全 文 ：第３５卷，第１０期　 　　　　　　　　　　　光 谱 学 与 光 谱 分 析 Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１０，ｐｐ２８２０－２８２４
２　０　１　５年１　０月　　　　　　　　　　　 　Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ　ａｎｄ　Ｓｐｅｃｔｒａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　 Ｏｃｔｏｂｅｒ，２０１５ 　
分光光度法测定甜叶菊废渣中总黄酮的研究
罗序燕，方浩斌＊，黄瑞宇，赵东方，祝　婷，郭养养，曾益平，刘仁月，朱　东
江西理工大学冶金与化学工程学院，江西 赣州　３４１０００
摘　要　为建立测定甜叶菊废渣中总黄酮含量的方法，通过比较直接法、ＡｌＣｌ３ 法和 ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－
ＮａＯＨ法三种显色方法的紫外可见光谱，确定甜叶菊废渣中总黄酮含量测定的最佳方法为 ＮａＮＯ２－Ａｌ
（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ法。分析了测定波长，显色剂用量和反应时间、温度、ｐＨ等因素对测定的影响，并从浓度与
吸光度的线性关系，稳定性及加标回收率等方面对该法进行了系统研究，结果表明：在波长５００ｎｍ处，以
芦丁为标准品，在２～２４μｇ·ｍＬ
－１范围内呈良好的线性关系，线性相关系数Ｒ２＝０．９９９　５。样品加标回收率
在９６％～１０４．３％之间，相对标准偏差（ＲＳＤ）为３．７５％。ＮａＮＯ２ 和 Ａｌ（ＮＯ３）３ 的用量都为１．０ｍＬ，反应时
间都为６ｍｉｎ，ＮａＯＨ的用量为１５．０ｍＬ，反应时间为１５ｍｉｎ。整个显色过程温度为４０℃，ｐＨ为５，进一步
优化了ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ法测定甜叶菊废渣中总黄酮含量的工艺条件。该方法简便快速，重现性好，
准确度高，可用于实际检测工作。
关键词　甜叶菊废渣；总黄酮；分光光度法；显色条件
中图分类号：Ｏ６５７．３　　文献标识码：Ａ　　　ＤＯＩ：１０．３９６４／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－０５９３（２０１５）１０－２８２０－０５
　收稿日期：２０１４－０７－０１，修订日期：２０１４－１１－０６
　基金项目：国家自然科学基金项目（５１３６４０１４），江西省科技厅项目（２０１３ＢＢＧ７０００３）和２０１３年江西省级大学生创新创业训练计划项目
（２０１３１０４０７０３７，２０１３１０４０７０５７）资助
　作者简介：罗序燕，女，１９６３年生，江西理工大学冶金与化学工程学院教授　　ｅ－ｍａｉｌ：ｌｘｙｃｙｘ＠１６３．ｃｏｍ
＊通讯联系人　　ｅ－ｍａｉｌ：ｗｗｗｆｈｂ＠１２６．ｃｏｍ
引　言
　　甜叶菊废渣是甜菊糖生产工艺中排出的废弃物，其中含
有黄酮类化合物。黄酮类化合物是指由中央三碳链与两个苯
环连接在一起的一系列化合物，即以Ｃ６—Ｃ３—Ｃ６ 为基本碳
架，大多以２－苯基色原酮为基本母核的一系列化合物［１］，具
有抗癌［２］、抗菌［３］、抗氧化［４］、防心血管疾病［５］等功效。
测定黄酮类化合物的方法主要有分光光度法［６］、荧光光
度法［７］、液相色谱法［８］和毛细管电泳法［９］等。分光光度法以
其应用范围广、操作简单快速、设备成本低等优点被广泛使
用。其原理是利用黄酮类化合物与 Ａｌ　３＋形成的络合物［１０］或
其本身的特征峰［１１］来测定。目前，分光光度法在测定甜叶菊
废渣总黄酮时，各条件的优化筛选方面的研究还未见报道。
为此，本工作建立了一套适用于测定甜叶菊废渣中总黄酮含
量的方法。该法操作简便快速，重现性好，准确度高，可用
于实际应用当中。
１　实验部分
１．１　仪器与试剂
ＵＶ－２５５０紫外－可见分光光度计（日本岛津），ＷＦＪ－７２００
型可见分光光度计［尤尼柯（上海）仪器有限公司］。
甜叶菊废渣（提取甜菊糖后排出的废渣）：由江西省赣州
市某公司提供。芦丁对照品（纯度≥９８％，贵州迪大科技有
限责任公司）。所用试剂均为分析纯。
１．２　方法
１．２．１　直接测定法
按文献［１２］条件提取，取１００．０ｍｇ提取物置于１００ｍＬ
容量瓶中，用９５％的乙醇溶解得样品液。取１０．０ｍＬ样品液
于５０ｍＬ容量瓶，用９５％的乙醇定容至刻度。以不加样品液
为参比，用紫外可见分光光度计在２００～６００ｎｍ范围扫描。
取５．０ｍｇ芦丁对照品，置于２５ｍＬ容量瓶，用９５％乙
醇溶解并定容至刻度，得芦丁对照液，同样在２００～６００ｎｍ
范围扫描。
１．２．２　ＡｌＣｌ３ 显色法
取相同１０．０ｍＬ样品液于５０ｍＬ容量瓶，加入ｐＨ 为
３．６的 ＨＡｃ－ＮａＡｃ缓冲液３．０ｍＬ，摇匀后加入１０．０ｍｇ·
ｍＬ－１　ＡｌＣｌ３ 溶液２．０ｍＬ，摇匀后静置２０ｍｉｎ，９５％乙醇定容
至刻度，以不加样品液为参比，在３００～６００ｎｍ范围扫描。
用芦丁对照液代替样品液，按上述过程实验。
１．２．３　ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ法
取相同样品液于５０ｍＬ容量瓶，加入５０．０ｍｇ·ｍＬ－１
的ＮａＮＯ２１．０ｍＬ，摇匀，静置６ｍｉｎ；１００．０ｍｇ·ｍＬ－１的
Ａｌ（ＮＯ３）３１．０ｍＬ，摇匀，静置６ｍｉｎ；４０．０ｍｇ·ｍＬ－１的
ＮａＯＨ　１０．０ｍＬ，９５％乙醇定容至刻度，摇匀，静置１５ｍｉｎ。
以不加样品液为参比，在４５０～６００ｎｍ扫描。
用芦丁对照液代替样品液，按上述过程进行。
２　结果与讨论
２．１　测定方法与波长的选择
直接法测定的芦丁与样品液的紫外可见光谱对比图如图１。
Ｆｉｇ．１　ＵＶ－Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｒｕｔｉｎ
ｂｙ　ｄｉｒｅｃｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
１：Ｒｕｔｉｎ；２：Ｓａｍｐｌｅ
　　样品液在约２１０，２７０，３７０和４１０ｎｍ有吸收峰，芦丁在
约２６０和３６０ｎｍ有吸收峰，样品２１０和４１０ｎｍ的峰可能为
杂质峰，其余两峰位置虽在黄酮类化合物吸收峰范围内［１３］，
但与芦丁略有偏差且不明显，故不宜用直接法测定。
ＡｌＣｌ３ 法的对比图如图２。
Ｆｉｇ．２　ＵＶ－Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ａｎｄ
ｒｕｔｉｎ　ｂｙ　ＡｌＣｌ３ｍｅｔｈｏｄ
１：Ｒｕｔｉｎ；２：Ｓａｍｐｌｅ
　　样品在约４１０ｎｍ有吸收峰，芦丁在约４２０ｎｍ有吸收
峰。略有偏差，且对比图１无论是否加入ＡｌＣｌ３，样品液在约
４１０ｎｍ均有吸收峰，杂质干扰强烈，故不宜用ＡｌＣｌ３ 法测定。
ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ法的对比图如图３。
Ｆｉｇ．３　ＵＶ－Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｒｕｔｉｎ　ｂｙ
ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ　ｍｅｔｈｏｄ
１：Ｒｕｔｉｎ；２：Ｓａｍｐｌｅ
　　两者在约５００ｎｍ均有吸收峰，原样在此处也无杂质峰
干扰，因此，可以用ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ法测定甜菊叶
废渣中的总黄酮。
２．２　显色剂加入量的选择
按１．２．３步骤显色，改变ＮａＮＯ２ 用量，用可见分光光度
计测吸光度，结果如表１所示。
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ｎｉｔｒｉｔｅ　ｏｎ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
ＮａＮＯ２／ｍＬ　 ０．５　 １．０　 ２．０　 ３．０　 ４．０
吸光度 ０．２０６　 ０．２１４　 ０．２１３　 ０．２０８　 ０．２０４
　　ＮａＮＯ２ 在１．０～２．０ｍＬ范围内最佳，本实验选择１．０
ｍＬ。
改变Ａｌ（ＮＯ３）３ 加入量，对应吸光度如表２所示。
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｌｕｍｉｎｉｕｍ　ｎｉｔｒａｔｅ　ｏｎ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
Ａｌ（ＮＯ３）３／ｍＬ　 ０．５　 １．０　 １．５　 ２．０　 ２．５　 ３．０
吸光度 ０．２０７　 ０．２１３　 ０．２１２　 ０．２１３　 ０．２１１ －①
　　①注：“－”表示液体浑浊无法测定，下同
　　Ａｌ（ＮＯ３）３ 在１．０～２．０ｍＬ范围皆可。本实验选择１．０
ｍＬ。
改变ＮａＯＨ加入量，对应的吸光度如表３所示。
Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ　ｏｎ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
ＮａＯＨ／ｍＬ　１０．０　 １１．０　 １２．０　 １３．０　 １４．０　 １５．０　 １６．０
吸光度 ０．２１１　 ０．２１０　 ０．２１２　 ０．２１６　 ０．２１９　 ０．２２０ －
　　故加入 ＮａＯＨ　１４．０～１５．０ｍＬ皆可。本实验选择１５．０
ｍＬ。
２．３　显色剂时间的选择
改变ＮａＮＯ２ 加入后静置时间，对应的吸光度如表４所
示。
１２８２第１０期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　光谱学与光谱分析
Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｗｉｔｈ　ｓｏｄｉｕｍ
ｎｉｔｒｉｔｅ　ｏｎ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
时间／ｍｉｎ 吸光度 时间／ｍｉｎ 吸光度
２　 ０．２０９　 １２　 ０．２１４
４　 ０．２１３　 １４　 ０．２１２
６　 ０．２１４　 １６　 ０．２１３
８　 ０．２１３　 １８　 ０．２１１
１０　 ０．２１３　 ２０　 ０．２１０
　　４ｍｉｎ后，反应趋于稳定，２０ｍｉｎ后似乎略有下降，本实
验选择６ｍｉｎ。
改变加入Ａｌ（ＮＯ３）３ 后的静置的时间，对应吸光度如表
５所示。
Ｔａｂｌｅ　５　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｗｉｔｈ　ａｌｕｍｉｎｉｕｍ
ｎｉｔｒａｔｅ　ｏｎ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
时间／ｍｉｎ 吸光度 时间／ｍｉｎ 吸光度
２　 ０．２１５　 １４　 ０．２２０
４　 ０．２２０　 １６　 ０．２２１
６　 ０．２２１　 １８　 ０．２２４
８　 ０．２２１　 ２０　 ０．２２４
１０　 ０．２２２　 ２２　 ０．２２６
１２　 ０．２１９
　　反应于４ｍｉｎ后趋于稳定，１８ｍｉｎ后吸光度略有偏高，
本实验选择６ｍｉｎ。
改变ＮａＯＨ加入后的静置时间，对应吸光度如表６所
示。
Ｔａｂｌｅ　６　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｗｉｔｈ　ｓｏｄｉｕｍ
ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ　ｏｎ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
时间／ｍｉｎ 吸光度 时间／ｍｉｎ 吸光度
５　 ０．２１８　 ３５　 ０．２１９
１０　 ０．２１９　 ４０　 ０．２２０
１５　 ０．２２１　 ４５　 ０．２１７
２０　 ０．２２１　 ５０　 ０．２１６
２５　 ０．２２０　 ５５　 ０．２１７
３０　 ０．２２１
　　反应从５ｍｉｎ开始就趋于稳定，４５ｍｉｎ后吸光度偏低，
本实验选择１５ｍｉｍ。
２．４　温度的选择
按１．２．３步骤显色，整个过程用水浴控制反应温度，对
应吸光度如表７所示。
Ｔａｂｌｅ　７　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
温度／℃ 吸光度 温度／℃ 吸光度
２５　 ０．２１７　 ４５　 ０．２２５
３０　 ０．２２０　 ５０　 ０．２１６
３５　 ０．２２１　 ５５　 ０．２１０
４０　 ０．２３０
　　吸光度随温度上升而上升，４０℃后开始下降，故温度需
控制在４０℃。
２．５　ｐＨ的选择
按１．２．３显色，调节ｐＨ，对应的吸光度如表８所示。
Ｔａｂｌｅ　８　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｖａｌｕｅ　ｏｎ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
ｐＨ　 ２　 ３　 ４　 ５　 ６　 ７　 ８
吸光度 ０．１３５　 ０．２０５　 ０．２０９　 ０．２１６　 ０．２１７　 ０．２０６　 ０．２０５
　　ｐＨ在５～６时吸光度较准确，考虑样液本身的ｐＨ约为
５，故无需调节ｐＨ。
２．６　标准工作曲线
分别取芦丁对照品０．０，０．５，１．０，２．０，３．０，４．０，５．０，
６．０ｍＬ于５０ｍＬ容量瓶，温度为４０℃，ｐＨ为５，加入５０．０
ｍｇ·ｍＬ－１的 ＮａＮＯ２１．０ｍＬ，摇匀，静置６ｍｉｎ；１００．０
ｍｇ·ｍＬ－１的 Ａｌ（ＮＯ３）３１．０ｍＬ，摇匀，静置６ｍｉｎ；４０．０
ｍｇ·ｍＬ－１的ＮａＯＨ　１５．０ｍＬ，９５％乙醇定容至刻度，摇匀，
静置１５ｍｉｎ。以不加芦丁为参比，测定各自吸光度，制作标
准工作曲线，如图４。
Ｆｉｇ．４　Ｒｕｔｉｎ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ
　　根据 Ｏｒｉｇｉｎ软件显示：方程为ｙ＝０．００２　５６＋１３．４２４
３ｘ，在２～２４μｇ·ｍＬ
－１范围内成良好的线性关系，线性相
关系数Ｒ２＝０．９９９　５，方法检出限为１．４４μｇ·ｍＬ
－１。
２．７　重现性实验
取１０．０ｍｇ提取物，９５％乙醇溶解定容至５０ｍＬ容量
瓶，得样品液，按２．６中条件显色，在５００ｎｍ测定，以上过
程重复６次，结果如表９。
Ｔａｂｌｅ　９　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
次数 １　 ２　 ３　 ４　 ５　 ６
吸光度 ０．１９６　 ０．１９７　 ０．１９７　 ０．１９７　 ０．１９８　 ０．１９７
　　计算ＲＳＤ＝０．３５％，在±５％范围内，重现性良好。
２．８　稳定性实验
按上述过程显色，在５００ｎｍ处每隔１０ｍｉｎ测定一次，
结果如表１０。
２２８２ 光谱学与光谱分析　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 第３５卷
Ｔａｂｌｅ　１０　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
时间／ｍｉｎ　 ０　 １０　 ２０　 ３０　 ４０　 ５０　 ６０
吸光度 ０．１９６　 ０．１９４　 ０．１９７　 ０．１９７　 ０．１９５　 ０．１９３　 ０．１９０
Ｔａｂｌｅ　１１　Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
实验编号 １　 ２　 ３　 ４　 ５　 ６
芦丁加入量／ｍｇ　 ０．０　 ０．１　 ０．２　 ０．３　 ０．４　 ０．５
吸光度 ０．０６８　 ０．０９４　 ０．１１９　 ０．１４５　 ０．１８０　 ０．２０４
０．０６８　 ０．０９５　 ０．１１８　 ０．１４５　 ０．１８０　 ０．２０６
０．０６９　 ０．０９５　 ０．１１９　 ０．１４６　 ０．１７９　 ０．２０５
平均值 ０．０６８　 ０．０９５　 ０．１１９　 ０．１４５　 ０．１８０　 ０．２０５
测定总含量／ｍｇ　 ０．２４４　 ０．３４５　 ０．４３４　 ０．５３１　 ０．６６１　 ０．７５６
回收率／％ １００．０　 １０１．０　 ９６．０　 ９６．０　 １０４．３　 １０２．４
　　在４０ｍｉｎ后似乎略有下降，计算４０ｍｉｎ内的 ＲＳＤ＝
０．５９％，稳定性良好，故在ＮａＯＨ加入静置１５ｍｉｎ后，尽量
在４０ｍｉｎ内测定。
２．９　加标回收率实验
取上述样品液各１．０ｍＬ，分别加入０．２ｍｇ·ｍＬ－１的芦
丁对照液０．０，０．５，１．０，１．５，２．０，２．５ｍＬ，按２．６条件显
色，在５００ｎｍ处测定，各重复３次，结果如表１１。
　　加标回收率均在９５％～１０５％范围内，ＲＳＤ＝３．７５％。
结果较为可靠。
３　结　论
　　通过紫外光谱分析，认为 ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ 法
测定甜菊叶废渣中的总黄酮较为合适，在波长５００ｎｍ，以芦
丁为标准品，在２～２４μｇ·ｍＬ
－１范围内成良好的线性关系，
线性相关系数 Ｒ２＝０．９９９　５。样品加标回收率在９６％～
１０４．３％之间，ＲＳＤ＝３．７５％。ＮａＮＯ２，Ａｌ（ＮＯ３）３，ＮａＯＨ加
入量和反应时间应分别为１．０，１．０，１５．０ｍＬ和６，６，１５
ｍｉｎ，温度为４０℃，ｐＨ为５，重现性好，稳定性高。由此得
出，该法具有设备不复杂，操作简单快捷，结果较为准确，
成本极低等优点，可以用于测定甜叶菊废渣中总黄酮的含
量。
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ
［１］　ＷＥＮ　Ｋａｉ－ｘｉｎ，ＷＡＮＧ　Ｃｈｅｎｇ－ｚｈａｎｇ，ＹＡＮ　Ｘｕｅ－ｂｉｎ，ｅｔ　ａｌ（文开新，王成章，严学斌，等）．Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ（草业科学），２０１０，２７
（６）：１１５．
［２］　ＺＨＵ　Ｗｅｎ－ｚｈｅｎ，ＭＡ　Ｌｏｎｇ，ＬＩ　Ｇｕｏ－ｒｏｎｇ（朱文振，马　龙，李国荣）．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｂｕｌｅｔｉｎ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ（生命科学），２０１２，２４（５）：４４４．
［３］　Ｔｉｍ　Ｔ　Ｐ　Ｃｕｓｈｎｉｅ，Ａｎｄｒｅｗ　Ｊ　Ｌａｍｂ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｇｅｎｔｓ，２００５，２６：３４３．
［４］　ＺＨＡＮＧ　Ｑｉｕ－ｙａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｆｕ－ｐｉｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｑｉｕ－ｈｕａ，ｅｔ　ａｌ（张秋燕，张福平，陈秋华，等）．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（辽宁中医药大学学报），２０１４，１６（３）：３０．
［５］　Ｌｉｎ　Ｙ，Ｖｅｒｍｅｅｒ　Ｍ　Ａ，Ｂｏｓ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１，５９（９）：４４９６．
［６］　ＷＡＮＧ　Ｋｅ，ＷＡＮＧ　Ｙｏｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｄｏｎｇ－ｂａｏ，ｅｔ　ａｌ（王　柯，王　勇，赵东保，等）．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（分析试验
室），２０１１，３０（２）：２８．
［７］　ＭＵ　Ｈｏｎｇ－ｌｅｉ，ＧＡＯ　Ｈａｉ－ｙａｎ，ＣＨＥＮ　Ｈａｎｇ－ｊｕｎ，ｅｔ　ａｌ（穆宏磊，郜海燕，陈杭君，等）．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（中国食品学报），２０１０，１０（２）：２０１．
［８］　ＲＡＮ　Ｙｕｅ，ＪＩＡＯ　Ｂｉ－ｎｉｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｑｉ－ｙａｎｇ，ｅｔ　ａｌ（冉　玥，焦必宁，赵其阳，等）．Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ（食品科学）．２０１３，３４（４）：１６８．
［９］　ＭＥＮＧ　Ｍｅｉ－ｊｉａ，ＺＥＮＧ　Ｈａｉ－ｓｏｎｇ，ＬＩ　Ｊｉｎｇ，ｅｔ　ａｌ（孟美佳，曾海松，李　静，等）．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ（药物分析杂
志），２０１０，３０（３）：４０５．
［１０］　ＣＨＩ　Ｙｕ－ｍｅｉ，ＪＵ　Ｌｉｎｇ，ＤＥＮＧ　Ｈａｉ－ｓｈａｎ，ｅｔ　ａｌ（池玉梅，居　羚，邓海山，等）．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（分析化学），
２０１０，３８（６）：８９３．
［１１］　ＹＡＯ　Ｘｉｎ－ｓｈｅｎｇ（姚新生）．Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（天然药物化学）．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｈｏｕｓｅ（北京：
人民卫生出版社），２００１．２０７．
［１２］　ＳＨＩ　Ｇａｏ－ｆｅｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｈｏｎｇ－ｙｕ，ＷＡＮＧ　Ｇｕｏ－ｙｉｎｇ，ｅｔ　ａｌ（史高峰，王红玉，王国英，等）．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ
Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｆｏｒｍｕｌａｅ（中国实验方剂学杂志），２０１２，１８（２２）：６２．
［１３］　ＺＨＡＮＧ　Ｐｅｉ－ｃｈｅｎｇ（张培成）．Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ（黄酮化学）．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｐｒｅｓｓ（北京：化学工业出版社），２００８．２３９．
３２８２第１０期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　光谱学与光谱分析
Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｆｏｒ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ
Ｗａｓｔｅ　Ｒｅｓｉｄｕｅ　ｏｆ　Ｓｔｅｖｉａ　Ｒｅｂａｕｄｉａｎａ
ＬＵＯ　Ｘｕ－ｙａｎ，ＦＡＮＧ　Ｈａｏ－ｂｉｎ＊，ＨＵＡＮＧ　Ｒｕｉ－ｙｕ，ＺＨＡＯ　Ｄｏｎｇ－ｆａｎｇ，ＺＨＵ　Ｔｉｎｇ，ＧＵＯ　Ｙａｎｇ－ｙａｎｇ，ＺＥＮＧ　Ｙｉ－ｐｉｎｇ，
ＬＩＵ　Ｒｅｎ－ｙｕｅ，ＺＨＵ　Ｄｏｎｇ
Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｍｅｔａｌｕｒｇｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇａｎｚｈｏｕ　３４１０００，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　Ｗａｓｔｅ　Ｒｅｓｉｄｕｅ　ｏｆ　Ｓｔｅｖｉａ　Ｒｅｂａｕｄｉａｎａ　ｗａｓ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ＵＶ－Ｖｉｓ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｗｉｔｈ　ｔｈｒｅｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｄｉｒｅｃｔ，ＡｌＣｌ３ａｎｄ　ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－
ＮａＯＨ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ａｎａｌｙｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ，ｔｈｅ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｆ　ｃｏｌｏｒ　ｄｅｖｅｌ－
ｏｐｍｅｎｔ　ｒｅａｇｅｎｔ，ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐＨ．Ｔｈｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ａｎａｌｙｚｉｎｇ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒ－
ｂａｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｃｏｌｏｒ　ｓｙｓｔｅｍ，ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｓｏ　ｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＮａＮＯ２－
Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｂｅｓｔ．Ｔｈｅ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　５００ｎｍ．Ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ　ｒｕｔｉｎ．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａ－
ｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅｓ　ｏｆ　２～２４μｇ·ｍＬ
－１，ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　Ｒ２＝０．９９９　５．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ
９６．０％～１０４．３％．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎ（ＲＳＤ）ｉｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　３．７５％．Ｔｈｅ　ｄｏｓａｇｅｓ　ｏｆ　ＮａＮＯ２ａｎｄ　Ａｌ（ＮＯ３）３ｂｏｔｈ
ｗｅｒｅ　１．０ｍＬ，ｂｏｔｈ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　６ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｆ　ＮａＯＨ　ｗａｓ　１５．０ｍＬ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　１５ｍｉｎ．Ｔｈｅ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｗｈｏｌｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍｕｓｔ　ｂｅ　ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ　ａｔ　４０℃ａｎｄ　ｐＨ　ｉｓ　５．Ｔｈｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｗａｓ
ｆｕｒｔｈｅｒ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ．Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ，ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｃｙ，ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ
ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｗａｓｔｅ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｏｆ　ｓｔｅｖｉａ　ｒｅｂａｕｄｉａｎａ；Ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
（Ｒｅｃｅｉｖｅｄ　Ｊｕｌ．１，２０１４；ａｃｃｅｐｔｅｄ　Ｎｏｖ．６，２０１４）　　
＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ
４２８２ 光谱学与光谱分析　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 第３５卷