全 文 ：山西大学学报 一九八五年第四期
裂褶菌的分离 、 培养和生物学性状
李兆 兰
( 南京大学生物系 )
裂褶多糖 (简称 S P G ) 是由高等真菌裂褶菌 ( S ehi z o p hy l l um eo m m un eF r . )
所产生的一种多糖 ( 1) , 国外在它的细胞免疫和抗肿瘤活性方面的研究已取得成果 的 报
导 。 在提高细胞免疫功能方面可促进免疫球蛋白的形成 ( “ ) , 增强迟发 型 皮 肤 变 态 反
应 ( 8) , 抑制巨噬细胞的移动 ( 4) , 增强巨噬细胞的吞噬功能 , 提高白鼠抗绿脓杆菌 , 抗
结核杆菌 , 抗肺炎杆菌的效能 ( 6 ) 。 裂褶多糖还能抑制 4 种动物肿瘤生长 , 即 S a 。 。 m a一
1 8 0
,
s a e o m a一 3 7 ; E h r l i e h C a r e i n o m a ; Y o s h id a S a e o m a , 它的作用机理为介导性
的 。 另外它与抗菌素一链霉素 , 利福平 、 庆大霉素等任何一种联合使用要优 于 单 独 用
药 , 可提高抗菌素效用和降低抗菌素的毒副反应 。
裂褶菌在国内广泛分布于各地 , 为一种主要药用多糖资源 , 为了开发新药和扩大药
源 , 本实验对裂褶菌进行了分离 , 获得了南大 8 35 , 南大8 43 两支菌株 。 通过培养观察 ,
了解了它们的生物学性状。
菌种分离
1 9 8 3年 5 月从南京灵谷寺阔叶树腐木上采得裂褶菌子实体 , 通过组织分离获得一个
菌株编号南大 8 35 , 后于 1 9 8 4年 3 月从南京大学校园内阔叶树腐木上采得裂褶菌子实体
用同样方法分离获得另一个菌株 , 编号南大8 4 3( 图 1 ) 。 组织分离是获得优良菌株 较 简
单而有效的方法 , 能保持原菌种的优 良性状 , 纯菌种后代不易发生变异 , 性状稳定 。 . 组
织分离的步骤是将子实体用千分之一的升汞进行表面灭菌 , 时间 5 分钟 , 然后用无菌水
冲洗数次 , 用灭菌刀片将子实体切成 0 . 2 平方 m m 的小块 , 用灭菌镊子将小块 移 植 到
P O A 或麦芽汁斜面培养基上 , 24 ℃培养 , 数天后从小块上长 出白色绒毛状 菌 丝 , 10 天
左右菌丝布满斜面 。 从灵谷寺采集的子实体总共分离了20 管 , 选出 10 管长势好的进行纯
化扩 大 , 从南京大学校 园采集子实体分离 30 管 , 挑选 20 管进行纯化扩大培育 , 条件与上
述相 同 , 菌落长成后放 0一 20 ℃冰箱中保存备用 。
DOI : 10. 13451 /j . cnki . shanxi . uni v ( nat . sci . ) . 1985. 04. 012
二 、 菌种鉴定及生物学性状
菌丝体 : 菌落在马铃薯葡萄糖琼脂上广铺 , 于 20 ℃ 、 1。天 , 直径达 15 一 20 〕m m , 白色 ,
绒毛状 , 撒密 , 紧贴基质 。 菌落反面淡黄色 , 显微镜观察菌丝透明无色 , 分枝繁茂 , 具
横隔 , 菌丝粗 1 . 0一 1 . 7拜m 。 扫描电镜观察锁状联合明显 (图 6 ) , 液体发酵培养形 成 1较
多锁状联合 , 菌丝亦较粗壮 1 . 3 一 2 . 49 拼贝 。
菌球 : 南大 8 3 5 、 南大 84 3菌株进行摇瓶振摄培养 , .选用黄豆粉或蛋白陈培养基 , 在 26 ℃
中振擞培养 2 天 , 菌丝纵横交落 缠结成许多小菌球 ( 图 7 )质地胶粘 , 白色 , 一般直径
为 1 . 5一 2 . sc m , 亦有小至 0 . 3。 m大至 3 . 5。 m , 少数菌球表面具短绒毛状或放射状毛刺 ,
如静止培养则不形成菌球。
子实体 : 两个菌株分别被培养在木屑熬皮培养基上 (阔叶树木屑 70 一 80 % , 细米糠或鼓
皮20 一 28 % , 硫酸钙 1 % , 蔗糖 1 % , 水调至适温 , 26 ℃ , 菌丝 生 长 旺盛 , 整齐 , 洁
白 , 上下分布均匀。 经 15 天的培养 , 南大 8 4 3万的生长速度超过南大 83 5 , 前者菌丝柱高
1 cZ m
, 后者菌丝柱高 gc m (图 4 ) , 此时南大 8 43 形成子实体原基 (图 2 ) , 初为珊瑚状 ,
后膨大成许多囊状 , 顶端裂开成一圆孔 , 继之 , 从囊状物的侧面似荚果状的裂开 , 展成
蒲扇形的子实体 (图 3 ) , 子实体必须在通气的条件下才能形成 , 否则菌丝体不发育成子
实体 , 所以菌丝体成熟后必须拔去瓶塞 , 或将菇瓶的侧面敲破 , 使培养基暴露于空气 ,
就能很快长出子实体原基 , 再由原基分化成子实体 。 南大 84 3 形成原基和子实体的时间
比南大 8 35 早 , 前者形成原基的时间为 15 天 , 、 形成子实体的时间为 25 天 , 后者分别为 50
天和 60 天 (图 5 ) 。 两个菌株的子实体形态相同 , 在基物上呈覆瓦状 丛 生 ; 无 柄 ; 菌 盖
宽 1一平m , 质韧 ; 白.色至灰白色 , 上有绒毛或粗毛 , 扇形或肾形 , 边缘内卷 , 具多数裂
瓣 ; 菌褶窄 , 从基部辐射而出 , 自色 , 灰白色或灰褐色 , 沿褶缘纵裂而反卷 , 抱子印白
色 , 抱子透明无色 , 圆柱形 , 有一斜尖 。 一
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勺
四 、 菌种液体发酵培养
. 培养条件及测定方法 ( ” )( 10 ) . .
培养基 ( 1 )蛋白陈培养基 (蛋白脉 5 9 , 葡萄 糖 4 0 9 , K H Z p o ` 2 9 , M g s o ` · 7 H 2 0
1 0
.
5 9 , N a N o
。 3 9 , K C I 0
.
5 9 , F e S O
; · 7 H
2
0 工o m g ,水 z 0 0 0m l ) 。 ( 2 ) 黄豆粉培养基
(黄豆粉 g5 , 葡萄糖 3 09 , 酵母膏2 9 , K H Z P O ` 1 9 , 水 1。。。m 功
摇瓶机 往返式摇瓶机转速 1 0 次 /分 , 旋转式摇瓶机 1 80 转 /分 。 5 0 m l 摇瓶装液量
2 5 0二 1, 2 5 o m l 摇瓶装液量 s o m l , 接种量 2 0% 。
温度 24 一 26 ℃ 。 p H 6左右 。
测定方法 ( 1 )菌丝体湿重 ( g / I OOm l) 将发酵菌液减压抽滤或用离心机 ( 3 0 0 0转 /分 )
离心 20 分钟 , 称菌丝湿重 ; ( 2 )菌丝干重 ( g / 1。。m l) 取湿菌丝置 1 0 ℃ 的真空干燥箱恒重
后称其重量 ; ( 3 )还原糖用葱酮 比色空糖法测定 ; ( 4 )氨基氮用甲醛滴定氨基法测定 。
2
. 不同培养基对菌丝产量的影响
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南大 835 被培养在黄豆粉和蛋白陈液体培养基上 , 26 ℃经 5 天 ,菌丝在黄豆粉培养基
上的长势优于蛋 白陈培养基 , 粗 1 . 50 一 2 . 49 拼m , 菌球直径 力. 3一 3 . sc m , 菌 丝 体 湿 重
6 8
.
0 9 / I OOm l
。 蛋白陈培养基上生长的菌丝粗 1 . 30 一 1 . 6即 m , 菌球直径 0 . 3一 1 . sc m ,
菌丝体湿重 4 2 . 3 9 / 1 0Om l 。 工厂常用培养基除以上二种外还有花生饼粉 、 玉米粉等培 养
基 , 但据报导花生饼粉和玉米粉的黄曲霉毒素检出率较高 , 检出量亦较大 ; 而黄豆粉检
出百分率与检出量均较低 , 故工厂培养裂褶菌亦选择黄豆粉培养基 。 -
表 1 蛋白陈 和黄豆粉培养基对菌丝产通的比较
协丝ha 羊辈是…· 蛋 。 。 培 养 基 … , 豆 粉 培 , 基竺塑竺止翌竺当一编一一一一一二一` 二一扁一一`二` 一
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.发酵液中 C 、 N 消耗与发酵周期的控制 (图 3 ) ·
南大 83 5菌株在黄豆粉液体基上振摄培养 , 随着发酵时间延长 , 发酵液中还原糖 ,
氨态氮 , p H 都逐渐降低 , 菌丝体生长量则不断增加 。 发酵至第 5 天 , 还原糖 降 到 1 %
以下 , 氨态氮降到 15 % , p H 下降至 4 . 9 。 菌丝体的干重从第 4 天至第 5 天的差值来看几
乎不再增加了 , 此时可终止培养 , 故裂褶菌的发酵周期可定为 5 天 。
表 2 裂褶菌培养的发酵液中 C 、 N 消耗测定
培 养 时 间 还 原 糖 g / 1 0 0 m l 氨态氮 m g / 1 0 0m l p H
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2 4小时
4 8小时
7 2小时
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图 6 部分放大 图 7 南大 8 43 在振烦培养下形成菌球
。
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M菌丝千重 % N 氨基氮m g / I Oo m l
C 还原糖 % T 培养时间 (小时 )
图 8 裂褶菌发酵液中 C 、 N 消耗情况
摘 要
1
. 从南京灵谷寺及南京大学校园的腐木上采集裂褶菌子实体进行组织分离 , 获得两
支裂褶菌菌株 , 编号为南大 8 3 5 , 南大 8 4 3。
2
. 两支菌株在马铃薯葡萄糖琼脂上 24 ℃ 中生长旺盛 , 菌落纯白色 , 绒状 , 平坦 , 10
天直径达 15 一20 m m 。
3
. 在木屑培养基上 26 ℃中培养15 天 , 南大 8 35 菌株的菌丝柱高 gc m , 南大 8 43 的菌 丝
柱高 1 2 o m , 前者的子实体原基和子实体分化的时间分别为 50 天 、 60 天 , 后者的原基和子
实体的分化时间分别为 15 天和 20 天 。
4
。两个菌株摇瓶振擞培养时形成菌球 , 当菌球大量形成时 , 菌液由深变浅 , 由混浊
变清 , 粘度逐渐增加 。
5
. 黄豆粉培养基比蛋白脉培养基适于菌丝生长 。
6
. 在发酵液中当还原降到 1 % , 氨基氮降到 15 % , p H下降到 4 . 9时 , 此时可终止发
酵 , 发酵周期为 5天 。
参 : 考 . 文 . 献
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T h e F u n g i
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V o l
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IV A & B
.
A T a x o n o m i e R e
-
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.
T h e I s o l a t i o n
,
C u l t u r e a n d B i o l o g i e a l C h a r a e t e r o n
S e h i
z o p h y l l u m e o m m u n e
L ` C h a o la n
( D e r p a r t川 e o t o l B泣o lo g y , N a o j f n g U n 饭。 e r s i才y )
Ab s t r a e t
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