax were 1. 887
and 2. 620 mg·L －1，AUC0→t 12. 1 and 14. 70 mg·h
· L －1，respectively． Conclusion The developed
method is sensitive，selective and simple and has been
successfully applied to the pharmacokinetic study of
tryptanthrin．
Key words:tryptanthrin;HPLC;pharmacokinetics;
cinnamaldehyde;plasma concentration;rats
网络出版时间:2012 － 2 － 8 9:48 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． R． 20120208． 0948． 001． html
裂褶菌胞外多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆
及代谢产物的影响
陈 莹，才 媛，王 琦
(吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心，吉林 长春 130118)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2012． 02． 028
文献标识码:A 文章编号:1001 － 1978(2012)02 － 0274 － 04
中国图书分类号:R-332;R338． 64;R343． 9;R378． 99;R339． 38
摘要:目的 研究裂褶菌(Schizophyllum commne Fr)胞外多
糖(SPG)对 D-半乳糖致衰老小鼠各项指标的影响。方法
建立 D-半乳糖衰老小鼠模型，以其学习记忆成绩，免疫器官
指数，血清、肝、脑中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛
(MDA)含量，脑中单胺氧化酶(MAO)活力，肝、脑细胞线粒
体 DNA含量为指标，对 SPG 的抗衰老作用进行研究。结果
与模型组比较，SPG 可恢复 D-半乳糖致衰老小鼠的学习
记忆能力;拮抗免疫器官萎缩;提高其血清、肝和脑中 SOD
活性;减少 MDA 在体内积累;抑制脑中 MAO 活性;降低肝、
脑细胞线粒体 DNA 相对含量。最适剂量为 200 mg·kg －1。
结论 高剂量 SPG具有明显抗衰老作用(P ＜ 0. 01) ，且具有
靶向性，对血清和肝组织的抗衰老作用较强，对大脑的改善
作用不如前者。
关键词:裂褶菌胞外多糖;衰老;D-半乳糖;学习记忆能力;超
氧化物歧化酶;丙二醛;单胺氧化酶;线粒体 DNA含量
1969 年，N． Komatsu 等从裂褶菌中分离提取到
收稿日期:2011 － 09 － 09，修回日期:2011 － 11 － 13
基金项目:吉林省科技厅重点项目(No 20090901)
作者简介:陈 莹(1987 －) ，女，硕士，研究方向:药用菌物学，E-
mail:cynthiachen0614@ gmail． com;
王 琦(1963 －) ，女，博士，教授，博士生导师，研究方向:
药用菌物学，通讯作者，Tel:0431-84533269，E-mail:
qwang2003@ hotmail． com
了裂褶菌胞外多糖，裂褶菌素(schizophyllan，简称
SPG) ，并证明了它具有明显的抗肿瘤活性［1］。1986
年，日本台糖科研制药成功地运用深层发酵技术进
行大规模工业化生产裂褶多糖，其注射针剂“施佐
非兰”已广泛应用于子宫颈癌的临床治疗［2］。90 年
代初，夏冬、李兆兰等［3］较为全面地研究了裂褶菌
胞内、胞外多糖对小鼠免疫功能的影响，特别是对老
年性免疫功能缺陷的影响，结果表明裂褶菌胞内、胞
外多糖可恢复老年动物低下的细胞免疫及体液免疫
功能，对延缓衰老可能有一定的意义。本文通过建
立 D-半乳糖亚急性衰老模型，检测和分析各项衰老
指标，从非免疫角度探讨了 SPG 的抗衰老作用，为
其进一步开发提供理论依据。
1 材料
1． 1 动物 昆明小鼠，♂，体质量(20 ± 2)g，长春
高新医学实验动物中心提供，合格证号:10-5113。
在实验条件下饲养 7 d以适应环境。
1． 2 裂褶菌多糖 裂褶菌菌株购于四川省绵阳市
食用菌研究所，采用液体深层发酵，26℃，10 d，分离
发酵液与菌丝体，浓缩发酵液，加 95%乙醇，4℃放
置 24 h，离心，沉淀经无水乙醇、丙酮依次洗涤。加
水复溶，Sevag 法脱蛋白，醇沉，复溶，去离子水透析
24 h，醇沉，沉淀经无水乙醇、丙酮依次洗涤，真空干
燥至恒重，得裂褶菌胞外多糖(SPG)。SPG 为白色
粉末，溶于水，不溶于乙醇、乙醚、丙酮等有机溶剂。
pH中性。测得多糖含量为 90. 25%，蛋白质含量为
3. 15%。
1． 3 药品与试剂 D-半乳糖，批号:20070908，中国
·472· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Feb;28(2) :274 ～ 7
(上海)惠世生化试剂有限公司。维生素 E 胶丸，批
号:20100902，上海东海制药股份有限公司。超氧化
物歧化酶(SOD)试剂盒，批号:20110613;丙二醛
(MDA)试剂盒，批号:20110613;单胺氧化酶(MAO)
试剂盒，批号:20110615，均为南京建成生物工程研
究所产品。其余试剂均为国产分析纯。
1． 4 仪器 Morris 水迷宫，成都泰盟科技有限公
司。Z-36HK 型高速低温离心机，德国 HERMLE。
T6 新世纪紫外可见分光光度计，北京谱析通用仪器
有限责任公司。
2 方法
2． 1 分组及给药［4］ 昆明小鼠 72 只，随机分成 6
组，即空白组、模型组、VE组、SPG高剂量组、SPG中
剂量组、SPG低剂量组。除空白组外，每天腹腔注射
D-半乳糖(100 mg·kg －1·d －1)建立亚急性衰老小
鼠模型，空白组给予等量生理盐水。造模同时按相
应剂量灌胃给药，空白组和模型组给予等量 0. 5%
CMC-Na溶液。连续造模及给药 42 d。
2． 2 Morris水迷宫试验 d 37 开始进行定向航行
试验。将小鼠分别在 3 个不同象限头朝池壁放入水
中，记录 120 s内成功找到平台的时间(即逃避潜伏
期，Escape latency) ，如在 120 s 内不能找到平台，则
将其引导至平台，停留 10 s，并将 EL 记录为 120 s。
连续训练 5 d，每天 2 次，每次间隔为 10 min。d 42
进行空间探索试验。将平台撤除，在第 3 象限(原
平台象限对侧)将小鼠头朝池壁放入水中，记录 120
s内小鼠在原平台象限的游泳时间和跨越平台次
数。
2． 3 小鼠血清、肝和脑组织中 SOD 活性、MDA 含
量和MAO活性的测定 d 43，眼球取血，获得小鼠
血清。脱臼处死，迅速取出肝和脑组织，用冰生理盐
水制成 10%(W/V)组织匀浆。按照试剂盒说明进
行测定。
2． 4 小鼠肝、脑细胞线粒体 DNA 含量的测定 迅
速称取 1 g肝和 0. 3 g 脑组织，剥离干净，冰生理盐
水冲洗，滤纸吸干，液氮冻存，采用 SDS 碱变性法提
取 mtDNA［5］。提取物用 100 μl TE 溶解，紫外分光
光度计测定 A260nm和 A280nm值，计算 DNA含量。
2． 5 统计学处理 数据以珋x ± s表示，以组间 t检验
进行统计处理。
3 结果
3． 1 裂褶菌胞外多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠免疫
器官的影响 与空白组相比，模型组小鼠的免疫器
官出现了明显萎缩(P ＜ 0. 01)。不同剂量的 SPG对
衰老小鼠的免疫器官萎缩具有明显的抑制作用，其
中高剂量组与模型组差异最明显(P ＜ 0. 01) (如
Tab 1)。
Tab 1 Effects of schizophyllan on indexes of thymus
and spleen of aging mice treated with D-galactose(珋x ± s，n = 12)
Group
Dose /
mg·kg －1
Thymus index /
mg·g － 1
Spleen index /
mg·g － 1
Control 2． 14 ± 0． 21 4． 36 ± 0． 79
Model 1． 58 ± 0． 16＊＊ 3． 54 ± 0． 48＊＊
VE 100 1． 99 ± 0． 15▲▲ 4． 20 ± 0． 61▲▲
SPG-H 200 2． 29 ± 0． 19▲▲ 4． 57 ± 0． 69▲▲
SPG-M 100 2． 03 ± 0． 22▲▲ 4． 22 ± 0． 83▲
SPG-L 50 1． 77 ± 0． 17＊＊ 3． 84 ± 0． 68
* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01 vs control group;▲P ＜ 0. 05，▲▲P ＜ 0. 01
vs model group
3． 2 裂褶菌胞外多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠空间
学习记忆能力的影响 如 Fig 1 和 Tab 2 所示，模型
组小鼠出现了明显的空间学习记忆障碍(P ＜
0. 01)。不同剂量的 SPG可一定程度地提高衰老小
鼠在目标象限游泳的时间(P ＜ 0. 05)。
Fig 1 Effect of schizophyllan on escape latency of aging mice
treated with D-galactose in Morris water maze test(珋x ± s，n = 12)
Tab 2 Effects of schizophyllan on the percentage of the time spent
in target quadrant and the number of cross the platform of aging
mice treated with D-galactose in Morris water maze test(珋x ± s，n =12)
Group
Dose
/mg·kg －1
Percentage of the time
spent in target quadrant /%
Number of cross
the platform/Times
Control 63． 5 ± 7． 7 5． 71 ± 1． 70
Model 45． 3 ± 8． 4＊＊ 3． 22 ± 1． 64＊＊
VE 100 52． 4 ± 11． 5* 4． 00 ± 1． 67*
SPG-H 200 52． 5 ± 8． 0＊＊▲ 4． 14 ± 1． 77*
SPG-M 100 51． 9 ± 5． 8＊＊▲ 3． 86 ± 1． 21＊＊
SPG-L 50 51． 5 ± 4． 8＊＊▲ 3． 66 ± 1． 64＊＊
* P ＜ 0. 05，＊＊ P ＜ 0. 01 vs control group;▲ P ＜ 0. 05 vs model
group
3． 3 裂褶菌胞外多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠脑中
MAO活性的影响 与空白组相比，模型组小鼠脑
组织内产生了大量 MAO(P ＜ 0. 01)。不同剂量的
SPG可使衰老小鼠脑内 MAO 水平有一定程度地降
低。其中高剂量组与模型组差异有显著性(P ＜
0. 05) (如 Tab 3)。
·572·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Feb;28(2)
Tab 3 Effect of schizophyllan on the activity of MAO in brain
of aging mice treated with D-glactose(珋x ± s，n = 12)
Group Dose /mg·kg －1 MAO /U·mg －1 Pro
Control 6． 14 ± 1． 32
Model 9． 48 ± 2． 14＊＊
VE 100 7． 58 ± 1． 73＊▲
SPG-H 200 7． 13 ± 2． 01▲
SPG-M 100 7． 62 ± 1． 57＊▲
SPG-L 50 8． 77 ± 2． 27＊＊
* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01 vs control;▲P ＜ 0. 05 vs model
3． 4 裂褶菌胞外多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠血
清、肝和脑中 SOD 活性、MDA 含量的影响 与空
白组相比，模型组小鼠血清、肝和脑内 SOD 活性受
到抑制，并产生了大量的 MDA(P ＜ 0. 01)。不同剂
量的 SPG 可恢复并提高其 SOD 活性，减少并抑制
MDA积累，其中高剂量 SPG对血清及肝的保护作用
与模型组相比差异有极显著性(P ＜ 0. 01) (如 Tab
4)。
3． 5 裂褶菌胞外多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠肝、
脑细胞中 mtDNA 含量的影响 与空白组相比，模
型组小鼠肝、脑细胞中 mtDNA 的含量明显增加(P
＜ 0. 01)。SPG可使其有不同程度的减少，其中，高
剂量组小鼠的肝细胞 mtDNA 含量与模型组相比差
异有极显著性，(P ＜ 0. 01) ，如 Fig 2。
4 讨论
D-半乳糖亚急性衰老模型是根据衰老的代谢紊
乱学说建立的［6］，长期注射 D-半乳糖，会引起全身
代谢紊乱，表现为记忆力减退，免疫器官退化，自由
基堆积，过氧化脂质增加，B 型单胺氧化酶活性升
高，这些变化与老龄小鼠相似［7］。因此广泛应用于
药物的抗衰老研究。本实验证实了 D-半乳糖所致
衰老小鼠的上述病理改变，模型组小鼠表现出明显
的免疫器官萎缩，学习记忆障碍，血清、肝、脑组织中
SOD活性降低，大量 MDA 积累，脑组织 MAO 水平
升高，肝、脑细胞中 mtDNA含量增加(P ＜ 0. 01)。
自由基学说是目前较为公认的衰老机制理论。
1956 年，Harman［8］提出了衰老的自由基学说，他认
为衰老是由自由基引起的组织随机毒害的结果。
SOD是体内清除氧自由基的关键酶，其活性间接反
映了机体清除氧自由基的能力;MDA 是自由基诱导
的脂质过氧化反应产物，其含量高低间接反映细胞
受自由基攻击的严重程度［9］。实验结果表明，SPG
对 D-半乳糖致衰老小鼠血清、肝和脑中 SOD活性的
恢复作用具有靶向性和量效关系，对 MDA 生成的
抑制作用则未表现出明显规律。
Fig 2 Effects of schizophyllan on the contents of mtDNA in
liver and brain of aging mice treated with D-glactose(珋x ± s，n = 12)
* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01 vs control group;▲P ＜ 0. 05，▲▲P ＜ 0. 01
vs model group
学习记忆能力和脑组织内 MAO 活性是判断大
脑衰老的重要指标。人脑组织内氧化儿茶酚胺等单
胺类递质 MAO活性在 45 岁以后随年龄增长而急剧
增加［10］。实验结果表明，与 SPG 对 D-半乳糖致衰
老小鼠血清和肝的明显的保护作用相比，其对大脑
衰老的改善作用并不明显。
关于 mtDNA突变与衰老关系的研究中，与增龄
相关的 mtDNA含量的变化报道较少［11］。mtDNA缺
失发生率及相对含量均随增龄而增加［12］。实验结
果表明，高剂量 SPG 可一定程度地恢复肝、脑细胞
中 mtDNA含量，其中对肝脏的作用较明显。
综上所述，SPG对D-半乳糖致衰老小鼠具有一
Tab 4 Effects of schizophyllan on the activity of SOD and the content of MDA in serum，
liver and brain of aging mice treated with D-glactose(珋x ± s，n = 12)
Group
Dose /
mg·kg －1
Serum
SOD /kU
·L －1
MDA /μmol
·L －1
Liver
SOD /kU
·g － 1 Pro
MDA /μmol
·g － 1 Pro
Brain
SOD /kU
·g － 1 Pro
MDA /μmol
·g － 1 Pro
Control 192． 6 ± 15． 2 5． 12 ± 0． 49 383． 7 ± 29． 7 8． 22 ± 1． 14 163． 4 ± 8． 0 10． 56 ± 1． 72
Model 170． 7 ± 9． 0＊＊ 6． 64 ± 1． 22＊＊ 265． 3 ± 27． 2＊＊ 12． 91 ± 1． 81＊＊ 141． 2 ± 8． 3＊＊ 13． 78 ± 2． 06＊＊
VE 100 195． 9 ± 21． 4▲▲ 5． 73 ± 1． 16 380． 7 ± 24． 0▲▲ 8． 76 ± 2． 92▲▲ 156． 9 ± 6． 1＊▲▲ 10． 70 ± 1． 83▲▲
SPG-H 200 221． 6 ± 14． 6＊＊▲▲ 5． 14 ± 0． 84▲▲ 381． 8 ± 28． 4▲▲ 8． 32 ± 2． 63▲▲ 149． 6 ± 8． 4＊＊▲ 10． 12 ± 2． 16▲▲
SPG-M 100 208． 5 ± 21． 6＊▲▲ 5． 57 ± 0． 66▲ 375． 8 ± 19． 6▲▲ 9． 60 ± 1． 04＊＊▲▲ 144． 7 ± 6． 1＊＊ 11． 95 ± 1． 52＊▲
SPG-L 50 185． 0 ± 14． 4▲▲ 6． 24 ± 0． 75＊＊ 335． 3 ± 22． 6＊＊ 11． 12 ± 2． 03＊＊▲ 141． 5 ± 8． 7＊＊ 12． 21 ± 1． 41＊▲
* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01 vs control group;▲P ＜ 0. 05，▲▲P ＜ 0. 01 vs model group
·672· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Feb;28(2)
定的抗衰老作用，最适剂量为 200 mg·kg －1。其抗
衰老作用具有靶向性，对血清和肝组织的作用较明
显，对大脑的保护作用则不如前者。本实验基于自
由基学说对 SPG的抗衰老作用进行研究，虽得到的
结果与夏冬一致，但作用并不如其报道突出，原因可
能是 SPG属于免疫活性多糖，主要仍是通过调节免
疫功能间接发挥抗衰老作用。
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Effects of schizophyllan on learning and memory capacity and related
substances of aging mice treated with D-galactose
CHEN Ying，CAI Yuan，WANG Qi
(Engineering Research Center of Chinese Ministry of Education for
Edible and Medicinal Fungi，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China)
Abstract:Aim To study the effects of schizophyllan
on various aging indicators of mice treated with D-ga-
lactose．Methods Aging model was established by i．
p． D-galactose，taking learning and memory results，
indexes of immune organs， activities of SOD and
MAO，contents of MDA and mtDNA in serum，liver
and brain as indicators． Results Compared with mod-
el group，SPG could recover learning and memory ca-
pacity，resist immune organs atrophy，enhance the ac-
tivity of SOD，inhibit the activity of MAO，and reduce
the content of MDA and mtDNA in serum，liver and
brain of aging mice． The optimum dosage was 200 mg
·kg －1 ． Conclusions High dose of SPG has remarka-
ble anti-aging effect (P ＜ 0. 01)． The targeted effects
on serum and liver are much more significant than
those on brain．
Key words:schizophyllan;aging;D-galactose;learning
and memory capacity;SOD;MDA;MAO;content of
mtDNA
·772·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Feb;28(2)